黄芪注射液中黄芪甲苷含量测定hplc法的比较研究

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1、2Ol1年8月Aug．，2Oll第24卷第4期VO1．24NO．4黄芪注射液中黄芪甲苷含量测定HPLC法的比较研究李燕(十堰职业技术学院生化与环境工程系，湖北十堰442000)[摘要]采用等度洗脱的高效液相色谱法，对黄芪注射液中主要微量物质黄芪甲苷的含量进行测定，通过对不同样品的分析比较，建立了最佳提取条件和检测条件。该法操作简便迅速，精密度和准确度均较理想，稳定性强，回收率高，可为测定黄芪注射液中黄芪甲苷提供方法依据。[关键词]高效液相色谱法；黄芪注射液；黄芪甲苷；提取[中图分类号]R917[文献标识码]A[文章编号]1008—4738(2011)04—0104—02在我国常见

2、药物中，具有营养和抗氧化等药理加热回流提取2次，得到提取液200ml，然后进行减压活性和药用价值的，多为对羟基苯甲酸和对羟基肉浓缩得到浓缩液约i00ml。然后重复浓缩液萃取得到桂酸的衍生物，这类药物与人体健康密切相关[1][。黄芪甲苷粗品约25．0mg，经HPLC检测纯度超过黄芪中含有的黄芪皂苷、黄酮等化合物具有较强的80。再进行反相硅胶@18常压色谱柱分离，60％甲生物活性[3Ⅱ，黄芪注射液可用于治疗细胞免疫功醇洗脱，得到黄芪甲苷纯品约l3．5mg，HPLC检测纯能低下的慢性肝炎和慢性活动性肝炎，效果良好，也度符合药典标准。具体HPLC图与主峰含量见图1可用于治疗白细胞减少症及

3、血小板减少性紫癜。对与表1。同时扫描结果显示，黄芪甲苷在325nm波蒙古黄芪中的皂苷类和黄酮类有效成分的分析研究长处吸收最强，灵敏度较高。以峰面积积分值为纵表明，皂苷类成分共14个共有峰，黄酮类成分共有坐标，对照品浓度为横坐标，绘制标准曲线。得回归12个共有峰，显示其化学成分复杂，对于有效物质方程：黄芪甲苷Y=13．614X—1．4897，r一0．9999。的提取检测要求高]L。线性范围为lO．2—102ug／mL。1材料与仪器试剂：95乙醇；无水乙醇；氯仿；正丁醇；丙酮；无水乙醚；盐酸；碳酸钡；乙酸酐。以上试剂均为分析纯。仪器：UV～2401P紫外分光光度仪(岛津公司)，TG3

4、28B光电分析天平(岛津公司)；CKQ～250DE型数控超声波清洗器(昆山市超声仪器有限公司)。Gilentlloo高效液相色谱仪(岛津公司)；HH—S2系列恒温水浴锅(岛津公司)；FTIR一8400S*图1黄芪甲苷纯品HPLC色谱图型红外光谱仪(岛津公司)；GSP一84—02型磁力恒温表1重复性试验结果搅拌器(岛津公司)。黄芪注射液(万通药业公司，批准文号：国药准字Z23O20820／Z2302O822)。2方法与结果2．I黄芪甲苷的提取黄蓖注射液50n1加入6倍体积量(V／V)的6O乙醇，Na()H饱和溶液调节pH至l2，温度：6()℃，[收稿日期]2O11—06l6[作者简

5、介]乍燕f[972)，女，I-耀职业技术学院啦fL环境r程系讲师。一l0l一李燕：黄芪注射液中黄芪甲苷含量测定HPLC法的比较研究2．2样品的准备3讨论将3份不同生产日期生产的黄芪注射液抽提后当前黄芪甲苷的测定方法有薄层色谱法放置2OmL容量瓶中，用提取液约15mL浸泡，室(TLC)、毛细管电泳法(CZE)等L7][，但这些测定方温下放置4小时，然后超声提取3O分钟，过滤后滤法都普遍存在灵敏度不高、重复性不强的现液于物理蒸干溶剂，残渣用6mL甲醇一甲酸溶解，象[9][]。本试验建立了测定黄芪注射液中黄芪甲然后定容于5mL容量瓶中，4℃下保存待测。苷的HPLC法，采用反相硅胶C—l

6、8常压色谱柱分2．3精密度和准确度离，60甲醇洗脱，在选择检测波长时，以流动相为取混合对照品溶液2OmL，进行HPLC检测，溶剂稀释对照品，采用紫外分光光度法在200—400连续进样6次，测得黄芪甲苷面积的相对标准偏差扫描吸收光谱，结果表明黄芪甲苷在325nm处有分别为0．59，显示其精密度良好。然后精密称取最大吸收，灵敏度较高，故选定325nlTl为检测波已知含量的3份黄芪甲苷样品，按样品准备与处理长。最佳提取条件为：乙醇用量6倍于注射液体积，方法制备计算回收率，结果分别为95．9、94．5提取温度为60℃，pH值为l2。同时HPLC法操作和95．O，显示其回收率高。具体情况见

7、表2。简便迅速，精密度和准确度均较理想，稳定性强，回表2黄芪甲苷样品黄芪甲苷的回收率(n3)收含量高，可为测定黄芪注射液中黄芪甲苷物质提样品回收率供方法依据。195．9％294．5％[参考文献]395．0[13竺心影．药理学[M]．北京：人民卫生出版社，2008：326，2．4稳定性试验328．3份样品按照制备方法制备溶液后，分别于0[2]BeconiBarkerMG．Dertrminationofeeftiofuranditsdesfumyleeffiofurrelatedme