赛莱西布对肝癌hepg2细胞增殖与凋亡影响

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1、赛莱西布对肝癌HepG2细胞增殖与凋亡影响【关键词】,HepG2细胞;环氧合酶-2；赛莱西布；增殖;凋亡　　摘要：目的探讨选择性环氧合酶-2(cox-2)抑制剂赛莱西布(celecoxib)对人肝癌细胞株HepG2细胞增殖、凋亡的影响及其可能的作用机制。方法用不同浓度的赛来西布处理HepG2细胞，分别应用四甲基偶氮噻唑蓝试验、DNA梯度电泳法、放射免疫法检测赛亚西布对HepG2细胞增殖和凋亡及其cox-2活性的影响；应用免疫印迹法和比色法检测赛莱西布对HepG2细胞胱氨酸蛋白酶3(clasepase-3)蛋白质的表达及活性的影响。

2、结果125，25，50μmol/L的赛莱西布作用于HepG2细胞后，HepG2细胞增殖受抑制，与对照组比较，差异有统计学意义(P<001)；赛莱西布干预组HepG2细胞DNA明显降解，可见细胞凋亡特征性梯状DNA条带；干预组HepG2细胞caspase3蛋白表达及活性均明显升高，与对照组比较，差异均有统计学意义(P<001)；赛莱西布明显抑制HepG2细胞cox-2活性，与对照组比较，差异有统计学意义(P<001)。结论赛莱西布可通过cox-2通路和caspase3通路抑制HepG2细胞增殖并诱导其凋亡。　　关键

3、词：HepG2细胞;环氧合酶-2；赛莱西布；增殖;凋亡　　Effectsofcyclooxygenase-2onproliferationandapoptosisinHepG2cells　　Abstract：ObjectiveToexaminetheeffectsofaselectiveinhibitorofcox-2,celecoxibongroeasuredbyMTT,apoptosisentationassay,andcox-2activityeasuredbyRIA;Expressionofcaspase-3protEin

4、inHepG2cellsinedbyeasuredusingcolorimetricassay.ResultsAfterHepG2cellsol/L),celecoxibcouldsignificantlysuppressthegroalladder,thecharacteristicsofcellsundergoingapoptosis;Meanore,thelevelofcox-2activitymatorydrugs，NSAIDs)具有预防和辅助治疗肿瘤尤其胃肠道肿瘤的作用〔6〕，但NSAIDs抑制肿瘤的作用机制尚不明确。本

5、研究选择NSAIDs类药物中的1种高选择性cox-2抑制剂赛莱西布(赛来西布)，作用于人肝癌细胞株HepG2观察其对HepG2细胞增殖与凋亡的影响，并探讨其可能的作用机制。结果报告如下。　　1材料与方法　　11材料　　111试剂赛莱西布(celecoxib，美国Cayman公司)；四甲基偶氮噻唑蓝(MTT，上海华美生物工程公司)；二硫代苏糖醇(DTT，美国Promega公司)；兔抗aspase-3抗体、兔抗人cox-2多克隆抗体(美国SantaCruz公司)；底物Ac-DEVD-pNa(N-Acetyl-Asp-Glu-Val-A

6、sp-p-Nitroanilide)、核糖核酸酶-A(RNaseA)、4-(2-羟乙基)-1-哌嗪乙烷磺酸(Hepes)、苯甲基磺酰氟(PMSF)、蛋白酶抑制剂(aprotinin，美国Sigma公司)，RMPI-1640培养基、小牛血清美国Gibco公司)；PGE2放射免疫测定试剂盒(苏州大学医学院)。　　112仪器5415R低温台式高速离心机(德国Eppendorf公司)；HVE50凝胶成像系统(美国SYNGENE公司)；GS-930薄层扫描图像分析仪(日本岛津公司)；2123TC型CO2培养箱(美国Sheldon公司)；EL

7、X800酶标仪(美国Bio-Tek公司)。　　12方法　　121细胞培养人肝肿瘤细胞株HepG2由广西医科大学实验中心保存。HepG2细胞为贴壁细胞，用含10%小牛血清、100U/ml青霉素和100μg/ml链霉素的RPMI-1640培养基在37℃、饱和湿度及5%CO2的细胞培养箱内传代培养。　　122MTT法测定赛莱西布对HepG2细胞增殖的影响用25g/L胰蛋白酶消化对数生长期的HepG2细胞制备单细胞悬液。以每孔5×103个细胞接种于96孔培养板，24h后换液，加入不同浓度赛莱西布使其终浓度分别为125，25，50μmol/

8、L。设不进行药物干预的细胞为对照组。每种浓度平行4个复孔，继续培养。MTT法〔7〕测定赛莱西布对HepG2细胞增殖的影响。　　123DNA梯度电泳法检测HepG2细胞凋亡DNA片断将1×106个细胞接种于100ml培养瓶，细胞贴壁后换液，加入赛莱西