大乌泡叶中总黄酮含量测定

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1、大乌泡叶中总黄酮含量测定大乌泡为蔷薇科悬钩子属植物大乌泡(RubusmultibracteatusLevl.etVant.),又名倒生根、黄水泡、无刺乌泡、糖泡叶、马莓叶,以根及全株入药。全国大部分地区均有分布,主产于四川、云南、贵州等地。其味苦、性凉,入脾、肝二经,具清热解毒、祛风除湿、凉血、止血、接骨的功效。大乌泡为苗药的常用药,但目前尚未见对大乌泡化学成分研究的报道,我们通过对大乌泡叶的化学成分的系统研究,发现其中含有许多黄酮类成分(另文报道),现就大乌泡叶中总黄酮的含量测定方法报道如下。　　1仪器与试药UV-757CRT紫外分光光度计(上海UNICO),AB135-S电子分析天平

2、(瑞士梅特勒-托利多公司),CQ-250超声波清洗器(上海超声仪器厂),电热恒温水浴锅(北京市永光明医疗仪器厂),索氏提取器。芦丁对照品(中国药品生物制品检定所提供,批号10080-200306)。本研究所用大乌泡叶于2007年7月采集于贵州省黔西南州普安县,经秦文杰副研究员鉴定为蔷薇科悬钩子属大乌泡(RubusmultibracteatusLevl.etVant.),标本存放于中药复方新药开发国家工程研究中心。甲醇为分析纯,5%亚硝酸钠、10%硝酸铝、4%氢氧化钠等均采用分析纯自配。　　2方法与结果　　2.1供试品溶液的制备职称论文发表X干燥大乌泡叶粉末约2.0g,精密称定,置索氏提取

3、器中,加入60%甲醇100mL,于恒温水浴锅上90℃提取6h,过滤,减压浓缩并定容至50mL容量瓶中,得供试品溶液。　　2.2芦丁对照品溶液的制备精密称取干燥至恒重的芦丁对照品4.75mg,用少量60%甲醇溶解,置50mL容量瓶中,用60%甲醇定容至50mL,摇匀,静置,配成浓度为95μg/mL的芦丁对照品贮备液。　　2.3测定波长的选择以芦丁为对照品测定大乌泡叶中总黄酮的含量。精密吸取对照品液、供试品液各适量分别加入到25mL容量瓶中,按“2.4”项下方法操作,并在400～600nm范围内扫描,结果均在510nm处有最大吸收波长,其他成分对测定无干扰,故选择510nm为测定波长。　　2

4、.4标准曲线的绘制精密吸取浓度为95μg/mL的芦丁对照品溶液0、1.0、2.0、3.0、4.0、5.0、6.0mL,分别置于25mL量瓶中,分别加入5%亚硝酸钠溶液1.0mL,摇匀,放置6min后各加入10%硝酸铝溶液1.0mL,摇匀后放置6min,分别加入4%氢氧化钠溶液10mL,用60%甲醇稀释至刻度,摇匀,放置10min,在510nm处测定吸光度。回归方程为：Y＝0.0012X＋0.001,r＝0.9996。结果表明,芦丁对照品溶液浓度在95～570μg/mL之间呈良好的线性关系。　　2.5方法学考察　　2.5.1精密度试验　　精密吸取95μg/mL芦丁对照品溶液5.0mL,置于

5、25mL量瓶中,按“2.4”项下方法进行显色和测定,重复6次实验,记录吸光度。吸光度的RSD＝0.97%(n＝6),说明仪器精密度良好。2.5.2重复性试验　　精密称取样品6份,每份约2.0g,精密称定,按“2.1”项下方法制备供试品溶液,每份精密吸取1.0mL,分别置于10mL容量瓶中,按“2.4”项下方法进行显色和测定,记录吸光度值,计算每份样品的含量。6份样品黄酮含量的RSD＝2.11%(n＝6)。职称论文发表X　　2.5.3稳定性试验　　精密称取样品6份,每份约2.0g,按“2.1”项下方法制备供试品溶液。精密吸取供试品溶液1.0mL,共6份,分别置于10mL量瓶中,按“2.4”

6、项下方法进行显色和测定,分别在15、20、30、45、60、100min测定,RSD＝1.38%(n＝6)。结果表明样品在15～100min之间稳定。　　2.5.4加样回收率试验　　精密称取芦丁对照品适量,加入已知含量的对照品,称取样品6份,每份约1.0g,精密称定,按供试品溶液制备方法制成溶液6份,各取1.0mL,置于10mL量瓶中,按“2.4”项下方法进行测定,结果见表1。表1加样回收率试验结果（略）　　2.6样品含量测定精密称取样品6份,每份约2.0g,按“2.1”项下方法制备供试品溶液。每份精密吸取1.0mL,分别置于10mL量瓶中,按“2.4”项下方法进行显色和测定,由标准曲线

7、计算得大乌泡中总黄酮平均含量为3.8%,RSD＝2.4%,说明该方法测得的含量是可靠的。表2大乌泡叶中总黄酮含量测定结果（略）职称论文发表X　　3讨论本试验用硝酸铝作为黄酮类比色测定的显色剂,主要是黄酮母核中含有碱性氧原子,一般又多带酚羟基,能和铝离子产生黄色络合物,又加入亚硝酸钠和氢氧化钠,使在碱性溶液中显红色,显色反应在100min内稳定[1]。　　对样品的提取方法进行考察,超声、加热回流和索氏提取3种提取方法中,采用索氏提取总