survivin反义核酸诱导卵巢癌细胞凋亡及逆转多西他赛耐药机制的实验研究

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1、Survivin反义核酸诱导卵巢癌细胞凋亡及逆转多西他赛耐药机制的实验研究作者：马荣，陈曦海，唐丽萍，耿晓星，张云艳，张英蕾，王晶【关键词】Survivin反义核酸；卵巢肿瘤；凋亡；多西他赛；多药耐药基因　　ExperimentalstudyonapoptosisofovariancancercellsandreversaldocetaxeldrugresistanceinducedbySurvivinantisenseRNA　　【Abstract】AIM:ToestablishSurvivinantisenseRNAandexploreits

2、effectontheapoptosisofovariancancercellsandthesensitivitytodocetaxelanditsmechanismofreversingdocetaxeldrugresistance.METHODS:Survivinantisenseeukaryoticvector(antipcDNA3svv)entetry;sensitivitytodocetaxelinedbyMTT;expressionofMDR1mRNAinalapoptoticchangeetryandtheapoptosisrat

3、eentalgrouptodocetaxelLandcontrolgroupL,sothestatisticaldifferenceRNAofSkov3SVVantigroupRNA.　　【Keys;apoptosis;docetaxel;MDR1　　【摘要】目的:构建Survivin反义真核表达载体（antipcDNA3svv），探讨其对卵巢癌的凋亡诱导作用、对多西他赛的化疗增敏作用及逆转耐药的机制.方法：采用Survivin反义核酸瞬时电转染法转染卵巢癌细胞系Skov3,筛选出阳性细胞株.以TT法检测其对多西他赛的化疗增敏作用，并检测实验组

4、细胞（Skov3SVVanti）MDR1mRNA的表达.结果：稳定表达antipcDNA3svv的Skov3SVVanti其Survivin蛋白表达比未转染者明显降低，Skov3SVVanti组细胞流式细胞仪检测显示其凋亡率为19%，对多西他赛的IC50值为（13.3±2.25）ng/mL,而对照组（Skov3）为(53.2±2.45)ng/mL，差异具有明显的统计学意义(P<0.01).Skov3SVVanti组MDR1mRNA表达较Skov3组明显减少（P<0.01）.结论：Survivin反义核酸可诱导卵巢癌细胞凋亡，并通过降

5、低MDR1mRNA表达增强多西他赛化疗敏感性.　　【关键词】Survivin反义核酸；卵巢肿瘤；凋亡；多西他赛；多药耐药基因　　0引言　　上皮性卵巢癌是常见的妇科肿瘤，具有易转移及复发的特性，因此手术后化疗是卵巢癌规范化治疗最重要的内容之一.多西他赛（docetaxel）又名泰索帝是治疗卵巢癌的新药，其联合铂类治疗卵巢癌临床缓解率远高于铂类联合其他化疗药.但是对于一些复发和多处转移的患者，多西他赛也产生了耐药现象.Survivin是新近发现的IAP(inhibitorofapoptosisprotein)家族成员，能抑制caspase活性而发挥

6、抗凋亡作用.已有研究证实［1］，Survivin基因的高表达与化疗耐药有密切关系，抑制Survivin基因的表达能增加肿瘤组织对化疗的敏感性，对于维持正常细胞生物学特性具有重要作用［2］.本研究旨在研究应用反义策略阻断Survivin表达，对诱导卵巢癌细胞凋亡及提高卵巢癌细胞多西他赛敏感性的作用，并进一步探讨其逆转耐药的机制.　　1材料和方法　　1.1细胞株和细胞培养人卵巢癌细胞株Skov3由哈尔滨医科大学肿瘤研究所惠赠.用含有100mL/L胎牛血清（Gibco公司）的RPMI1640（Gibco公司）培养（37℃，50mL/LCO2）.顺铂（

7、F.H.FauldingCoLtd公司）及多西他赛（AventisPharma,Dagenham公司）溶解于DMSO(Gibco公司)，4℃保存.　　1.2Survivin反义真核表达载体（antipcDNA3svv）的构建Survivin基因通过RTPCR方法克隆获得.应用Trizol（Takara公司）法从卵巢癌细胞株Skov3中抽提总RNA，正向引物为5′atattctagaccatgggtgccccgacgttgc3′,反向引物5′aatcgaattctcaatccatggcagccagctg3′.PCR扩增条件为：94℃预变性2min

8、,94℃1min，60℃1min，72℃1min，共30循环,72℃延伸10min，扩增产物用琼脂糖回收试剂盒回收提纯后，扩增产物进行末端连接腺嘌呤（