对虾白斑综合症病毒双抗体夹心ELISA方法的建立.pdf

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1、中国动物检疫2012年第29卷第4期—4l一对虾白斑综合症病毒双抗体夹心ELISA方法的建立郑晓聪，刘荭，张朋，何俊强，史秀杰，贾鹏，兰文升(1．深圳出入境检验检疫局动植物检验检疫技术中心，广东深圳518045；2．华中农业大学水产学院，湖北武汉430070)摘要：用将纯化的对虾白斑综合症病毒VP28蛋白免疫BALB／c小鼠，分离免疫鼠脾细胞，与SP2／0~I胞融合，经间接ELISA,)~选，得到了2~g(2G9，3E5)可以稳定分泌抗对虾白斑综合症病毒特异性单抗的杂交瘤细胞株。用纯化的VP28蛋白免疫家兔，按常规方法制备多抗。选用单抗(3E5)包被ELISA板

2、，用兔多抗作为捕获抗体，建立了对虾白斑综合症病毒的双抗体夹一,~ELISA检测方法。该方法具有良好的特异性和敏感性，为对虾白斑综合症病毒的检测提供了有效工具。关键词：对虾白斑综合症病毒；VP28蛋白；单克隆抗体；ELISA中图分类号：$945．46文献标识码：A文章编号：1005—944X(2012)04—0041—03DevelopmentofDoubleAntibodySandwichELISAforDetectionofWhiteSpotSyndromeVirusZhengXiaocong，LiuHong，ZhangPeng，HeJunqiang，ShiX

3、iujie1,JiaPeng，LanWensheng(1．TechnicCentreofAnimalandPlantInspectionandQuarantine，ShenzhenEntry&ExitInspectionandQuarantineBureau，Shenzhen518045，China；2．CollegeofFisheries，HuazhongAgriculturalUniversity，Wuhan430070，China)Abstract：SPFBALB／cmicewereimmunizedwithpurifiedVP28proteinofwhi

4、tespotsyndromevirus(WSSV)emulsifiedwithFreund’Sadiuvant．ThespleeneellisolatedfromvaccinatedmicewerefusedwithSP2／0cells．Twohybridomaof2G9and3E5，screenedusingELISA，couldsecretestablyspecificantibodiestoVP28proteinofWSSVAdoubleantibodysandwichELISA(DAS-ELISA)fordetectionofWSSVwasestabli

5、shedbasedonmonoclonalantibody(3E5)andrabbit．anti—VP28polyclonalantibody．TheresultshowedthattheDAS-ELISAhadgoodspecificityandsensitivity，indicatingthatthemethodwassuitableforrapiddetectionandepidemiologicalinvestigationofWSSVinfectioninshrimps．Keywords：whitespotsyndromevirus；VP28prote

6、in；monoclonalantibody：doubleantibodysandwich；ELISA对虾白斑综合症(WhiteSpotSyndrome，WSS)是蛋白VP28由本实验表达纯化。BALB／cd~鼠和家由对虾白斑综合症病毒(WhiteSpotSyndromeVirus，兔购于广东省医学实验动物中心。SP2／0细胞系由本实WSSV)引起的一种对虾暴发性传染病。该病毒以其宿验室保存。主范围广、毒力强、致死亡率高、传播速度快等特点，给对虾白斑综合症病毒(WSSV)，传染性肌肉坏全世界的对虾养殖业造成了巨大的损失。由于缺乏敏死病毒(Infectiousmyo

7、necrosisvirus，IMNV)、桃拉感的对虾细胞系，关于该病毒的侵入机制以及在虾体综合症病毒(Taurasyndromevirus，TSV)、传染性皮内的复制、装配机理等方面的研究进展缓慢，然而在结下和造血器官坏死病毒(Infectioushypodermaland构蛋白的解析方面进展迅速，用蛋白质组学和相关技haematopoieticnecrosisvirus，IHHNV)、鲤春血症病术鉴定了至少58种结构蛋白，至少7种囊膜蛋白与病毒毒(Springviraemiaofcarpvirus，svcv)、病毒性出血的侵染过程相关【l之】。VP28是WSS

8、V最主要囊膜蛋白之性败学