hplcelsd法测定芪红胶囊中黄芪甲苷的含量

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1、HPLCELSD法测定芪红胶囊中黄芪甲苷的含量【关键词】芪红胶囊；黄芪甲苷；高效液相色谱　　Abstract:ObjectiveTodevelopamethodfordeterminingthecontentofastragalosideIVinQihongcapsule.MethodsAstragalosideIVnosilC18column(4.6mm×250mm,5μm)usingacetonitrileobilephase.ResultsThecalibrationcurveethodis

2、accurate,reliableandreproducible,onsilC18(4.6mm×250mm,5μm)(迪马公司产)为色谱柱；乙腈水(体积比35∶65)为流动相；柱温：30℃；流速1.0mL/min；SEDEX55蒸发光散射检测器(漂移管温度60℃，增溢为7，气压2.1×105Pa)。在此色谱条件下，黄芪甲苷与样品中其他组分分离良好，理论板数按黄芪甲苷色谱峰计大于3000。色谱图见图1、2。　　图1黄芪甲苷对照品HPLC图　略　　图2芪红胶囊HPLC图　略　　2.2对照品溶液的制备精密

3、称取黄芪甲苷对照品12.65mg，置25mL量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，即得。　　2.3供试品溶液的制备精密称取样品8g，加水50mL使溶解，转移至分液漏斗中，用水饱和的正丁醇提取5次，每次30mL，合并正丁醇液，以氨试液洗涤5次，每次20mL，弃去氨试液，合并正丁醇液，蒸干，残渣用甲醇溶解并转移至5mL量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，微孔滤膜(0.45μm)滤过，取续滤液，作为供试品溶液。　　2.4线性关系考察分别精密吸取上述对照品溶液5、10、15、20、30μL，注入液相色谱仪，照上述

4、色谱条件测定黄芪甲苷峰面积，以对照品进样量(m)自然对数为横坐标、峰面积值(A)自然对数为纵坐标，绘制标准曲线，测定结果表明，黄芪甲苷对照品在进样量2.53～15.18μg范围内呈良好的线性关系，回归方程为：A=1.5210m+10.6662，r=0.9997。　　2.5精密度试验分别精密吸取上述对照品溶液10μL,连续进样5次,测定黄芪甲苷峰面积值，求得黄芪甲苷峰面积值平均值为537179，RSD为1.2%，结果表明仪器精密度良好。　　2.6稳定性试验精密称取本品，照上述方法制备供试品溶液，精密吸取

5、15μL，在上述色谱条件下，每隔一定时间进样,测定黄芪甲苷峰面积值,求得黄芪甲苷峰面积值平均值为636505，RSD值为1.6%，表明样品在24h内基本稳定。　　2.7回收率试验精密称取芪红胶囊6份，每份约8g，照前述供试品溶液制备方法制备，精密吸取供试品溶液15μL，进样，测定，计算含量，求得黄芪甲苷含量平均值为0.099mg/粒，RSD为2.0%，表明本法测定的重复性良好。　　2.8准确度试验采用加样回收法，取已知含量样品(黄芪甲苷含量为：0.099mg/粒)6份，精密称取各约4g，分别精密加入黄

6、芪甲苷对照品，照供试品溶液制备方法制备，照上述色谱条件，精密吸取供试品溶液15μL，进样，测定，计算，求得黄芪甲苷平均回收率为99.4%，RSD为2.0%。结果说明本法准确。　　图3缺黄芪阴性对照HPLC图　略　　3讨论　　3.1供试品溶液的制备由于黄芪甲苷类成分在正丁醇中的溶解度比较大，因此选用正丁醇进行提取，经回收试验证明方法可行。曾试验采用未经氨试液处理的供试品溶液进行测定，含量大大偏低，故供试品溶液经氨试液处理才能进行含量测定。　　3.2检测器的选择黄芪甲苷的含量测定法有薄层扫描法［1～3］，

7、紫外检测的HPLC法［4］及HPLCELSD法［5～6］，由于薄层扫描法对黄芪甲苷的含量测定结果误差大，紫外检测的HPLC法则选择203nm的末端吸收波长来测定，其误差也很大，故目前专家建议采用HPLCELSD法测定，此方法减少了误差，满足了含量测定的要求，故本文也选择蒸发光散射检测器。　　3.3流动相的选择HPLC测定选择了乙腈水(体积比35∶65)，乙腈水(体积比30∶70)，甲醇水(体积比35∶65)几种流动相体系，通过比较分离情况，确定了上述体系，该体系使各成分得到了较好的分离，满足

8、定量的要求。　　3.4本文以高效液相色谱法测定芪红胶囊中主要成分黄芪甲苷的含量，方法分析条件易于精确控制，待测成分易于分离，且具有较好的重现性和较高的精密度，为中药芪红胶囊的质量标准的制订提供了依据。【