绵羊FecB基因的原核表达及其抗体制备.pdf

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1、●0T-6BRICULTURAE华北农学报·2015，30(3)：31．36l_哪tl-IlHIC-绵羊FecB基因的原核表达及其抗体制备丁强，张利平，贾建磊，王静，张勇(甘肃农业大学动物科学技术学院，甘肃兰州730070)摘要：为了进一步研究cB基因，利用PCR—RFLP技术筛选出FecB基因，PCR扩增FecB基因编码区序列1509bp，利用限制性内切酶BamHI和EcoRI定向插人原核表达载体pET30a(+)，构建原核表达载体pET30a(+)一FecB，诱导表达纯化重组蛋白，免疫小鼠制备多克隆抗体，WesternBlot检测重组蛋白的免疫活性，ELISA检

2、测抗体效价。结果表明，成功的构建了绵羊FecB基因的原核表达载体，并在大肠杆菌中表达目的蛋白，经过4次免疫后，获得多克隆抗体，ELISA方法检测小鼠抗体免疫效价达到1：32000，纯化的蛋白具有免疫活性。为研究绵羊FecB基因蛋白的功能提供参考。关键词：FecB基因；原核表达；蛋白纯化；多克隆抗体制备中图分类号：Q78文献标识码：A文章编号：1000—7091(2015)03—0031—06dol：10．7668／hbnxb．2015．03．006ProkaryoticExpressionofFecBGeneandGenerationofItsPolyclonalA

3、ntibodyDINGQiang，ZHANGLi—ping，JIAJian—lei，WANGJing，ZHANGYong(CollegeofAnimalScienceandTechnology，GansuAgriculturalUniversity，Lanzhou730070，China)Abstract：FurtherstudyonFecBgene，thecompleteFecBgenewasamplifiedwithPCRmethodusingapairofspecificprimersdesignedaccordingtotherelevantnucleoti

4、desequencefromGenBank．AndFecBgenewasclonedintovectorpET30a(+)forexpressedinE．coliBL21(DE3)．Theexpressionof6×HisandFecBfusionproteinwasinducedbyIPTG，thenpurifiedbyNi-NTAchromat0graphicmethod．Polyclonalantibodieswerepreparedbyim—munizedmicewiththepurifiedrecombinantprotein．Expressionofth

5、etargetproteinwasdetectedbySDS-PAGE，thespecificityandtiteroftheantibodyinanti-serawasdeterminedbyWesternBlotandELISArespectively．There—combinantFecBcanbeexpressedbyIPTGinductionandpurifiedbyNi—NTAresin．TheresultsofELISAandWest-ernBlotprovedthatpolyclonalantiserumpreparedwithpurifiedrec

6、ombinantFecBasantigenhashightitration(>1：32000)andspecificity．AmethodforprokaryoticexpressionandpurificationofsheepFecBwasestablishedandtheanti—FecBpolyclonalantibodywithhightitrationandspecificitywereobtained．Theseresultswouldprovidereli—abletoolsforthefuturestudyonFecBfunction．Keywor

7、ds：FecBgene；Prokaryoticexpression；Proteinpurification；PolyelonalantibodyFecB基因是在布鲁拉美利奴羊中发现的与高被绵、山羊遗传命名委员会正式定名为FecB(即Fe—繁殖率相关的主效基因。FecB基因位于绵羊6号cundityB=Booroola)基因H。柳淑芳等以BM—常染色体，对绵羊的排卵率及产羔数有很大影PR一馏基因和BMP15基因作为多胎性能候选基因响。该基因实际为骨骼形态发生蛋白IB型受对小尾寒羊的研究证明，BMPR—IB基因的BB基因体基因(BMPR-IB，即Bonemorpho