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1、探讨兔心肌缺血后处理的作用机制 己有的证据表明，STAT1和STAT3激活对心肌具有相反的作用，以下是小编搜集整理的一篇探究兔心肌缺血后处理的作用机制的论文范文，供大家阅读参考。 缺血后处理(ischemicpostconditioning,IPO)即通过在心肌的再灌注早期经过反复短暂的缺血与再灌注,能减少心律失常的发生,改善心功能,缩小梗死面积,减少心肌细胞凋亡[1]。 Murry等[2]提出的预处理不同,IPO是在缺血后、再灌注之前进行反复短暂的缺血与再灌注。IPO可对已发生的心肌缺血
2、事件起到挽救的作用,弥补了不可预知缺血事件造成的慌乱,尽量减少心肌的损害,有其更大的应用前景。但对其机制的研究尚未有公认的结论,有待进一步研究。本研究通过建立兔在体心肌IPO模型[3],观察JAK-STAT通路在心肌IPO中的作用,进一步探讨IPO的机制问题。 1材料与方法 1.1实验动物 新西兰大白兔,雌雄兼有,体质量2.5~3.0kg。将实验用兔(雌雄兼有)40只随机分为3组。组1(单纯缺血再灌注组,I/R组,n=10)进行简单的缺血再灌注,暴露左心室前降支(LAD),以1号丝线于中上
3、1/3处旁开1mm进针缝线,横穿LAD,另一端旁开1mm出线,剪针,套管,阻断LAD远端血流(以心电图ST段抬高为标志)30分钟后,开放120分钟。组2(单纯缺血后处理组,IPO组,n=10)于LAD的中上1/3阻断30分钟,开放后30秒再予阻断30秒,再开放,如此反复3次。 即进行IPO,随后再灌注120分钟。组3(AG490+IPO组,n=10)于阻断后10分钟给予酪氨酸激酶抑制剂AG490(1mg/kg),其他操作同组2。 1.2材料与试剂 AG490(美国SIGMA公司);Tune
4、l试剂盒(德国宝灵曼公司);TKR-200c小动物呼吸机(江西特力麻醉呼吸设备公司);RM6240C生理信号采集系统(成都仪器厂);荧光显微镜(日本Olympus公司);1.3数据采集以阻断前10分钟为起点,期间每10分钟记录1次左心室压力情况,以LSD(是一种文件格式,由RM6240C系统自动生成)文件保存,RM6240C多道生理信号采集系统进行分析,所得数据保存于Excel表格中。每组分别于阻断即刻、阻断后20分钟、再灌注后60分钟、再灌注后120分钟抽取2ml血液作为标本,进行心肌磷酸激酶
5、(CPK)的检测。最后处死动物,取缺血中心区心肌,裁减为黄豆大小置入4%多聚甲醛固定液和10%中性缓冲福尔马林固定溶液中保存,做好标记。固定48~72小时后进行常规石蜡包埋,进行Tunel检测观察细胞凋亡情况。 1.4统计学方法采用SPSS17.0统计软件进行数据分析,实验数据均以均数±标准差(x-±s)表示,组间比较采用方差分析,不同时点间的比较采用重复测量的方差分析。 P<0.05表示差异有统计学意义。 2结果 2.1CPK的变化 不同组间差异有统
6、计学意义(P<0.01),时点间差异有统计学意义(P<0.01),组别与时点间存在交互作用(P<0.01),进一步分析组间和时间的单独效应,各组的CPK于阻断后较缺血前明显增加(P<0.05),组1和组3再灌注120分钟较60分钟下降,差异有统计学意义(P<0.05);组2CPK于再灌注60分钟和120分钟后较组1显著降低(P<0.05),而组3与组1再灌注后60分钟两者之间比较差异无统计学意义,结果见表1。 2.2心功能指标的变化 本实验以RM6240C
7、多道生理信号采集系统分析了所记录的压力波形,通过该系统给出的参数,我们对左心室内压上升及下降最大速率(±dp/dtmax,即在收缩期单位时间内左心室压力上升的最大速度,以+号表示,反映了心室的收缩功能;舒张期单位时间内心室压力下降的速度,以-号表示,反映左心室的舒张功能),采用SAS软件进行了LINEPLOT分析,以时间作为X轴,±dp/dtmax作为Y轴(图1~3)。 ±dp/dtmax是反映左心室收缩功能及舒张功能的重要指标,越靠近0点表明心功能越
8、差,对比组1与组2,可看出组1心功能呈下降趋势;而组2不明显,说明IPO对心功能起到了保护作用。组3波形也向0点靠近,说明AG490阻断了后处理的保护作用。 2.4心肌细胞凋亡变化 光镜下随机选取10个视野(400)计数阳性细胞占视野中总细胞的千分率。 每张切片随机选取视野,计数100个细胞,并计数细胞核呈现棕黄色颗粒的阳性表达细胞,其总和即为这张切片心肌凋亡细胞的千分率。在镜下可以看到组1与组2的阳性率较高,并可见凋亡细胞经常簇集在一起;组3的心肌凋亡细胞相对较少。组2的细胞凋亡千分率均
