HPLC法测定黄芪中的黄芪甲苷含量.doc

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1、HPLC法测定黄芪中的黄芪甲苷含量摘　要：用HPLC法测定了黄芪甲苷含量.样品从东北黄芪中提取，用色谱纯甲醇溶解并稀释，采用YWG-C18柱，流动相为甲醇，在205nm下检测，灵敏度为0.1AUFS,测定了黄芪甲苷的含量.平均回收率为96.1%，RSD为2.15%，结果表明，样品浓度在0.01～0.2mg/mL之间与峰面积成良好的线性关系.High-performanceLiquidChromatographicDeterminationofAstragalosideinAstragalusmembranaceu

2、s(Fisch.)Bunge.TianFeng，DengYingjie（DepartmentofPharmacy,ShenyangPharmaceuticalUniversity,Shenyang110015）Abstract：Asensitivemethodwasdevelopedtodetermineastragalosidebyhigh-performanceliquidchromatographywiththeC18column.ThemobilephasewasmethanolandtheUVabsor

3、bencywasmonitoredat205nm.ThisassaydemonstratedthatastragalosidehadadequatesensitivityandselectivitytomeasuretheconcentrationsofastragalosideinAstragalusmembranaceus(Fisch.)Bunge.Keywords：highperformanceliquidchromatography；astragaloside;Astragalusmembranaceus

4、(Fisch.)Bunge.▲　　黄芪为常用中药，素有“补药之长”之称，具有益气固表，利尿托毒等功效.黄芪药用价值很高，临床上常用来治疗非特异性免疫功能低下、乙肝和心血管系统疾病.黄芪甲苷作为黄芪成分之一，其化学结构如图1所示，它具有降压、抗炎、稳定红细胞膜、提高血浆cAMP含量，促进小鼠再生肝DNA合成和增强免疫功能等多种作用〔1〕.因此在研究黄芪过程中，我们对其成分黄芪甲苷进行了含量测定方法研究.已有的测定方法多为薄层扫描法〔2〕和香草醛-硫酸比色法〔3〕，前者操作繁琐，背景干扰多，误差较大；后者空白吸收值高

5、，受时间因素干扰大，均难以准确测定.本文试用HPLC法测定黄芪甲苷的含量.其样品浓度的范围在0.01～0.2mg.mL之间与峰面积呈线性，该法灵敏度高，重现性好，可准确地测定东北黄芪甲苷的含量.Fig.1　Theformulationofastragaloside1　仪器与方法　　仪器：Waters高效液相色谱仪，510型泵，490E紫外检测仪.对照品　黄芪甲苷购自中国药品生物制品检定所.样品　黄芪饮片(生品)，购自沈阳京盛药店，本校许春泉教授鉴定为东北黄芪.试剂　乙腈(色谱纯，天津四友生物医学公司)、甲醇(色谱

6、纯，天津四友)、正丁醇(分析纯)、乙醚(分析纯)、水、重蒸馏水、去离子水、中性氧化铝(层析用)、轻质氧化镁(AR).2　方法与结果2.1　色谱条件色谱柱：YWG18柱2504.6mm10μL，大连依利特科学仪器有限公司；流动相：甲醇(色谱纯)；流速：0.8ml/min；检测波长：205nm；灵敏度：0.1AUFS.2.2　标准曲线的绘制精密称取10.03mg黄芪甲苷标准品，置于50mL容量瓶中，加入色谱纯甲醇溶解并定容，分别精密吸取0.5、1.5、2.5、5、10mL用甲醇稀释并定容于10mL容量瓶中，用0.45

7、μ微孔滤膜过滤，进样20μL，按上述色谱条件测定.在tR=3.375左右有唯一吸收峰，以峰面积为纵坐标，进样浓度为横坐标，得一工作曲线.回归方程为A=0.1717C+0.4657，r=0.9996，线性范围0.01～0.2mg/mL-1，如表1所示.Tab.1　TheconcentrationandpeakareaofthestandardsampleC／(mg.mL-1)×10-1Peakarea/×1060.10.48300.30.50780.50.55211.00.63302.00.82002.3　精密度实

8、验精密称取黄芪甲苷对照品4.50mg，用甲醇溶解并定容于10mL容量瓶中，精密吸取20μL进样，连续5次，测定峰面积，其RSD为2.14%.2.4　回收率试验取5g已测定黄芪甲苷含量的生药提取水煎液平均分成10份，取5份，再分别准确加入1.447mg/mL的黄芪甲苷对照品溶液0.5mL，按“样品测定”项下方法操作，结果见表2.Tab.2　Theresultsofrecov