槟榔及槟榔碱对小鼠的肝肾毒理研究

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1、汕头大学医学院硕士学位论文汕头大学医学院硕士学位论文槟榔及槟榔碱对小鼠的肝肾毒理研究Hepaticandrenaltoxicitystudiesofarecolineandarecanutinmice研究生:古桂花导师:袁劲松年级：2010级学制：三年制(统招全日制)申请学位级别：医学硕士学科专业：药理学论文提交日期：2013年5月论文答辩日期：2013年5月学位类型：医学学位学位授予单位：汕头大学汕头大学医学院硕士学位论文独创性声明本人声明所呈交的学位论文是本人在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果。除了文中特

2、别加以标注和致谢的地方外，论文中不包含其他人已经发表或撰写过的研究成果，也不包含为获得汕头大学或其他教育机构的学位或证书而使用过的材料。与我一同工作的同志对本研究所做的任何贡献均已在论文中作了明确的说明并表示谢意。学位论文作者签名：签字日期：年月日学位论文版权使用授权书本学位论文作者完全了解汕头大学有关保留、使用学位论文的规定，有权保留并向国家有关部门或机构送交论文的复印件和磁盘，允许论文被查阅和借阅。本人授权汕头大学可以将学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索，可以采用影印、缩印或扫描等复制手段保存、汇编学

3、位论文。（保密的学位论文在解密后适用本授权书）学位论文作者签名：导师签名：签字日期：年月日签字日期：年月日学位论文作者毕业后去向：工作单位：电话：通讯地址：邮编汕头大学医学院硕士学位论文中文摘要目的本研究以槟榔生物碱的提取分离为基础，含量测定为定量依据，建立槟榔碱与槟榔粗提物对小鼠的肝肾损伤模型，从生化检验学、病理组织形态学、流式细胞学等方面研究槟榔碱与槟榔粗提物对小鼠的肝肾毒性。方法1.提取分离称取槟榔干燥粉末10kg，75%乙醇渗漉提取，提取液浓缩后以2%稀盐酸溶解，减压抽滤，滤液加浓氨水使之沉淀，再用乙酸乙酯萃

4、取，浓缩得总生物碱浸膏，将浸膏用正相硅胶柱层析和反向ODS柱层析结合分离得到生物碱单体。2.含量测定高效液相色谱法测定槟榔中槟榔碱、槟榔次碱与去甲基槟榔次碱的含量，色谱条件为：Partisil10SCX阳离子色谱柱（4.6mm×250mm，10μm），-1流动相为乙腈—0.5%磷酸（三乙胺试液调pH=3.8）（50：50），流速1mL·min，检测波长215nm，柱温25℃，进样量：20μL。并比较不同烘烤时间与不同煮沸时间对这三种生物碱含量的影响。3.毒理研究30只小鼠随机分为正常对照组、槟榔碱低剂量组、槟榔碱高剂

5、量组、槟榔粗提物低剂量组和槟榔粗提物高剂量组。每天灌胃，持续20d，以建立诱导肝肾损伤的小鼠模型。使用全自动生化分析仪检测血清ALT、AST、ALP、TBIL、ChE、Cr和BUN的含量变化；用苏木素-伊红（HE）染色观察肝肾组织病理学变化；采用流式细胞仪AnnexinV/PI双染方法检测肝细胞的凋亡率情况。结果1.提取分离部分得到4个化合物，其结构尚在鉴定之中。2.含量测定所建立的高效液相色谱法精确、灵敏、重现性好、回收率高，可以有效的用于槟榔碱、槟榔次碱以及去甲基槟榔次碱的含量测定。不同处理工艺对槟榔生物碱含量的

6、影响结果表明：生物碱的含量随烘烤或者煎煮时间的延长而降低，100℃烘烤8h后生物碱的损失率约50%，而煮沸0.5h后I汕头大学医学院硕士学位论文损失率高达80%。3.肝肾毒理研究表明：将不同浓度的槟榔碱和槟榔粗提物对小鼠灌胃20天后，小鼠肝肾的相对重量没有发生显著性变化。病理切片结果显示肝脏发生了明显的组织病变，肾脏的病变则较轻微。给药后的小鼠血清肝功能生化指标ALT、AST与ALP均有显著性升高，TBIL和CHE则没有显著性变化，肾功能生化指标Cr和BUN亦有显著性升高。流式细胞术分析测得纯槟榔碱组与槟榔粗提物组的

7、细胞凋亡率均有显著性升高，并呈现剂量依赖性。结论本实验建立了槟榔中生物碱的提取分离以及含量测定的可靠方法，并以定性定量工作为基础进行了槟榔的肝肾毒理研究，发现槟榔粗提物与槟榔碱对小鼠的肝肾功能均有损伤作用，并且对肝脏的损害比对肾脏大得多，针对同一器官而言，纯槟榔碱比相应浓度的粗提物所产生的毒性更大。关键词槟榔；槟榔碱；提取分离；毒理II汕头大学医学院硕士学位论文AbstractObjectiveThepresentstudy,premisedonextractionandquantitativeanalysisoft

8、healkaloidsinarecanut,wastodevelopamicemodelwithliverandkidneyinjurybasedonthetoxicityofarecolineandtheaqueousextractofarecanut(AEAN).Thehepaticandrenaltoxicitywasevaluatedf