survivin反义寡核苷酸诱导胃癌细胞凋亡及对多西他赛的增敏作用

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1、survivin反义寡核苷酸诱导胃癌细胞凋亡及对多西他赛的增敏作用【摘要】目的探讨生存素(survivin)反义寡核苷酸(antisenseoligonucleotide,ASODN)对人胃癌细胞株SGC7901的凋亡诱导、对多西他赛的化疗增敏作用。方法设计合成特异性靶向survivinASODN。将胃癌细胞株分为空白对照组(Sham组)、单纯脂质体对照组(Lip组)、正义寡核苷酸转染对照组(Lip-SODN组)、ASODN转染组(Lip-ASODN组)。转染48h后，TT法检测转染细胞对多西他赛的敏感性。结果脂质体介导sur

2、vivinASODN转染后的胃癌细胞survivin蛋白表达明显下降，细胞凋亡率明显高于各对照组(P<0.05)，对多西他赛的IC50值明显低于各对照组(P<0.05)，细胞生长抑制率明显高于各对照组(P<0.05)。结论survivinASODN转染胃癌细胞能下调survivin蛋白表达,诱导胃癌细胞凋亡,抑制细胞增殖,增强多西他赛化疗敏感性。【关键词】生存素;反义寡核苷酸;胃癌细胞;凋亡;多西他赛;增敏作用　　Abstract:ObjectiveToinvestigatetheeffectsofsurvi

3、vinantisenseoligonucleotide(ASODN)ontheapoptosisandchemosensitivitytodocetaxelofthehumangastriccarcinomacelllineSGC7901.MethodsASODNtargetingsurvivinacellsgroup,lipofectingroup,senseoligonucleotide(SODN)groupandantisenseoligonucleotide(ASODN)group.Aftertransfectionf

4、or48h,theexpressionlevelofsurvivinineachgroupinedbyfloetry;andthesensitivityofSGC7901cellstodocetaxelinedbyMTT.ResultsTheexpressionofsurvivininSGC7901cellsacellscandoayhelptoreversedrugresistance.　　Keyorcell;apoptosis;docetaxel;chemosensitivity　　生存素(survivin)属于凋亡抑制蛋

5、白(inhibitorofapoptosisprotEin,IAP)家族中的新成员，它可以通过有丝分裂促进细胞增殖，抑制细胞凋亡。凋亡是化疗药物诱导肿瘤细胞死亡的主要模式，survivin在调节肿瘤细胞凋亡敏感性方面起着核心作用。本实验采用脂质体介导survivin反义寡核苷酸(survivinASODN)转染人胃癌细胞SGC7901，以封闭survivin基因的表达，观察其对胃癌细胞SGC7901的凋亡诱导以及对化疗药物多西他赛的化疗增敏作用。　　1材料和方法　　1.1材料胃癌细胞株SGC7901购于中国科学院细胞生物研究所

6、。survivin反义寡核苷酸、错配寡核苷酸(与反义寡核苷酸相同碱基组成、不同排列顺序)由上海生工生物工程公司合成，两端3个碱基经硫代修饰以对抗核酸酶的降解;反义寡核苷酸为5′-CCCAGCCTTCCAGCTCCTTG-3′，错配寡核苷酸为5′-GCCACTCCTCGACTCTCGTC-3′。阳离子脂质体Lipofectin购于Invitrogen公司。survivin抗体及辣根过氧化物酶(HRP)标记的第二抗体购于SantaCruz公司，RPMI1640购于Invitriogen公司，小牛血清购于杭州四季青公司，多西他赛购于

7、AventisPharmaDagenham公司。　　1.2方法　　1.2.1细胞株培养人胃癌细胞株SGC7901用含10%小牛血清的RPMI1640培养基，在37℃、5%CO2的饱和湿度条件下培养。　　1.2.2细胞分组及转染取对数生长期的SGC7901，传代接种于6孔培养板内，调整细胞密度，使每孔的细胞数为3×105，常规条件下培养24h，显微镜下观察，约80%细胞融合时开始实验。设置空白对照组(Sham组)、单纯脂质体对照组(Lip组)、正义寡核苷酸转染对照组(Lip-SODN组)和反义寡核苷酸转染组(Lip-ASODN组

8、)，每组设3个复孔。细胞转染过程按转染试剂盒说明书进行，转染12、24、48h后收集各组细胞用于后续实验。　　1.2.3TT法检测各组细胞对多西他赛的敏感性收获的各组细胞用含10%小牛血清的RPMI1640重悬,倒置显微镜计数细胞,调整细胞密度为1×105/L,并接种于96孔