耐碳青霉烯类肠杆菌科细菌耐药机制及同源性分析

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1、重庆医科大学硕士学位论文耐碳青霉烯类肠杆菌科细菌耐药机制及同源性分析姓名：苏小燕申请学位级别：硕士专业：临床检验诊断学指导教师：夏云201205耐碳青霉烯类肠杆菌科细菌耐药机制及同源性分析摘要目的：对我院肠杆菌科细菌对碳青霉烯类抗生素的耐药机制进行研究，及其同源腆tzL进行流行病学调查，旨在为我院预肚PJJ和控制多重耐药71J，ZK乡≮IHJt6水足工1J秒

2、乙7IJ7¨于¨叫旦，日1工／V秒0}叽J火／r¨]：亡巾U夕兰邑叫，≥0的肠杆菌科细菌感染及临床指导用药提供实验室依据。方法在重庆医科大学附属第一医院筛选了

3、2009年l1月一--2011年4月全部肠杆菌科细菌对碳青霉烯类抗生素不敏感的共34株。用Vitek2Compact全自动药敏检测系统进行细菌鉴定、常规药敏检测及MIC值测定；先把产碳青霉烯酶菌株用改良Hodge实验做筛选；PCR扩增常见耐药基因和Ompk35／36基因并进行测序分析；细菌外膜蛋白是否缺失依靠SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳检测；PCR扩增Intl、Int2和Int3整合酶基因；质粒接合和消除试验研究细菌耐药基因的传播方式。ERIC-PCR对细菌进行同源性分析。结燕从1876株临床肠杆科细菌中共检测出34

4、株，全部对厄他培南不敏感，合并对亚胺培南不敏感的有8株。19株细菌MHT阳性。常见耐药基因扩增结果显示，携带ESBLs耐药基因的有30株，耐药基因blaTmbias小blac删一。和．blac．M，。都有阳性菌株存在；各检测出携带blao眦和bla^㈣两种AmpC耐药基因的细菌3株；8株携带b1aI。，基因，14株携带blao。。基因。5株肺炎克雷伯菌都携带Ompk35／36基因，不携带碳青霉烯酶基因的三株菌，Ompk35／36基因表达量下调。8株大肠埃2希菌、1株阴沟肠杆菌和3株肺炎克雷伯菌有外膜缺失现象。27株

5、菌Int1整合酶基因扩增阳性，包括6株大肠埃希菌、17株阴沟肠杆菌和4株肺炎克雷伯菌。未扩增出Int2和Int3整合酶基因。除骨科一株阴沟肠杆菌外，其余33株细菌质粒消除和接合试验均成功。ERIC-PCR结果表明，12株大肠埃希菌分为3个基因型，17株阴沟肠杆菌分为6个基因型，5株肺炎克雷伯菌为一个基因型。l至剀芏，u1乔丹oP火几田旧凼／V‘I至幽生。结论：厄他培南为底物的筛选产碳青霉烯酶菌株的效果优于亚胺培南。我院耐药菌所产碳青霉烯酶以金属酶IMP-8和丝氨酸蛋白酶OXk—l为主，不产碳青霉烯酶的菌株主要耐药原

6、因是外膜蛋白缺失合并产ESBLs酶和kmpC酶。细菌耐药基因主要存在于第一类整合子上，并通过质粒进行传播。本院碳青霉烯类抗生素非敏感肠杆菌科细菌主要产生在外科各科室。我院耐碳青霉烯类抗生素的肺炎克雷伯菌及泌尿外科的大肠埃希菌存在流行趋势。关键词：肠杆菌科细菌；基因分型；ERIC-PCR；质粒；外膜蛋白INVESTIGATEoNRESIST．fU呵CEMECHANISMANDHoMOLOGYOFCARBAENEM-RESISTANTENTEROBACTERIACEAESPECⅡ￡SToinvestigatethema

7、incarbapenem—resistantmechanismandhomologyofourhospital．Thepurposeofthisstudywastoprovidealaboratoryevidenceforthepreventionandcontrolofinfectionandclinicaltreatment．AtotalofthirtyfourEmerobacleriaceaestrainswithdecreasedsusceptibilitytocarbapenemswerecollecte

8、dintheFirstAffiliatedHospitalofChongqingMedicalUniversityfromNovember2009toApril2011．Bacteriaidentification，antibioticsensitivitytestandMICweredoneroutinelybyVitek2Compactsystem．ModifiedHodgeTestWasusedtoscreenstrainsproducingcarbapenemases．Severalantimicrobia

9、lresistancegenesandOmpk35／36genesweredetectedbyPCR-basedassaysandPCRproductsweresequenced．SDS-PAGEwasperformedtodetectoutermembraneproteins．PCRamplificationoftheclass1，2，3mtegraseg