载脂蛋白e基因多态性与轻度认知障碍的关系论文

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1、载脂蛋白E基因多态性与轻度认知障碍的关系论文.freelildcognitiveimpairment(MCI).MethodsRFLP-PCRtechnologyisappliedtoanalysetheapoEallelefrequencyof56MCIpatientsand89controls.ResultsAmongthe56casesofMCI，thefrequencyofapoEε2，ε3，ε4are7.14%，71.38%.freelentsuggestthatthereissignificantd

2、ifference（P0.01）.ConclusionTheapoEε4alleleisageicriskfactorofMCI.【Keyildcognitiveimpairment;polymorphism;apolipoproteinE;genotypes轻度认知障碍（mildcognitiveimpairment，MCI）特指有轻度记忆或认知损害、但无痴呆的老年人，其病因不能由已知的医学或神经精神病状况解释。目前普遍认为MCI是介于年龄相关性记忆损害（age-associatedmemoryimpairm

3、ent，AAMI）和老年性痴呆（Alzheimersdisease，AD）之间的一种综合征。许多资料表明：MCI患者进展为AD（主要指散发性AD）的年转化率是同龄认知功能正常老年人的10倍，识别MCI患者将有助于早期干预和治疗，所以MCI相关研究成为近年来国内外的热门话题。近年来，越来越多的研究发现多个基因，如淀粉样蛋白前体（APP）基因、早老素-1（PS-1）基因、早老素-2（PS-2）基因、载脂蛋白E（apoE）等位基因和低密度脂蛋白受体相关蛋白基因等遗传因子在调控AD病理和生化异常代谢中起着重要作用。其

4、中，位于19号染色体的apoE基因是资料与目前唯一广泛得以认同的与散发性AD和迟发性家族性AD相关的基因。本研究旨在探讨apoE基因多态性与MCI之间的关系，为MCI易进展为AD寻找遗传学依据。1资料与方法1.1一般资料研究对象源自武汉市中心医院2002年7月~2003年6月神经内科和干部四科门诊和病房，所有对象的文化程度均在中学及以上，分为MCI组和对照组。MCI组56例，男23例，女33例；年龄61～89岁，平均（70.12±7.24）岁。依据1997年Peterson等确立的诊断依据确定MCI组入选标准如

5、下：（1）有记忆力减退的主诉；（2）检查时证明有轻度记忆损害；（3）没有或很少有其他认知损害；（4）日常生活活动正常（BI指数≥95分）；（5）满足CDR=0.5的标准；（6）MMSE评分≥24分，但≤27分；（7）不够NINDS-ADRDA或DSMⅢ-R对痴呆的标准。排除标准：（1）昏迷；（2）失语和（或）精神异常（如抑郁、谵妄）而不能配合量表检查者。对照组89例，男46例，女43例；年龄60～88岁，平均（69.47±8.02）岁。均符合下述入选标准：（1）无记忆力减退的主诉；（2）检查时排除认知缺损、CD

6、R=0；（3）日常生活活动正常；（4）MMSE评分＞27分；（5）年龄、性别、受教育程度、既往高血压、糖尿病、心脏病及卒中史均与MCI组匹配。对照组和MCI组在年龄上差异无显著性（P0.05）。1.2研究方法1.2.1基因学检查用PCR-RFLP方法测定apoE基因型。实验步骤如下：（1）空腹12h后，取肘静脉血5ml，EDTANa2抗凝，用酚：氯仿抽提白细胞中的DNA，使纯度达到A280/A2601.8；（2）PCR扩增目的基因片段：参照文献［1］，引物设计如下：上游引物为5’-TAAGCTTGGCACGGC

7、TGTCCAAGGA-3’和5’-ACAGAATTCGCCCCGGCCTGGTACAC-3’。扩增体系为50μl。PCR的条件为95℃变性5min，之后35次循环（94℃变性1min，62℃退火1min，72℃延伸1min），72℃继续延伸10min后降至4℃，用1.6%琼脂糖凝胶电泳待测扩增产物；（3）限制性片段长度多态性（RFLP）分析：取10μlPCR产物，加10uHhaI内切酶消化，37℃酶切4h，非变性聚丙烯酰胺浓度为0.1g/L，交联度为49∶1，取5μl酶切产物，加等体积的甲酰胺变性液，在电压10

8、0～200V，温度20℃条件下，电泳5h左右；（4）银染：电泳结束后，用乙酸固定，纯水洗，银染液染色（1.4g/L，AgNO3和甲醛），纯水洗，加显色液（30g/L，Na2CO3，甲醇400μg/L，Na2S2O3）显色，乙酸终止反应，根据电泳带型确定apoE基因型。拍片。1.2.2统计学分析使用SPSS10.0处理数据，计算各等位基因和基因型频率的分布，基因频率采用Hardy-CI组