甜菜组培论文

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1、甜菜叶柄高效直接再生体系的建立殷东林，祝建波，张彦伟，向本春审（石河子大学农业生物技术重点实验室，新踹石河子832003）摘要：本实验从4中不同基因型甜菜中，通过预试验，选取KWS-9103作为实验材料，建立其叶柄高效直接再生体系。实验通过种植无菌苗、预培养、诱导分化培养，获得了再生植株，建立了甜菜快速繁殖体系。结果表明：甜菜种子经过消毒处理后培养，取幼苗在MS附加6-BA0.5mg/I,和NAAO.05mg/L的培养基中预培养，再取叶柄作为外植体转入诱导培养基MS附加6-BAO.5mg/L和NAAO.05mg/L中诱导不定芽，不定芽诱导率为50%以上。在MS附加

2、IBA2.0mg/L生根培养基中生根，诱导生根率在90%以上，移栽成活率高达95%.关键词：甜菜；叶柄；植株再生甜菜是2年生异交草木植物，由于其栽培驯化时间较短，遗传背景狭窄，资源贫乏。特別是口交高度不亲和性，往往使得优良单株基因型很容易丢失，给优良品种选育材料的繁殖和保存带来了不少的困难山。因此可以通过植物组织培养为甜菜基因工程育种提供新的途径。冃前关于甜菜组织培养的众多研究表明，器官发生植株再生途径与体细胞胚发生植株途径相比更加方便、有效。宜接分化形成器官再生系统具有如卜-特点：获得再生植株的周期短，操作简单；由于未经脱分化的细胞直接分化芽，因此体细胞无性系变

3、界小，能较好地保持受体植物的遗传稳定性⑵。因此采取直接器官发生再生植株方式（不经历愈伤组织阶段）获得的再生苗更适合作为转化外源基因的受体植物。基于此我们试验了4个甜菜品种进行离体培养，建立了以叶柄为外植体高效直接诱导不定芽，再诱导芽生根进而长成完整植株的快繁体系，为甜菜遗传转化奠定了实验基础。1材料和方法1.1材料STD0725STD2071KWS-9103p-2181.2试验方法1.2.1种子消毒与接种种子剥去外壳后选取饱满的种子，用自来水浸泡一个小时。在超净工作台屮转移到灭过菌的三角瓶中，分别采用两种方法进行消毒：（1）先用70%乙醇处理课题来源：石河子大学科

4、学研究发展计划“动植物育种专项”（项忖编号:gxjs2OO7-yzl3）作渚*简介：殷东林（1983・），男河南潢川人，硕士，主要从事分子生物学的研5uoE-mail:ydl669@126.com;Tel:13779702968'通讯作者:向本春（1958-），男,四川宣汉人,教授，博士生导师oE-mail:xbc@shzu.edu.cn;Tel:0993-205800930-60s,然后用0.1%的升汞处理8-10min,再用无菌水漂洗5・6次;(2)先用10%的H2O2处理3min,然后用0.1%的升汞处理8-10min,再用无菌水漂洗5・6次。将消过毒的种子

5、接种于含琼脂0.7%蔗糖3%的1/2MS(PH二5.8)基本培养基上,在24°C±2°C下暗培养，使种子萌发。1.2.2预培养取发芽10天左右的小苗剪掉根部，分别转移至三种预培养培养基屮进行预培养：(1)MS+6-BA0.5mg/L+NAA0.025mg/L；(2)MS+6-BA0.5mg/L+NAA0.05mg/L；(3)MS+6-BA0.5mg/L+NAA0」mg/Lo培养条件：24°C±2°C,20001x,16h/do1.2.3不定芽诱导分别选取在预培养基中生长3040；50-60；80・90天的幼苗，取其叶柄lcm(从基部包括叶片连接处即3mm叶子和7m

6、m叶柄)作为外植体，分别接种到上述三种培养基屮进行不定芽诱导。培养条件：24°C±2°C,20001x,16h/do1.2.4诱导生根待不定芽长成4〜5片叶子的幼苗时，切下转入MS生根培养基中(附加2.0mg/LTBA)诱导生根，发育成完整植株。1.2.5植株移栽一个月左右，将长有2cm以上的粗壮根系的试管苗炼苗3犬后，取出植株，用口來水洗去根部琼脂块，种植于花土和蛭石(3:1)的花盆中，在15°C的阴凉环境中保湿10天即可成活。2结果与分析2.1基因型筛选通过种子的种植以及苗的预培养和叶柄的诱导分化，发现只有KWS-9103这一品种种子消毒后污染率低，发芽率高，

7、苗在预培养基中茁壮生长，且不定芽诱导率最高，故选其为最佳试验材料。在试验中发现先用10%的H2O2处理3min,然后用0.1%的升汞处理8min,再用无菌水漂洗5・6次，这一处理消毒效果最好,发芽率在60%以上(见图1)。如果用70%酒精处理不易掌握时间，消毒时间过短，污染严重；消毒时间过长则会抑制种子发芽。用0.1%的升汞消毒时间不宜过长，否则发芽率会降低。1.2预培养对幼苗生长的影响在不同培养基及不同激素组合的预培养基上幼苗生长表现不同，通过试验证明只有在MS+6-BA0.5mg/L+NAAO.05mg/L的预培养基中幼苗长势最好(见表1；见图2)。表1预培养

8、时激素组合