在小麦—叶锈菌互作过程中taeds1基因的克隆与表达分析

《在小麦—叶锈菌互作过程中taeds1基因的克隆与表达分析》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在学术论文-天天文库。

1、万方数据分类号：盟垒2：鱼密级：公珏单位代码：学号：100862011071在小麦一叶锈菌互作过程中勋肋SJ基因的克隆与表达分析CloneandExpressionof劢删GeneintheInteractionProcessbetweenWheatand砌cc觑砌打拓站觑口学位申请人：牛宏伟指导教师：侯春燕教授王冬梅教授学科专业：细胞生物学学位类别：理学硕士授予单位：河北农业大学答辩日期：二。一四年五月三十一号万方数据独创性声明本人声明所呈交的学位论文是本人在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果。据我所知，除了文中特别加以标注和致谢的地方外，论文中不包

2、含其他人已经发表或撰写过的研究成果，也不包含为获得塑皇垦盔些盘堂或其他教育机构的学位或证书而使用过的材料。与我一同工作的同志对本研究所做的任何贡献均己在论文中作了明确的说明并表示谢意。学位论文作者签名：坪嘉印签字日期：阳f，中年易月多日学位论文版权使用授权书本学位论文作者完全了解塑兰垦盔些盘鲎有关保留、使用学位论文的规定，有权保留并向国家有关部门或机构送交论文的复印件和磁盘，允许论文被查阅和借阅。本人授权塑皇垦盔些盘堂可以将学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索，可以采用影印、缩印或扫描等复制手段保存、汇编学位论文。(保密的学位论文在解密后适用本授权

3、书)学位论文作者签名：干知佧签字日期：矽t叩年石月弓日学位论文作者毕业后去向：工作单位：通讯地址：导师签名：6夏务劫签字日期：如l咋年石月弓日邮编：电话：万方数据摘要小麦叶锈菌属于专化性非常强的活体寄生真菌。本试验室前期工作已经证明，在不亲和组合中，侵染点及其周围少数细胞迅速死亡，发生过敏性反应(hypersensitivereaction，HR)，从而限制菌的发育。并且前期工作通过构建叶锈菌侵染早期的小麦SSH文库及ESTS序列分析，筛选到EDSJ『在不亲合组合接种后表达量有所增加。EDSl蛋白是植物免疫系统中防御第一线中非常重要的一个组分。最新的研究结果

4、揭示拟南EDSl可直接作为病原效应物的靶蛋白，通过与T状．NBB．LRR类抗性蛋白互作调控免疫反应。由于目前在单子叶植物中还没有检测到TIR-NBB．LRR类抗性蛋白的存在，在单子叶植物中EDsl是否参与寄主抗病反应?这一问题成为我们关注的焦点。本试验以小麦品种洛夫林10分别与叶锈菌小种260、165组成不亲和组合及亲和组合，初步探讨死EDSJ，在小麦抵抗叶锈菌侵染中的作用，取得如下结果：1、在已知的劢EDSJ『135lbp片段的基础上，利用5’RACE技术，向5’端延长了200bp左右。利用延长得到的约1551bp的序列进行比对，比对出一段小麦基因组DNA

5、序列，将此序列与二穗短柄草的凹SJf的CDS比对，去除内含子序列，最终得到而ED咯J完整CDS，全长1872bp。2、选取了在小麦基因表达分析中常用的8个管家基因彳C乃Ⅳ、彳C皿v2、G么尸明、G么胱、彳兀舾、B丁凇、E兀彳、删彳2以及在小麦感染条锈菌中筛选到的稳定表达的尉共9个基因作为候选内参基因，利用qImPCR技术及GeNom和No姗Finder软件分析，筛选到在小麦与叶锈菌互作过程，适用于实时定量PCR分析的最稳定的内参基因G4脚。3、以G么删为内参基因，利用实时定量PCR检测表明死EDS』在不亲和组合互作早期表达量明显增加。4、构建了死EDSJ亚细

6、胞定位载体，利用基因枪法转化洋葱表皮细胞，荧光显微镜观察显示死EDSJ『定位于细胞核中。5、构建了死肋SJvIGS载体，对小麦叶片进行瞬时沉默，检测有较好的沉默效率。‘以上研究结果对进一步深入探讨死EDSJ在小麦抵抗叶锈菌侵染中的作用机制、阐明小麦抵抗叶锈菌侵染的分子机制具有重要意义。关键词：小麦；叶锈菌；而EDSJ；内参基因；qRl’-PCR万方数据CloneandExpressionofTaEDSlGeneintheInteractionProcessbetweenWheatandPucciniatriticinaAbstractWheatleafrus

7、tisspecializedforparasiticfungiresistanceinvivo．Inourpreviousstudies，thecellrapidlydeathnearthepathogeninfectpartsandpathogen，formingnecroticlesion，whichmakethegrowthofpathogenicbacteriacouldnotgettherightenvironmentandnutritionthusleadthedeathinIncompatiblecombinations．Yaneta1．had

8、establishedaSSHlibraryofth