垂盆草中总黄酮含量的测定

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1、垂盆草中总黄酮含量的测定【摘要】目的建立垂盆草中总黄酮含量的测定方法。方法采用紫外分光光度法，测定波长为501nm。结果总黄酮检测浓度在0.01036～0.08288mg/mL范围内与吸光度线性关系良好(r=0.9998)，平均加样回收率为98.62%(RSD=1.11%，n=6)。结论本方法用于垂盆草中总黄酮的含量测定，结果准确、可靠、稳定。【关键词】紫外分光光度法；垂盆草；总黄酮；含量测定　　垂盆草(SedumsarmentosumBunge)又称卧茎景天，系景天科多年生草本植物垂盆草的新鲜

2、或干燥的全草，我国大部分地区均有分布。该药味甘、淡、性凉，具有清热解毒、利尿消肿、排脓生肌之效，主治丹毒溃疡，小便不利及急、慢性肝炎等。据有关文献报道，垂盆草中含有氰苷、黄酮类、甾醇类和三萜类等化合物〔1，2〕。潘金火等〔3，4〕对垂盆草的保肝降酶活性成分进行了一系列的研究，证明垂盆草中具有保肝降酶作用的活性成分主要存在于H2O部分和nBuOH部分（主要含苷类和总黄酮），进而确认其中的总黄酮是垂盆草中保肝降酶的主要活性组分之一。本文采用经典的比色法对垂盆草中的总黄酮含量进行测定，以为其后继的开

3、发利用提供依据。　　1仪器与试药　　UV2401型可见紫外分光光度计(日本岛津公司)；bp211D型十万分之一天平(德国赛多利斯公司)；索式提取器等。　　芦丁对照品(中国药品生物制品检定所,批号:086-9303)；垂盆草(购于安徽省毫州市药材总公司，经南京中医药大学中药鉴定教研室王春根教授鉴定为SedumsarmentosumBunge的干燥全草，粉碎至40～60目)；亚硝酸钠、氢氧化钠、硝酸铝、乙醇等为分析纯。　　2方法与结果　　2.1对照品溶液的制备　　精密称取于120℃下减压干燥至恒重

4、的芦丁对照品10.36mg，置50mL容量瓶中，加80%（体积分数）乙醇35mL超声使之完全溶解，冷却至室温，以80%（体积分数）乙醇稀释至刻度，摇匀，得浓度0.2072mg/mL的芦丁对照品溶液，冷藏，备用。　　2.2供试品溶液的制备　　精密称取垂盆草药材粉末1.0g，置索氏提取器中，加石油醚（60～90℃）100mL在85℃水浴温度条件下回流提取至无色，弃去石油醚，药渣挥干石油醚，再用80%（体积分数）乙醇100mL在100℃水浴温度条件下回流提取6h，冷却后，用80%（体积分数）乙醇定容至

5、100mL,备用。　　2.3定性鉴别反应　　2.3.1氨水反应　　取样品溶液点于滤纸上，将滤纸在氨水上方熏15min，立即置紫外光下观察(254nm)，呈黄绿色荧光斑点。　　2.3.2三氯化铝反应　　取样品溶液点于滤纸上，滴加5%（质量分数）三氯化铝甲醇溶液，吹干呈灰黄色，在紫外光下(254nm)观察，呈黄绿色荧光斑点。　　2.3.3盐酸-镁粉反应　　取样品1mL，加少许镁粉，再滴加几滴浓盐酸，水浴加热2min后显红色。　　2.4测定波长的选择　　精密量取对照品溶液3mL和供试品溶液5mL，分别

6、置10mL容量瓶中，加5%（质量分数）亚硝酸钠溶液0.4mL，混匀，放置6min；加10%（质量分数）硝酸铝溶液0.4mL，放置6过min；加4%（质量分数）氢氧化钠溶液1.0mL，用80％（体积分数）乙醇定容至刻度，摇匀，放置15min，以80％（体积分数）乙醇为空白同法配制空白对照液。在400～700nm波长处扫描，对照品与供试品溶液显色后均在501nm左右波长处有最大吸收，故将501nm作为测定波长。紫外光谱图见图1。　　1．供试品;2．芦丁对照品;3．阴性对照　　图1紫外扫描图谱（略）　

7、　Fig.1UVSpectrum　　2.5专属性试验　　取“2.2”项下供试品溶液5mL,置10mL容量瓶中，加80%（体积分数）乙醇至刻度，以80%（体积分数）乙醇溶液为空白对照液，在400～700nm波长处扫描。未经显色的供试品在501nm左右波长处基本无吸收，说明此显色方法的专属性较强。紫外扫描光谱见图1。　　2.6标准曲线的绘制　　分别精密量取对照品溶液0.5、1.0、2.0、3.0、4.0mL，各置10mL容量瓶中，分别加80%（体积分数）乙醇至5mL，加入5%亚硝酸钠溶液0.4mL，

8、混匀，静置6min；加入10%（质量分数）硝酸铝溶液0.4mL，摇匀，静置6min，加入4%（质量分数）氢氧化钠溶液1.0mL，再加80%（体积分数）乙醇至刻度，摇匀，放置15min，以80％（体积分数）乙醇为空白同法配制空白对照液。分别于501nm波长处测定吸光度，以吸光度值(A)对质量浓度(ρ)进行线性回归，得回归方程ρ=0.0865A+0.0012(r=0.9998)。结果表明，芦丁检测浓度在0.01036～0.08288mg/mL范围内线形关系良好。　　2.7精密度试验　　取“2.1”项