弧菌融合蛋白TDH-VVC-VMHA双抗体夹心ELISA检测方法的建立.pdf

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1、中国雉学通报2011，27(32)：34—37ChineseAgriculturalScienceBulletin弧茵融合蛋白TDH—VVC—VMHA双抗体夹心ELISA检测方法的建立刘秀萍，王铁良，唐峰(辽宁医学院畜牧兽医学院，辽宁锦州121001)摘要：为提高食品中副溶血弧菌、创伤弧茵和拟态弧菌毒素初筛的速度与效率，建立了双抗体夹心ELISA检测方法。以融合蛋白TDH．VVCVMHA包涵体为抗原免疫豚鼠，采用豚鼠抗融合蛋白免疫血清为包被抗体，辣根过氧化物酶(HRP)标记羊抗豚鼠IgG为标记抗体，应用棋盘滴定法确定ELISA的最适条件。结果表明，所建立的

2、方法与副溶血弧茵、创传弧菌、拟态弧菌的培养物上清有较明显的阳性反应，与绿脓杆菌、金黄色葡菌球菌、李氏杆菌、甲型副伤妻沙门氏菌、猪霍乱沙门氏茵等5种非孤菌属食物中毒菌培养物上清未见交叉反应，与溶藻弧茵、河流弧蔫和麦氏弧茵等3种弧茵培养物上清也未见交叉反应。这说明，该方法可以用于食品中副溶血弧茵、创伤弧茵和拟态弧茵毒素的快速同步免疫学检测。关键词：弧茵；融合蛋白；双抗体夹心ELISA中图分类号：$851．4+3文献标志码：A论文编号：2011．1691DevelopmentofDoubleAntibodySandwichELISAforVibrioTDH—VV

3、C—VMHAFusionProteinLiuXiuping，WangTieliang，TangFeng(InstituteofAnimalHusbandryandVeterinaryMedicine，LiaoningMedicalUniversity，JinzhouLiaoning121001)Abstract：Inordertoimprovethedetectionspeedandemeiency．adoubleantibodysandwichELISAW；tSdevelopedtodetectVibrioparahaemolyticus，Vibriov

4、ulnificusorVibriominicusinfoodsimultaneously．Tilecytorrhyctesofthefusionproteinwerepurifiedbytheelectroelutingtoimmunizecaviaeobaya，anti-serumwereuesedascaptureantibody，goatanti-guineapigIgG／HRPwereuesedaslabelled—antib0dy，optimizingconditionwasdeterminedbyuseofthechessboardtitrat

5、ionmethod．Theresultsshowedthat，thedoubleantibodysandwichELISAhavingobviouspositivereactionwiththecuhuresupematantofv洒doparahaemolyticus,Vibriovulnificus,Vibriomimicus,butnopositivereactionwith8otherculturesupernatantofcontraststrainsincludingPseudomonasaeruginosa,Staphylococcusaur

6、eus,Listeria,etc．ItindicatedthatthismethodcouldbeusedtodetectVibdoparahaemolyticus,Vibriovulnificusandmimicustoxininfoodsimultaneously．Keywords：Vibrio；fusionprotein；doubleantibodysandwichELISA0引言接溶血毒素(TDH)、相对耐热直接溶血毒素(TFLH)、不副溶血弧菌(砌脚aems)引起的食物耐热溶血毒素(TLH)。其中TDH与致病性的：关系最中毒，其危害仅次于沙门氏菌

7、、大肠杆菌、葡萄球菌和为密切。创伤弧菌(Vibfovulnificus)不仅能引起食肉毒梭菌[1。副溶血弧菌的溶血素可以分为耐热型直物中毒，还能引起原发性败血症和软组织感染。约基金项目：辽宁省教育厅科研项目“三种食源中毒性弧菌融合毒素的基因表达及ELISA检测方法的建立”(L2010262)。第一作者简介：刘秀萍，女，1963年出生，辽宁人，副教授，学士，研究方向为动物性食品检疫检验的教学与研究。通信地址：121001辽宁省锦州市古塔区人民街五段48号辽宁医学院畜牧兽医学院，E-mail：lzz2625998@163．tom。收稿日期：2011．06．09

8、，修回日期：2011．08-26。刘秀萍等：弧菌融合蛋白TDH．V