survivin反义核酸诱导卵巢癌细胞凋亡及逆转多西他赛耐药机制的实验研究论文

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1、Survivin反义核酸诱导卵巢癌细胞凋亡及逆转多西他赛耐药机制的实验研究论文马荣，陈曦海，唐丽萍，耿晓星，张云艳，张英蕾，王晶【关键词】Survivin反义核酸；卵巢肿瘤；凋亡；多西他赛；多药耐药基因ExperimentalstudyonapoptosisofovariancancercellsandreversaldocetaxeldrugresistanceinducedbySurvivinantisenseRNA【Abstract】AIM:ToestablishSurvivinantisenseRNAandexploreitseffectontheapoptos

2、isofovariancancercellsandthesensitivitytodocetaxelanditsmechanismofreversingdocetaxeldrugresistance.METHODS:Survivinantisenseeukaryoticvector(antipcDNA3svv)entetry;sensitivitytodocetaxelinedbyMTT;expressionofMDR1mRNAinalapoptoticchangeetryandtheapoptosisrateentalgrouptodocetaxelLandcontr

3、olgroupL,sothestatisticaldifferenceRNAofSkov3SVVantigroupRNA.【Keys;apoptosis;docetaxel;MDR1【摘要】目的:构建Survivin反义真核表达载体（antipcDNA3svv），探讨其对卵巢癌的凋亡诱导作用、对多西他赛的化疗增敏作用及逆转耐药的机制.方法：采用Survivin反义核酸瞬时电转染法转染卵巢癌细胞系Skov3,筛选出阳性细胞株.以DR1mRNA表达较Skov3组明显减少（P0.01）.结论：Survivin反义核酸可诱导卵巢癌细胞凋亡，并通过降低MDR1mRNA表达增强多西

4、他赛化疗敏感性.【关键词】Survivin反义核酸；卵巢肿瘤；凋亡；多西他赛；多药耐药基因0引言上皮性卵巢癌是常见的妇科肿瘤，具有易转移及复发的特性，因此手术后化疗是卵巢癌规范化治疗最重要的内容之一.多西他赛（docetaxel）又名泰索帝是治疗卵巢癌的新药，其联合铂类治疗卵巢癌临床缓解率远高于铂类联合其他化疗药.但是对于一些复发和多处转移的患者，多西他赛也产生了耐药现象.Survivin是新近发现的IAP(inhibitorofapoptosisprotein)家族成员，能抑制caspase活性而发挥抗凋亡作用.已有研究证实［1］，Survivin基因的高表达与化疗耐

5、药有密切关系，抑制Survivin基因的表达能增加肿瘤组织对化疗的敏感性，对于维持正常细胞生物学特性具有重要作用［2］.本研究旨在研究应用反义策略阻断Survivin表达，对诱导卵巢癌细胞凋亡及提高卵巢癌细胞多西他赛敏感性的作用，并进一步探讨其逆转耐药的机制.1材料和方法1.1细胞株和细胞培养人卵巢癌细胞株Skov3由哈尔滨医科大学肿瘤研究所惠赠.用含有100mL/L胎牛血清（Gibco公司）的RPMI1640（Gibco公司）培养（37℃，50mL/LCO2）.顺铂（F.H.FauldingCoLtd公司）及多西他赛（AventisPharma,Dagenham公司）

6、溶解于DMSO(Gibco公司)，4℃保存.1.2Survivin反义真核表达载体（antipcDNA3svv）的构建Survivin基因通过RTPCR方法克隆获得.应用Trizol（Takara公司）法从卵巢癌细胞株Skov3中抽提总RNA，正向引物为5′atattctagaccatgggtgccccgacgttgc3′,反向引物5′aatcgaattctcaatccatggcagccagctg3′.PCR扩增条件为：94℃预变性2min,94℃1min，60℃1min，72℃1min，共30循环,72℃延伸10min，扩增产物用琼脂糖回收试剂盒回收提纯后，扩增产物进

7、行末端连接腺嘌呤（A）反应，与带有胸腺嘧啶末端（T）的载体pcDNA3.1(Invitrogen公司,DNA3.1/CTGFPTOPO)连接.重组体转化感受态大肠杆菌DH5α,筛选Amp阳性克隆者小量抽提质粒（质粒抽提试剂盒Takara公司），送去测序（上海生工公司）.经测序，选出其中反向连接者，命名为antipcDNA3svv.1.3电转染Skov3细胞及阳性克隆的筛选收集6×106细胞于预冷的0.2cm电转杯中，加入antipcDNA3svv15μL，终体积800μL，300V电压电穿孔14.4ms，48h后传代培养，加入含有G418