赛莱西布对肝癌hepg2细胞增殖与凋亡影响论文

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1、赛莱西布对肝癌HepG2细胞增殖与凋亡影响论文【关键词】,HepG2细胞;环氧合酶-2；赛莱西布；增殖;凋亡摘要：目的探讨选择性环氧合酶-2(cox-2)抑制剂赛莱西布(celecoxib)对人肝癌细胞株HepG2细胞增殖、凋亡的影响及其可能的作用机制。方法用不同浓度的赛来西布处理HepG2细胞，分别应用四甲基偶氮噻唑蓝试验、DNA梯度电泳法、放射免疫法检测赛亚西布对HepG2细胞增殖和凋亡及其cox-2活性的影响；应用免疫印迹法和比色法检测赛莱西布对HepG2细胞胱氨酸蛋白酶3(clasepase-3)蛋白质的表达及活性的影响。

2、结果125，25，50μmol/L的赛莱西布作用于HepG2细胞后，HepG2细胞增殖受抑制，与对照组比较，差异有统计学意义(P001)；赛莱西布干预组HepG2细胞DNA明显降解，可见细胞凋亡特征性梯状DNA条带；干预组HepG2细胞caspase3蛋白表达及活性均明显升高.freelinetheeffectsofaselectiveinhibitorofcox-2,celecoxibongroeasuredbyMTT,apoptosisentationassay,andcox-2activityeasuredbyRIA;Exp

3、ressionofcaspase-3proteininHepG2cellsinedbyeasuredusingcolorimetricassay.ResultsAfterHepG2cellsol/L),celecoxibcouldsignificantlysuppressthegroalladder,thecharacteristicsofcellsundergoingapoptosis;Meanore,thelevelofcox-2activitymatorydrugs，NSAIDs)具有预防和辅助治疗肿瘤尤其胃肠道肿瘤的作用〔

4、6〕，但NSAIDs抑制肿瘤的作用机制尚不明确。本研究选择NSAIDs类药物中的1种高选择性cox-2抑制剂赛莱西布(赛来西布)，作用于人肝癌细胞株HepG2观察其对HepG2细胞增殖与凋亡的影响，并探讨其可能的作用机制。结果报告如下。1材料与方法11材料111试剂赛莱西布(celecoxib，美国Cayman公司)；四甲基偶氮噻唑蓝(MTT，上海华美生物工程公司)；二硫代苏糖醇(DTT，美国Promega公司)；兔抗aspase-3抗体、兔抗人cox-2多克隆抗体(美国SantaCruz公司)；底物Ac-DEVD-pNa(N-A

5、cetyl-Asp-Glu-Val-Asp-p-Nitroanilide)、核糖核酸酶-A(RNaseA)、4-(2-羟乙基)-1-哌嗪乙烷磺酸(Hepes)、苯甲基磺酰氟(PMSF)、蛋白酶抑制剂(aprotinin，美国Sigma公司)，RMPI-1640培养基、小牛血清美国Gibco公司)；PGE2放射免疫测定试剂盒(苏州大学医学院)。112仪器5415R低温台式高速离心机(德国Eppendorf公司)；HVE50凝胶成像系统(美国SYNGENE公司)；GS-930薄层扫描图像分析仪(日本岛津公司)；2123TC型CO2培养

6、箱(美国Sheldon公司)；ELX800酶标仪(美国Bio-Tek公司)。12方法121细胞培养人肝肿瘤细胞株HepG2由广西医科大学实验中心保存。HepG2细胞为贴壁细胞，用含10%小牛血清、100U/ml青霉素和100μg/ml链霉素的RPMI-1640培养基在37℃、饱和湿度及5%CO2的细胞培养箱内传代培养。122MTT法测定赛莱西布对HepG2细胞增殖的影响用25g/L胰蛋白酶消化对数生长期的HepG2细胞制备单细胞悬液。以每孔5×103个细胞接种于96孔培养板，24h后换液，加入不同浓度赛莱西布使其终浓度分别为125

7、，25，50μmol/L。设不进行药物干预的细胞为对照组。每种浓度平行4个复孔，继续培养。MTT法〔7〕测定赛莱西布对HepG2细胞增殖的影响。123DNA梯度电泳法检测HepG2细胞凋亡DNA片断将1×106个细胞接种于100ml培养瓶，细胞贴壁后换液，加入赛莱西布使其终浓度分别为125，50μmol/L。设不进行药物干预的细胞为对照组。继续培养48h，提取细胞基因组DNA，应用DNA梯度电泳法〔7〕检测HepG2细胞凋亡DNA片断。电泳结果用HVE50凝胶成像系统观察、分析、拍照。124放射免疫法检测HepG2细胞cox-2活

8、性前列腺素E2(PGE2)是cox-2催化花生四烯酸产生前列腺素的主要产物，可用细胞分泌PGE2的水平来反映cox-2的活性。因此，可采用赛莱西布对HepG2细胞分泌PGE2的能力的影响来反它对cox-2活性的影响：以1×106/孔的密度将HepG