碳青霉烯类抗素敏感性降低肠杆菌科细菌耐药现状及耐药机制研究

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1、温州医学院硕士学位论文碳青霉烯类抗素敏感性降低肠杆菌科细菌耐药现状及耐药机制研究姓名：郭美艳申请学位级别：硕士专业：临床检验诊断学指导教师：周铁丽2012-05-12温州医学院硕士学位论文碳青霉烯类抗生素敏感性降低肠杆菌科细菌耐药现状及耐药机制研究中文摘要目的为了了解肠杆菌科细菌对碳青霉烯类抗生素的耐药特性和耐药机制，本研究第一部分对温州医学院附属第一医院2007年至2010年临床分离的碳青霉烯类敏感性降低的肠杆菌的临床分布和耐药性进行分析，通过了解肠杆菌的临床分布和临床感染情况及耐药现状和耐药特点，为临床治疗和医院内感染的监控提供依据。第二部分通过检测碳青霉烯酶、AmpC酶、外膜蛋白

2、、脉冲场凝胶电泳等手段研究肠杆菌细菌对碳青霉烯类抗生素的耐药机制和耐药菌株流行情况，分析耐药性与不同耐药机制间的关系，以了解本地区临床分离肠杆菌细菌对碳青霉烯类耐药的主要机制，为控制耐药性的播散提供依据。方法1．回顾性调查2007年至2010年间温州医学院附属第一医院临床分离62株碳青霉烯类敏感性降低的肠杆菌细菌的分布情况，分析其对青霉素类、头孢菌素类、氨基糖苷类、喹诺酮类、碳青霉烯类等抗菌药物的耐药性。2．收集浙江地区不同医院保存并存活的碳青霉烯类敏感性降低肠杆菌70株，用琼脂二倍稀释法测定其对亚胺培南、美罗培南和厄他培南的最低抑制浓度(MIC)。3．碳青霉烯酶检测：改良Hodge试

3、验筛选KPC酶，PCR法扩增KPC、VIM、IMP、SPM-1、NDM-1等碳青霉烯酶基因，并对PCR法扩增阳性株测序确定基因亚型。4．常见ESBL$1Ampc酶基因检测：PCR法对TEM、CTX—M、DHA、EBC等基因进行扩增，并对阳性菌株进行测序分型。5．外膜蛋白检测：对细菌外膜蛋白进行提取，然后进行SDS-PAGE电泳，以碳青霉烯类敏感株作为对照菌株，检测有无外膜蛋白条带缺失。6．以32株碳青霉烯酶基因(KPC和工肝)阳性菌株作为供体菌，大肠埃希菌温州医学院硕士学位论文EC600为受体菌进行接合转移试验，证明碳青霉烯酶基因的可转移性。7．运用脉冲场凝胶电泳对32株产KPC型酶的

4、菌株进行分析，以了解临床分离肠杆菌科细菌的流行病学情况。结果1．2007年1月"-一2010年10月从温州医学院附属第一医院临床送检标本中共分离到非重复碳青霉烯类敏感性降低肠杆菌科细菌62株，其中肺炎克雷伯菌5株，摩根摩根菌8株，弗氏枸橼酸杆菌4株，沙雷菌属细菌19株和肠杆菌属细菌26株。标本来源以痰液最多，占56．5％，其次为尿液19．4％，创面6．5％，引流液和血液各4．8％，其他标本来源于腹水、胆汁、脓液、组织、导管的各l株；标本来源科室分布不一，62株碳青霉烯类敏感性降低肠杆菌科细菌主要来源于监护病房(1CU)i0株、神经外科9株、脑外科8株和其他十多个科室。2．临床常用抗菌药

5、物敏感性试验表明：菌株对庆大霉素和左旋氧氟沙星的敏感性最高，敏感率分别为72．6％$f177．4％；大约有一半的菌株对三代头孢菌素和含有B一内酰胺酶抑制剂的复合药物表现为敏感；耐药率最高是氨苄西林和头孢唑啉，几乎全部菌株都耐药；对碳青霉烯类抗生素表现出不同程度的耐药或敏感性降低，亚胺培南和美罗培南的敏感率分别为62．9％和72．6％，厄他培南为43．5％。不同菌株对3种碳青霉烯类抗生素的敏感性表现不一，如摩根摩根菌只对亚胺培南的敏感性降低，肠杆菌属的细菌主要是对厄他培南的敏感性降低。3．70株碳青霉烯类敏感性降低肠杆菌科细菌中改良：Hodge试验阳性30株，PCR法检得碳青霉烯酶基因阳

6、性菌株32株，其中KPC一2型29株、IMP一8型2株和IMP一4型1株。TEM和CTX-M基因分别检出9株和1l株，DHA型和EBC型分别为14株和12株，其他基因未检测到。4．32株产碳青霉烯酶菌株接合转移试验成功29株，提示碳青霉烯酶基因可以通过接合转移的方式在不同种属细菌间传播。5．SDS—PAGE分析70株碳青霉烯类敏感性降低肠杆菌科细菌，共检测到孔膜蛋白缺失菌株19株。6．32株产碳青霉烯酶菌株进行脉冲场凝胶电泳分析发现，本院粘滞沙雷菌的克隆播散现象严重。19株粘质沙雷菌中有9株呈同一个克隆型，主要在神经内外科和脑外科的科室内部或科室问进行克隆的播散。结论4温州医学院硕士学

7、位论文1．碳青霉烯类敏感性降低的肠杆菌科细菌在本地区有较高的检出率，不同菌属细菌对碳青霉烯类抗生素的敏感性有一定的差异。2．不同菌属肠杆菌科细菌对碳青霉烯类抗生素的耐药机制存在差异。肺炎克雷伯菌、弗氏枸橼酸杆菌和粘质沙雷菌主要是产生KPC型酶导致对碳青霉烯类抗生素高度耐药；摩根摩根菌主要是DHA型AmpC酶的存在表现对亚胺培南的敏感性降低；肠杆菌属耐药菌主要机制是产生EBC型AmpC酶联合膜孔蛋白的缺失，且主要表现对厄他培南的敏感性降低。3．接