b组柯萨奇病毒对心肌细胞感染模式的研究

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1、B组柯萨奇病毒对心肌细胞感染模式的研究作者：张中海，张琦，闫长栋，钟照华【摘要】目的观察B组柯萨奇病毒(CoxsackievirusB，CVB)在原代心肌细胞中的感染特点，从而研究CVB对心肌细胞的致病机制。方法原代培养Balb/c乳鼠心肌细胞，并获得纯化的心肌细胞。使用B组柯萨奇病毒嗜心肌毒株3型(CVB3m)攻击原代心肌细胞，观察病毒感染心肌细胞后心肌细胞的细胞病变、超微结构和心肌酶的变化。结果成功原代培养了Balb/c乳鼠心肌细胞。心肌细胞在病毒感染后，细胞病变(CPE)不明显，与在HeLa等细胞中的典型CPE不同。心肌细胞在CVB3m感染后保持细胞形态和博动超过2

2、周时间。电镜显示心肌细胞结构正常，细胞器数量增加，在心肌细胞胞质中可见晶格样病毒颗粒排列。培养细胞的上清液中心肌酶升高。结论CVB在原代心肌细胞中表现为持续感染，CVB在心肌细胞中的致病机制不同于HeLa细胞。【关键词】心肌细胞;B组柯萨奇病毒;Balb/c乳鼠;原代细胞培养　　Abstract:ObjectiveToinvestigatethecharacteristicsofCoxsackievirusB(CVB)onprimarilyculturedmyocardialcellsandtoexplorethepathogenesisofcardiomyocytes.

3、MethodsCardiomyocytesfromBalb/csucklingmouseyocardialcellsyocardialcells,amyocardialtropicCoxsackievirusBstrain.Thecytopathiceffect(CPE)andultrastructureoftheCVB3m-infectedmyocardialcellsyocardialenzymesinthesupernantoftheculturemediumined.ResultsThecardiomyocytesfromneonateBalb/cmiceyoca

4、rdialcellsfolloattack,thetypicalCPEintheinfectionsofHeLacells.Thecardiomyocytesretainedintactmorphologyandpulsationforoverticroscopyshoyocardialcellshadnormalultrastructure,beroforganellesandvisiblecrystally-arrangedviralparticlesinthecytoplasm.Thelevelofmyocardialenzymesinthesupernatanto

5、ftheinfectedmyocardialcellsyocytes.ThepathogenesisofCVBonmyocardialcellsdiffersfromthatinHeLacell.　　Keyyocytes;CoxsackievirusB;suckingBalb/cmouse;primarycellculture　　B组柯萨奇病毒(CoxsackievirusB，CVB)是病毒性心肌炎和心肌病的主要病因，其敏感动物模型是Balb/c乳鼠，如果要离体研究CVB对心肌的致病性，必须原代培养Balb/c乳鼠心肌细胞[1]。CVB感染细胞通常表现为急性杀细胞病变，例

6、如，宫颈癌细胞HeLa细胞是CVB致病机制研究中最常用的细胞平台，CVB感染HeLa细胞后，在24h出现明显细胞病变(CPE)，细胞变圆聚集，48h细胞死亡脱落;理论上，CVB感染心肌细胞也应该表现为杀细胞效应。但是，分子流行病学研究证明，CVB可以持续存在心肌组织中。Quigley等[2]观察23例临床和组织学表现为心肌炎的患者，其中12例在平均43个月中发展为扩张型心肌病(DCM)，随后4例死亡，2例心脏移植，1例痊愈，其余仍为DCM。本课题利用CVB1核酸、嗜心肌毒株B组柯萨奇病毒3型(CVB3m)攻击原代培养的Balb/c乳鼠心肌细胞，观察CVB在心肌细胞中的感染

7、特点，从而说明CVB在心肌细胞中的感染机制。　　1材料和方法　　1.1材料　　1.1.1病毒CVB3m由哈尔滨医科大学微生物学教研室惠赠。　　1.1.2质粒、细胞与实验动物pNI4质粒含CVB1cDNA全序列[3]，由日本东京大学NarushiIizuka教授惠赠;HeLa细胞和工程菌株E.coliDH5α均购自哈尔滨医科大学微生物学教研室;Balb/c乳鼠(出生4天内)购自徐州医学院实验动物中心。　　1.1.3主要酶类及试剂盒质粒小量提取试剂盒RT-PCR试剂为Invitrogen公司产品。限制性核酸内切酶EcoRV、Cla