人侵润的骨髓间充质干细胞通过外泌体促进肠癌细胞干性的实验研究

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1、分类号：R34单位代码：10159密级：公开学号：201210019博士学位论文中文题目：人侵润的骨髓间充质干细胞通过外泌体促进肠癌细胞干性的实验研究英文题目：Theexperimentalstudyofhumaninfiltratingbonemarrowmesenchymalstemcellspromotethestemnessofcoloncancercellsthroughexosomes论文作者：李宏丹指导教师：李丰教授学科专业：细胞生物学完成时间：2018年3月中国医科大学博士学位论文中国医科大学博士学位论文人侵润的骨髓间充质干细胞通过外泌体促进肠癌细胞干性的实验研

2、究Theexperimentalstudyofhumaninfiltratingbonemarrowmesenchymalstemcellspromotethestemnessofcoloncancercellsthroughexosomes论文作者李宏丹指导教师李丰教授申请学位理学博士培养单位基础医学院一级学科生物学二级学科细胞生物学研究方向细胞生物论文起止时间2013年3月—2018年3月论文完成时间2018年3月中国医科大学（辽宁）2018年3月I中国医科大学博士学位论文中国医科大学学位论文独创性声明本人郑重声明：本论文是我个人在导师指导下独立进行的研究工作及取得的研究成

3、果，论文中除加以标注的内容外，不包含其他人或机构已经发表或撰写过的研究成果，也不包含本人为获得其他学位而使用过的成果。对本研究提供贡献的其他个人和集体均已在文中进行了明确的说明并表示谢意。本人完全意识到本声明的法律结果由本人承担。论文作者签名：日期：年月日中国医科大学学位论文版权使用授权书本学位论文作者完全了解学校有关保留、使用学位论文的规定，同意学校保留并向国家有关部门或机构送交学位论文的原件、复印件和电子版，允许学位论文被查阅和借阅。本人授权中国医科大学可以将本学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索，可以采用影印、缩印或扫描等复制手段保存和汇编学位论文。保密（），在

4、年后解密适用本授权书。（保密：请在括号内划“√”）论文作者签名：指导教师签名：日期：年月日日期：年月日II中国医科大学博士学位论文摘要目的：肠癌的死亡率较高，在全球范围内，肠癌是肿瘤致死的三个主要原因之一。尽管在治疗肠癌方面已经取得了一定进展，发现了一些治疗肠癌的抗体类/小分子类的药物，然而临床标准治疗仍然依靠手术切除及术后放化疗。不仅如此，肠癌病人经常在综合治疗数年后，原发部位的肿瘤发生复发，并且并发转移瘤。由于手术切除并放化疗治疗后的肠癌细胞经常处于休眠状态，临床检测不到，因而，病人经常表现为无症状，以至于常常被忽视。这种休眠的肠癌细胞被认为是肠癌干细胞。肠癌干细胞即是指那

5、些对放化疗抵抗，主要导致肠癌复发的一群肠癌细胞。人BM-MSCs细胞，即人骨髓间充质干细胞，是肿瘤干细胞微环境的主要细胞成分之一，因其本身即具有干细胞的特点，又是肿瘤微环境中的细胞成分，使得其在肿瘤细胞侵袭，转移，增殖等方面的研究备受关注。BM-MSCs细胞与肿瘤细胞的相互作用可以通过很多方式。可以在肿瘤微环境中，通过分泌各种细胞因子影响肿瘤微环境，也能够通过直接的与邻近的肿瘤细胞接触影响肿瘤细胞，因此，影响肿瘤细胞的发生发展。不仅如此，已经有研究显示MSC细胞能够利用专署的运输系统——exosomes。Exosomes或称为外泌体，是一种直径约50-100nm的分泌囊泡，其来

6、源于细胞内的囊泡系统，能够被一些类型的细胞释放到细胞外的环境中。最新报道显示，exosomes也含有mRNA和microRNA，它们也能够被运输到靶细胞，在靶细胞它们能够被翻译或者介导RNA的沉默。因而exosomes的囊泡可能是作为潜在的细胞间运输工具发挥着传递细胞间的信息传递及基因运输的功能，也在肿瘤侵袭转移过程中发挥了重要的作用。本研究旨在探讨人肠癌微环境中细胞成分之一的BM-MSCs是如何调控肠癌CSCs及影响肠癌细胞侵袭和转移的进程。研究方法：1、人骨髓来源的间充质干细胞对肠癌细胞的影响：(1)流式细胞术活细胞分选人骨髓间充质干细胞；(2)免疫荧光检测人骨髓间充质干细

7、胞的E-cadherin，N-cadherin，Vimentin，alpha-SMA的表达情况；(3)人骨髓来源的间充质干细胞与肠癌细胞系HCT-116、HT-29、SW-480分别共培养，观察在体外的两种细胞相互作用，观察肠癌细胞形态变化；(4)流式细胞术检测共培养后CD133-APC和Lgr5-PE在此三种细胞内的表达情况；(5)流式细胞术检测PI染色，观察三种细胞共培养后细胞周期的变化。2、人骨髓来源的间充质干细胞的条件培养基对肠癌III中国医科大学博士学位论文细胞的影响：(1)培养人