不同产地山药rdna its区序列的比较

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1、不同产地山药rDNAITS区序列的比较【关键词】山药；,,ITS区序列；,,聚合酶链反应　　摘要：目的分析怀山药与其它产地山药的rDNAITS区序列的差异，为山药的基源鉴定和品质评价提供分子依据。方法采用PCR扩增纯化后直接测序的方法测定不同产地山药的rDNA基因ITS核苷酸序列并作序列同源性分析。结果8种产地山药的ITS1片段长度均为165bp，ITS2片段长度均为158~160bp,5.8S片段长度为均为159bp。8种不同产地的山药ITS1和ITS2区分别有6个和9个碱基变异。结论利用ITS区序列的差异鉴别不同产区的山药提供了依据。　　关键词：

2、山药；ITS区序列；聚合酶链反应　　parisonofRibosomalDNAITSSequenceofRhizomaDioscoreaeinDifferentGeographicalRegions　　Abstract：ObjectiveTodistinguishDioscoreaeuoppositaThunb.fromdifferentgeographicalregionsbyparingRibosomalDNAITSsequence.MethodsDirectPCRsequencingologyofrDNAITSsequence.ResultsE

3、ightDioscoreaeoppositaThunb.differentgeographicalregionsbyPCRtechnology.SequenceanalysisshodifferentgeographicalregionsaccordingtothevariationoftheITSsequences.　　KeyaDioscoreae为薯蓣科植物薯蓣DioscoreaoppositaThunb.的块茎，属多年生缠绕草本植物。是我国最大众化的传统保健食品之一，除了少数热带地区外，几乎各地都有栽培，可分山地生、平地生、也有野生的。山药集中

4、产于河南、陕西、山东等地区；在诸多品种中，以河南的“怀山药”最负盛名，其品质优良，既是食用的佳蔬，又是入药的道地药材，为历史上著称的“四大怀药”之一。山药具有补脾养肺、生津益肺、补肾涩精的功能，主治脾虚食少、久泻不止、肺虚喘咳、肾虚遗精、带下、尿频、虚热消渴等症。目前，道地药材多为栽培种植生产，由于种种原因，这些品种之间质量参差不齐，各品种的种质资源在形态特征、产量、质量及抗病性等方面均有较大差异，各品种间遗传背景、亲缘关系尚不清楚，传统的优良品种很难确定。长期以来的这些相关研究大多限于形态、化学、药效等方面，多停留在利用现代仪器分析技术对道地药材质

5、量优劣进行比较和评价，很少从生物学水平上，特别是从分子生物学水平上对道地药材的形成机理进行深入的探讨。因此，为了鉴定和评价道地药材品种内性状的变异和品质差异及不同种质之间的亲缘关系，克服用传统鉴别方法不易区分品种的缺点，亟待分子生物学技术对山药种质资源进行研究。随着DNA分析技术的发展,PCR测序方法已经被应用到了中药品种鉴别领域［1］，在采用传统形态学、化学方法很难鉴别不同产地的山药情况下，虽然rbcL，18SrRNA序列标记不失为一种有效的分子手段，但是由于叶绿体rbcL和核rDNA基因比较保守,进化速率远低于叶绿体赖氨酸－tRNA内含子成熟酶基

6、因(matK)和核糖体非编码转录区(ITS)基因［2］高等植物核糖体DNA(rDNA)的每个重复单位从5'端开始,包括外转录间隔区(externaltranscribedspacer,简称ETS)、18S基因、第一内转录间隔区(internaltranscribedspacer1，简称ITS1)、5.8S基因、第二内转录间隔区(ITS2)和26S基因,重复单位之间为基因间隔区(intergenicsoacer，简称IGS)称为非编码区(non-transcribedspacer,NTS)。rDNA的编码区序列(18S、5.8S和26S基因)选择压大，

7、属高度保守区。非编码区序列(如IGS，NTS)是高变区,选择压小得多，序列差异主要表现在该区上。而ITS区是中度保守区，序列的变异度处于两者之间，存在种内多态性［3~5］。为探讨不同产地山药分子生物学方面的差异，本实验采集了8个不同产区的山药栽培和野生样品，采用PCR直接测序技术进行了山药rDNAITS区序列的测定，并用phylip3.6软件进行了分析，从分子水平上比较不同地区山药的差异。　　1材料与方法　　1.1样品本实验所用山药为供提取DNA及ITS测序的不同品种山药叶片采自河南省的温县、武陟及山西、山东、河北、广东、广西等产地的比较有代表性的8

8、个样品，采用硅胶快速干燥，4℃保存。原植物经河南中医学院生药教研室陈随清博士鉴定学名。所有凭证标本存于河南中