体内药物分析1

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1、体内药分翻译年级：2010级专业：药物分析学号：201040047姓名：付云飞LC/MS/MS法对人血浆中唑类抗真菌药物的监测J.W.C.ALFFENAAR∗,A.M.A.WESSELS,K.VANHATEREN,B.GREIJDANUS,J.G.W.KOSTERINK,D.R.A.UGESDEPARTMENTOFHOSPITALANDCLINICALPHARMACY,UNIVERSITYMEDICALCENTERGRONINGEN,UNIVERSITYOFGRONINGEN,POBOX30.001,9700RBGRONINGEN,THENETHERLANDS摘要：微生物，真菌会侵袭免疫系

2、统受损的病人，唑类抗真菌药物可用于预防和治疗这一类的感染，因此在过去的几年里对唑类药物监测的关注度逐步增加。并且要根据个体间差异，药物的相互作用，血药中毒浓度和治疗的成功性来制定唑类药物的监测频率，因此快速精确的分析方法是很必要的。这种方法是用沉淀蛋白法处理血浆样品，再利用LC/MS/MS进行监测血药浓度，并已根据食品药品监督管理居生物样品鉴定方法的指导原则进行了方法的确证。对临床范围内的人血清中四种常用的唑类药物的定量下限的监测可得到很好的准确度和重现性。对于日间和日内的准确度和重现性的考察也得到了很好的结果。快速，敏感，精确的LC/MS/MS法已经建立起来，并且应用于人血浆中伏立康唑，

3、氟康唑，伊曲康唑，泊沙康唑的监测，这种新的方法很适合于临床药物代谢动力学的研究及常规日常的检测中。关键词：LC-MS/MS；治疗性药物的监测；药物代谢动力学；唑类抗真菌药物；常规1．前言：侵入式真菌感染针对免疫系统受损的病人，唑类抗真菌药物（如伏立康唑，氟康唑，伊曲康唑，泊沙康唑）在预防和治疗这类真菌感染拥有了很坚固的地位。伏立康唑用于预防和治疗念珠菌病，同时氟康唑用于治疗曲霉菌病的感染及抗伏立康唑的念珠菌感染。伊曲康唑和泊沙康唑均用于对抗曲菌酶念珠菌并且课用于真菌感染的预防。泊沙康唑还可用于治疗接合菌病或是曲霉菌病的补救治疗。从唑类抗真菌药物的药物代谢研究中可以发现其中存在着很大的个体内

4、和个体间的差异性，这种差异性可以部分的解释为非线性药物代谢，生物利用度差异，药物之间的相互作用，及细胞色素P450的多态性。直到观察性研究表明血浆内唑类药物的浓度与效力和毒性之间的关系，才使得这种差异所造成的临床影响被人们所认识。对于这种唑类药物的治疗性监控因此而得以保证。在过去的很多年里，对于唑类药物的治疗性的监控在逐步的形成，并且现在已经达到了在监控下病人的剂量可以迅速改变的程度。对于血浆范围内的唑类抗真菌药物的监测，需要一种普遍的可用于高通量样本的分析方法。因此我们的目标是研究出一种简单，快速，灵敏的LC/MS/MS法，并且无须固相萃取用来分析人血浆中四种不同唑类药物。这种方法采用在

5、含有内标物质的人血清中加入蛋白沉淀剂沉淀蛋白，随后用HPLC分析，MS/MS检测唑类药物的过度离子及内标物质。2．材料与方法2.1药品及试剂氟康唑和伏立康唑（辉瑞公司，纽约，美国）；泊沙康唑（先灵葆雅公司，纽约，美国）；伊曲康唑和羟基伊曲康唑（扬森公司）；内标物质蓝丙咪唑（罗氏公司，武尔登，荷兰）；乙腈和水为色谱纯由（BIOSOLVEBV公司，法尔肯斯瓦德荷兰）；甲醇和其他使用的化学品为分析纯（VWR，阿姆斯特丹，荷兰）；用甲醇-乙腈(4:21,V/V)混合液溶解沉降剂，并向沉淀剂中加入0.04MG/L的蓝丙咪唑；可根据格罗宁根大学医学中心的指导方针汇集人血清样品2.2LC/MS/MS仪器

6、及使用条件LC–MS/MS质谱仪(THERMOFISHER，SANJOSE，USA)：三倍四级管LC–MS/MS，配有FINNIGANTMSURVEYOR®液相泵，FINNIGANTMSURVEYOR®自动进样器，设置温度为20℃；分析柱为C18柱(5UM,2.1MM×50MM)（HYPURITYAQUASTAR,INTERSCIENCEBREDA,THENETHERLANDS)，进样量为5UL的上清液，柱温20℃；流动相了为水溶液缓冲溶液（10G/L醋酸铵，醋酸35MG/L和三氟乙酸酐液2ML/L水），水和乙腈，流速为0.3ML/MIN；按照一下梯度运行：时间0-2分钟：5%缓冲液，95

7、-0%水，0-95%乙腈，时间2-3分钟：5%缓冲液，95%乙腈，时间3.0-3.1分钟：5%缓冲液，95%水，时间3.1-3.6分钟：5%缓冲液，95%水；FINNIGANTMTSQ®QUANTUM三级四极杆串联质谱联用仪，配有电喷雾离子化源(ESI)，检测方式:正离子检测，在扫描宽度为0.5M/Z时测得的参数如下：氟康唑为M/Z307.2>219.9（碰撞能量20伏特），伏立康唑为M/Z350.0>281.1（碰撞能