赛莱西布对肝癌hepg2细胞增殖与凋亡影响的论文

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1、赛莱西布对肝癌HepG2细胞增殖与凋亡影响的论文【关键词】hepg2细胞;环氧合酶-2；赛莱西布；增殖;凋亡　　摘要：目的探讨选择性环氧合酶-2(cox-2)抑制剂赛莱西布(celecoxib)对人肝癌细胞株hepg2细胞增殖、凋亡的影响及其可能的作用机制。方法用不同浓度的赛来西布处理hepg2细胞，分别应用四甲基偶氮噻唑蓝试验、dna梯度电泳法、放射免疫法检测赛亚西布对hepg2细胞增殖和凋亡及其cox-2活性的影响；应用免疫印迹法和比色法检测赛莱西布对hepg2细胞胱氨酸蛋白酶3(clasepase-3)蛋白质的表达及活性的影响。结果125，25，50μmol/l的赛莱西布作用于hepg2

2、细胞后，hepg2细胞增殖受抑制，与对照组比较，差异有统计学意义(p<001)；赛莱西布干预组hepg2细胞dna明显降解，可见细胞凋亡特征性梯状dna条带；干预组hepg2细胞caspase3蛋白表达及活性均明显升高，与对照组比较，差异均有统计学意义(p<001)；赛莱西布明显抑制hepg2细胞cox-2活性，与对照组比较，差异有统计学意义(p<001)。结论赛莱西布可通过cox-2通路和caspase3通路抑制hepg2细胞增殖并诱导其凋亡。　　关键词：hepg2细胞;环氧合酶-2；赛莱西布；增殖;凋亡　　effectsofcyclooxygenase-2onprolif

3、erationandapoptosisinhepg2cells　　yuhongping,chouxiaoqiang,zengxiaoyun,etal.　　departmentofepidemiologyandstatistics,schoolofpublichealth,guangximedicaluniversity(nanning,530021,china)　　abstract：objectivetoexaminetheeffectsofaselectiveinhibitorofcox-2,celecoxibongroethodshepg2cellseasuredbymtt,apoptos

4、isentationassay,andcox-2activityeasuredbyria;expressionofcaspase-3proteininhepg2cellsinedbyeasuredusingcolorimetricassay.resultsafterhepg2cellsol/l),celecoxibcouldsignificantlysuppressthegroalladder,thecharacteristicsofcellsundergoingapoptosis;meanore,thelevelofcox-2activitymatorydrugs，nsaids)具有预防和辅

5、助治疗肿瘤尤其胃肠道肿瘤的作用〔6〕，但nsaids抑制肿瘤的作用机制尚不明确。本研究选择nsaids类药物中的1种高选择性cox-2抑制剂赛莱西布(赛来西布)，作用于人肝癌细胞株hepg2观察其对hepg2细胞增殖与凋亡的影响，并探讨其可能的作用机制。结果报告如下。　　1材料与方法　　11材料　　111试剂赛莱西布(celecoxib，美国cayman公司)；四甲基偶氮噻唑蓝(mtt，上海华美生物工程公司)；二硫代苏糖醇(dtt，美国promega公司)；兔抗aspase-3抗体、兔抗人cox-2多克隆抗体(美国santacruz公司)；底物ac-devd-pna(n-acetyl-asp-

6、glu-val-asp-p-nitroanilide)、核糖核酸酶-a(rnasea)、4-(2-羟乙基)-1-哌嗪乙烷磺酸(hepes)、苯甲基磺酰氟(pmsf)、蛋白酶抑制剂(aprotinin，美国sigma公司)，rmpi-1640培养基、小牛血清美国gibco公司)；pge2放射免疫测定试剂盒(苏州大学医学院)。　　112仪器5415r低温台式高速离心机(德国eppendorf公司)；hve50凝胶成像系统(美国syngene公司)；gs-930薄层扫描图像分析仪(日本岛津公司)；2123tc型co2培养箱(美国sheldon公司)；elx800酶标仪(美国bio-tek公司)。　　

7、12方法　　121细胞培养人肝肿瘤细胞株hepg2由广西医科大学实验中心保存。hepg2细胞为贴壁细胞，用含10%小牛血清、100u/ml青霉素和100μg/ml链霉素的rpmi-1640培养基在37℃、饱和湿度及5%co2的细胞培养箱内传代培养。　　122mtt法测定赛莱西布对hepg2细胞增殖的影响用25g/l胰蛋白酶消化对数生长期的hepg2细胞制备单细胞悬液。以每孔5×103个细胞接种于9