双抗体夹心ELISA法测定猪α-干扰素的浓度.pdf

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1、浙江农业学报ActaAgriculturaeZhefiangensis，2015，27(5)：740—745http：／／www．~nyxb．en蒋佳颖，王一成，杨孝朴，等．双抗体夹心ELISA法测定猪仅．干扰素的浓度[J]．浙江农业学报，2015，27(5)：740—745．DOI：10．3969／j．issn．1004—1524．2015．05．06双抗体夹心ELISA法测定猪lt-干扰素的浓度蒋佳颖，王一成，，杨孝朴，袁秀芳，李军星，徐丽华(甘肃农业大学动物医学院，甘肃兰州730070；浙江省农业科学院畜牧兽

2、医研究所，浙江杭州310021)摘要：为了能够准确测定猪血清中猪一干扰素(PoIFN—)含量及猪一干扰素制品的浓度，本研究以制备并经过亲和层析提纯的兔抗猪一干扰素IgG多克隆抗体为包被抗体，以制备的鼠抗猪．干扰素单克隆纯化抗体作为二抗，建立了测定猪o【一干扰素浓度的双抗体夹心ELISA法(DAS—ELISA)。通过条件优化，最佳兔抗猪一干扰素IgG多克隆纯化抗体包被浓度为12．5Ixg·mL。。，最佳鼠抗猪0【一干扰素单克隆纯化抗体作用浓度为6．25txg·mL～，利用本实验室制备的已知浓度猪0【一干扰素标准蛋白建

3、立标准曲线，确定该方法检测猪仅。干扰素浓度范围为0．0781—2．50txg·mL‘。。与Lowry法、冻干称量法测定猪0【一干扰素浓度相比较，3种方法检测结果无显著差异，但所建立的双抗体夹心ELISA法能够检测血清中猪0【．干扰素浓度，且方法简便。关键词：猪Ot一干扰素；双抗体夹心ELISA；定量检测中图分类号：S852．4；Q816文献标志码：A文章编号：1004—1524(2015)05-0740-06DevelopmentofdoubleantibodysandwichELISAfordetermining

4、theconcentrationofpor—cinea-interferon(PoIFN-)JIANGJia—ying，WANGYi—cheng'，YANGXiao—pu’，YUANXiu—fang，LIJun．xing，XULi—hua(AnimalVeterinaryCollege，GansuAgriculturalUniversity，Lanzhou730070，China；eAnimalHta~bandryandVeterinaryInstitute，Zh~jiangAcademyofAgricultura

5、lSciences，Hangzhou310021，China)Abstract：Inordertoaccuratelymeasuretheconcentrationofporcine0【一interferon(PoIFN一仅)inswinesei31mandPoIFN一仪product．DoubleantibodysandwichELISA(DAS-ELISA)methodwasdevelopedbyusingpurifiedrabbitantiPolFN一0【IgGascaptureantibody．andpur

6、ifiedmouseantiPoIFN一ⅡIgGasdetectionantibody．TheresultindicatedthatthebestpackageconcentrationofrabbitantiporcinePoIFN一0【IgGwas12．5恤g·mL～，andmouseantiPoIFN—dIgGwas6．25txg·mL～．ThedetectionrangeoftheDAS-ELISAwasbetween0．078l一2．50vg·mLbystandardCHIVeestablishedusi

7、ngtheknownconcentrationofstandardproteinofPoIFN一0【．Comparedwiththelowrymethodandfreeze—dryingweighingmethod，therewasnosignificantdifferencebetweenthethreemethods．AndthisestablishedDAS—ELISAmethodwassimpleandcoulddetectconcentrationofPoIFN·0【inselql／n．Keywords：

8、porcineOt—interferon；doubleantibodysandwichELISA；quantitativedetermination干扰素(Interferon)是一类具有广谱抗病毒组的调节和控制，而且与细胞RNA及蛋白质的活性的蛋白质，其活性的发挥主要受到细胞基因合成有关，是一种具有抗病毒、调节机体免疫功收稿日期：2014．10-2l基金项