柯萨奇病毒a组16型感染幼龄树鼩的研究

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1、硕士学位论文学校代码：10023学号：$2011018016柯萨奇病毒A组16型感染幼龄树昀的研究TheexperimentalinfectionofTupaiabelangerichinenseswithCoxsackievirusvirusA16所院：姓名：指导教师：导师小组：学科专业：研究方向：完成日期：医学生物研究所李建平刘龙丁研究员李琦涵研究员张莹助理研究员免疫学病毒免疫学2014年5月中国医学科学院北京协和医学院硕士研究生毕业论文目录摘要⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯

2、⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯IAbstract．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．⋯．．．．．．．．．．．．．⋯．．．．．．．．．．．．．．．．．⋯．．．．．．．．．．．⋯．⋯．．．⋯．．．．．．．．．⋯．．．．．．．⋯．．．．．⋯．⋯．．．III前言⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯一11CAl6的基本生物学特性⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯12CAl6的流行特征⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯23CAl6临床症状和病理表现⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯

3、⋯⋯⋯24HFMD疫苗研究⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．35CAl6动物模型⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯66树嗣生物学特性及应用⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．77本研究的目的及意义⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．8一实验材料与方法⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．9(一)实验材料⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．9(二)实验方法⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯12二实验结果与分析⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯

4、⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯24(一)动物临床表现⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯24(二)体温监测⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯24(三)血常规检测⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯25(四)Real．TimePCR标准品制备及标准曲线的建立⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯29(五)样品病毒核酸载量检测⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯34(六)病理学检查⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯38(七)免疫组化实验⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯

5、41三讨论⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯44结{仑⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．48参考文献⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．49附录一主要缩略词表⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯55附录二主要溶液配制⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯56致谢⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯59研究生简历⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．

6、60独创性声明⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．61中国医学科学院北京协和医学院硕士研究生毕业论文摘要手足口病(Hand，foodandmouthdisease，HFMD)，是一种世界范围内常见的儿童流行传染病，可由多种肠道病毒引起，其中，柯萨奇病毒A组16型(CoxsackievirusA16，CAl6)是导致该病的两大主要病原体之一。由于CAl6感染人体后常常表现为无临床症状出现或者感染后所引起的HFMD症状比较温和，所以没有引起人们太多的关注，但是近年来，有越来越多的报道表明CAl6也

7、可导致心肌炎和难治性休克等并发症的发生，在部分地区，HFMD的重症病例中由CAl6所引起的比例不容小觑，严重威胁婴幼儿生命健康，这就需要我们对CAl6给予更多的关注和深入的研究。目前尚无针对CAl6的有效药物或疫苗，CAl6致病机理依然处于探索研究中，因此建立合适的动物模型对于深入基础研究和进行疫苗研发与药物研究是非常重要的。当前报道的比较成功的CAl6感染动物模型主要是乳鼠，但由于感染年龄偏低和感染病期过程过短限制了小鼠模型在基础研究和疫苗药物评价中的作用，并且小鼠为啮齿类动物，尚不能完整反映CAl6感染的全过程和

8、病理学效应。树驹是灵长类动物的近亲，外形似松鼠，具有体型小、繁殖快、易驯养易饲育、成本低以及新陈代谢、生理机能、大体解剖、基因组均与人类具有相似性等优点，已作为一种新的实验动物，被广泛用于医学生物学研究。近年来的研究表明，树嗣对多种人类常见疾病具有敏感性，被认为是有望替代猴子和小鼠等用于研究人类疾病的动物。目前已经较成功地建立的病理模型有轮状病