罗非鱼无乳链球菌的分离 鉴定及重组表面免疫原性蛋白hissip的免疫效果初步分析

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1、飞(•:.学校代码：10264研究生学号：M080101040●上海海洋大学硕士学位论文罗非鱼无乳链球菌的分离，鉴定及重组表题目：面免疫原性蛋白His．Sip的免疫效果初步●研究IsolationandIdentificationofStreptococus英文题目：agalactiaefromTilapiaandImmunogenicityofProteinHis—SipRecombinantProtein专业：水产养殖研究方向：水产动物遗传育种姓名：黎炯●指导教师：叶星研究员二0一一年六月三日

2、1•••上海海洋大学硕士学位论文中国水产科学研究院珠江水产研究所●罗弓乍鱼无乳链球菌的分离～鉴定及重组表面免疫原性蛋白His—Sip的免疫效果研究●黎炯巾一一海一一●擅壹巫论一论一堂论答答昱速宜室童垡文辩辩塾堂左递一釜攫评委委2011年5月15日'.•l、.上海海洋大学硕士学位论文ShanghaiOceanuniVer鲫tyMasterDissertationPearlRiverFisheriesResearchInstitute●IsolationandIdentificationofStrep

3、tococusagalactiaefromTilapiaandImmunogenicityofHis-SipRecombinantProteinLiJiongAdvisor：Prof．YeXingMainfield：FisheryHeredityBreeding●●2011．5．15•••上海海洋大学硕士学位论文上海海洋大学学位论文原创性声明本人郑重声明：我恪守学术道德，崇尚严谨学风。所呈交的学位论文，是本人在导师的指导下，独立进行研究工作所取得的成果。除文中已经明确注●明和引用的内容外，本论文不

4、包含任何其他个人或集体己经发表或撰写过的作品及成果的内容。论文为本人亲自撰写，我对所写的内容负责，并完全意识到本声明的法律结果由本人承担。学位论文作者签名：批同日期：∞，f年-7月／日上海海洋大学学位论文版权使用授权书●学位论文作者完全了解学校有关保留、使用学位论文的规定，同意学校保留并向国家有关部门或机构送交论文的复印件和电子版，允许论文被查阅或借阅。本人授权上海海洋大学可以将本学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索，可以采用影印、缩印或扫描等复制手段保存和汇编本学位论文。保密口，在年解

5、密后适用本版权书。本学位论文属于不保密口学位论文作者签名：渐日期：Ⅺ’降7月／日●•••上海海洋大学硕士学位论文答辩委员会成员名单姓名工作单位职称备注施志仪上海海洋大学教授主席区又君南海水产研究所研究员委员李其昌广东现代农业集团研究所研究员委员石和荣中山大学研究员委员邓国成珠江水产研究所研究员委员全迎春珠江水产研究所助理研究员秘书答辩地点珠江水产研究所答辩日期2011．6—rr}I上海海洋大学硕士学位论文罗非鱼无乳链球菌的分离，鉴定及重组表面免疫原性蛋白His．Sip的免疫效果研究●摘要i罗非鱼(

6、Tilapia)隶属于鲈形目、鲈形亚目、丽鱼科(Cichlidae)、罗非鱼属(亦称丽鲷科，丽鲷属)。由于罗非鱼具有杂食性、生长快、：￡繁殖力强、适应性广等优点，目前己成为世界性主要养殖鱼类，中国}罗非鱼养殖产量占世界的一半以上。抗病力强是罗非鱼被广泛养殖的主要因素之一。但随着世界各地罗非鱼链球菌病的出现，一直以来认}为罗非鱼具有强抗病力、不易患病的观点己受到挑战。最近几年我国■l也有罗非鱼链球菌病的发生，但仅局限于小范围内流行，所导致的死』亡率为20．30％。2009年广东与海南省多个罗非鱼主养

7、区发生暴发病，÷与往年的发病情况比较，本次病害发生的范围较广、罗非鱼受感染率与死亡率均较高，个别发病率超过50％，发病鱼死亡率超过95％。本实验室研究人员赶赴广东与海南省各罗非鱼主养区，采集发病鱼样本，开展了相关研究。本论文内容包括病原菌的分离与鉴定、药物敏感性j，o试验；双重PCR法鉴定无乳链球菌与海豚链球菌；致病菌分子血清型的鉴定；重组表面免疫原性蛋白Sip的制备及免疫原性分析等。研究结{—0i}慷果对罗非鱼链球菌病的有效防控、促进罗非鱼养殖业的健康发展具有重要意义。J1病原菌的分离与鉴定跫物

8、敏感盼析缔Ⅳ移97《从各地患病罗非鱼蛀矧病灶上共分离纯化了二十多株优势菌。回?1、{，一。≯，归感染试验显示这些分离菌株都能感染罗非鱼且具有强毒力。挑取其《上海海洋大学硕士学位论文I，》；中毒力最强的7株，进行形态特征和主要理化特性分析，初步鉴定为’无乳链球菌(Streptococusagalactiae)。进一步对其进行分子鉴定，PCR，!扩增16SrRNA基因和无乳链球菌特有GBS．specificgene咖(CAMP；factor)基因的全长序列，BLAST分析显示所有菌株的