一种胶原蛋白寡肽对人皮肤成纤维细胞增殖及胶原分泌的影响

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1、第3O卷第2期成都大学学报(自然科学版)V01．30No．22011年6月JournalofChengduUniversity(NaturalScienceEdition)Jun．20l1文章编号：1004—5422(2011)02—0102—02一种胶原蛋白寡肽对人皮肤成纤维细胞增殖及胶原分泌的影响宋芹，陈封政，颜军，郭晓强，邬晓勇，姚倩，苟小军(成都大学中药化学实验室，四川成都610106)摘要：研究了罗非鱼鱼鳞胶原蛋白寡肽对体外培养人皮肤成纤维细胞增殖与I型胶原蛋白分泌的影响．采用wSI一_8法测定了胶原蛋白寡肽对人皮肤成纤维细胞增殖的影响，采用EIJSA法检测了胶原蛋白寡肽对人皮肤

2、成纤维细胞I型胶原蛋白分泌的影响．实验表明，罗非鱼鱼鳞胶原蛋白寡肽能促进人皮肤成纤维细胞增殖(P<0．01)，以及人皮肤成纤维细胞I型胶原蛋白的分泌(P<0．01)．关键词：胶原蛋白寡肽；人皮肤成纤维细胞；增殖；I型胶原蛋白分泌中图分类号：TS59文献标识码：A萝酶的复合酶进行酶解，得平均分子量约为920Da0引言的胶原蛋白寡肽．取CP适量，溶解于PBS缓冲液胶原蛋白，又称胶原，是真皮的主要组成成分，中，分别制成浓度为15、30、60,g／nm的溶液，溶液经也是构成细胞外基质的主要成分．由于胶原蛋白分0．22vm微孑L滤膜滤过除菌，备用．子中含有大量的酰胺基团和羟基，具有较强的吸湿2．2人

3、皮肤成纤维细胞培养性能而使皮肤保持饱满充盈nJ．目前，研究人员开人皮肤成纤维细胞于MEM培养基(含5％胎牛始利用生物技术从动物真皮或鱼鳞中提取胶原蛋白血清)在浓度5％、湿度95％、恒温37℃的C02培养寡肽，并将其用作化妆品的原料或添加剂_3]．本实箱中培养．每3d换液1次，5—6d细胞基本融合后验将采用体外细胞培养模型，探讨胶原蛋白寡肽对传代．吸去原培养基，用PBS溶液清洗2次，加人0．人皮肤成纤维细胞的增殖及工型胶原合成的影响．25％Trypsin．1mMEDTA·4Na溶液0．5mL，37oC消化0．5min后，于显微镜下可见细胞胞体收缩、变圆，加1材料、试剂与仪器MEM培养基10m

4、L终止消化．轻轻反复吹打细胞，实验所用的材料、试剂与仪器包括：罗非鱼干燥使其浮游，移至50mL离心管，速度2×103rpm，2鱼鳞(海南水产品市场)，人皮肤成纤维细胞(日本北min离心，吸去上清液，加入适量含血清培养基，轻海道大学齿科研究室)；aMEM培养基(美国GIBCO轻吹打，使管底细胞浮游，均匀分散．取96孔板，按公司)，胎牛血清(美国GIBCO公司)，青链霉素双抗每孔1×103个播种细胞．待细胞附着后，各组中分(美国Invitrogen公司)，Trypanbluesolution(美国Sig—别加入15、30、60ug／mLCP溶液lO，并以加人相lna公司，Lot．No076K2

5、331)，0．25％Trypsin—lmMED—同体积PBS缓冲液作为空白对照组．TA·4Naliquid(美国Invitrogen公司)，DMSO(美国Sig—2．3WST-8法测定细胞数ma公司)；细胞数测定试剂盒WST-8kit(日本等人皮肤或纤维细胞按“2．2”项下方法培养72h化学株式会社)，Infinite500全自动酶标仪(瑞士Te—后，从培养箱中取出96孔板，向各孔中加入WST-8carl公司)，胶原蛋白试剂盒(Sircol(tm)SolubleColla—溶液l0，重新放回c()2培养箱中孵育，进行显色genAssay，英国bioeolor公司)．反应．4h后取出，在45

6、0nln下测定OD值．所有数据2方法与结果以±s表示，采用SPSS11．0ForWindows统计软件2。1胶原蛋白寡肽(collagenpeptid，CP)的制备对数据进行统计学处理．样品问差异比较用t检验．取罗非鱼鱼鳞经HC1脱钙后，采用木瓜酶和菠P<0．05表示有统计学差异，结果如表1所示．收稿日期：2011—01—15．作者简介：宋芹(1982一)，女，博士，讲师，从事天然产物研究与开发．第2期宋芹，等：一种胶原蛋白寡肽对人皮肤成纤维细胞增殖及胶原分泌的影响．103．表1胶原蛋白寡肽对人皮肤成纤维细胞高于空白组，约为空一白一{组∞量的州Ⅲ3啦倍隧毯．增殖的影响wSr．8(±s)咖瑚

7、㈣湖蚴瑚m03讨论本实验采用罗非鱼鱼鳞水解制备胶原寡肽，平均分子量为920Da，其中1O个氨基酸以下的寡肽约占50％，三肽约占12％．通过体外培养人皮肤成纤注：*P<0．05。**P<0．01v8normalcontrol维细胞实验结果显示，酶解得到的胶原蛋白寡肽对表1数据表明：人皮肤成纤维细胞的增殖活性人皮肤成纤维细胞具有促增殖和促进I型胶原蛋白明显强于空白对照组，说明CP对体外培养人皮肤分泌的作用．这也证明，利用胶原