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学校代码：８７８０１篇学号：２０１４０３３硕士学位论文希美宁对２型糖尿病模型大鼠氧化应激反应的影响ＥＦＦＥＣＴＳＯＦＸＩＭＥＩＮＩＮＧＯＮＯＸＩＤＡＴＩＶＥＳＴＲＥＳＳＩＮＴＹＰＥ２ＤＩＡＢＥＴＩＣＲＡＴＳ专业：中西医结合临床研究生：张晓燕导师：李显筑教授二〇一七年五月 黑龙江省中医药科学院硕士学位论文目录英语缩略语表....................................................................................................................I中文摘要...........................................................................................................................IIABSTRACT.........................................................................................................................III前言.................................................................................................................................1文献综述...........................................................................................................................31祖国医学对糖尿病和高血脂症的认识................................................................31.1祖国医学对糖尿病的认识.........................................................................31.2祖国医学对高脂血症的认识.....................................................................422型糖尿病伴高脂血症的发病因素....................................................................42.1遗传基因的影响.........................................................................................52.2生活环境的影响.........................................................................................632型糖尿病和氧化应激反应的关系....................................................................63.1氧化应激对胰岛β细胞功能的影响.........................................................73.2氧化应激与胰岛素抵抗之间的关系.........................................................84糖尿病的中医药防治进展....................................................................................9材料与方法.....................................................................................................................101材料......................................................................................................................101.1实验药物...................................................................................................101.2实验动物与饲料.......................................................................................101.3主要试剂...................................................................................................101.4相关溶液及配置.......................................................................................101.5仪器...........................................................................................................112方法......................................................................................................................112.12型糖尿病动物模型的制备................................................................112.2给药方法...................................................................................................122.3FBG水平检测方法...................................................................................122.4TC、TG水平检测方法.............................................................................122.5标本采集以及胰腺SOD、MDA检测方法............................................123观察方法与指标检测..........................................................................................12 黑龙江省中医药科学院硕士学位论文3.1大鼠一般状态...........................................................................................123.2大鼠血液相关指标的检测......................................................................123.3大鼠胰腺组织相关指标的检测...............................................................124统计学处理..........................................................................................................13结果...............................................................................................................................141一般状况观察......................................................................................................142各组大鼠FBG、TG、TC水平的比较.................................................................153各组大鼠胰腺组织中MDA含量、SOD活性的比较.......................................17讨论.................................................................................................................................201关于大鼠模型复制的选择方法..........................................................................202对于希美宁治疗糖尿病伴脂代谢紊乱的认识..................................................202.1希美宁的立法依据及组方分析...............................................................212.2希美宁方单味药现代药理学研究...........................................................233关于希美宁对MDA水平、SOD活性的影响...................................................274问题和展望..........................................................................................................27结论...............................................................................................................................28参考文献.........................................................................................................................29致谢...............................................................................................................................35攻读硕士期间发表论文.................................................................................................36原创性声明.....................................................................................................................37 黑龙江省中医药科学院硕士学位论文英语缩略语表英语缩写英文全称中文译名AC-CORDTheActiontoControlCardiovascularRisk划时代控制糖尿病心inDiabetes血管风险行动ELISAEnzyme-linkedimmunosorbentassay酶联免疫吸附FBGFastingbloodglucose空腹血糖GLUTGlucosetransporter葡萄糖转运蛋白HLPHyperlipidemia高脂血症HLAHumanLeukocyteAntigen人类白细胞抗原HPLCHighperformanceliquidchromatography高效液相色谱IRInsulinresistanee胰岛素抵抗IRSInsulinreceptorsubstance胰岛素受体底物MDAMalondialdehyde丙二醛NF-κBNucleartranscriptionfactor-κB核转录因子PI3KPhosphatidylinositol3-kinase磷脂酰肌醇3-激酶PKBProteinkinaseB蛋白激酶BROSReactiveoxygenspecies活性氧RNSReactivenitrogenspecies活性氮SODSuperoxidedismutase超氧化物歧化酶STZStrePtozotozin链尿佐菌素T2DMType2Diabeticmellitus2型糖尿病TGTriglycerides甘油三酯TCTotalcholesterol总胆固醇I 黑龙江省中医药科学院硕士学位论文中文摘要目的：通过观察中药复方希美宁对2型糖尿病合并高脂血症模型大鼠的MDA水平和SOD活性的影响，初步探讨希美宁改善糖脂代谢紊乱的作用机制，为其对2型糖尿病合并高脂血症的诊治提供实验依据。方法：选取60只纯系SD雄性大鼠观察喂养一周，随机抽取10只为空白组，剩余50只为模型组。将模型组大鼠采用高脂高糖连续灌胃4周后，注射小剂量链脲佐菌素一天的方法造模。将造模成功的糖尿病模型大鼠分为糖尿病模型组、血脂康阳性对照组、希美宁治疗组三组。四组大鼠均给予相应的药物或蒸馏水干预治疗30天。实验期间排除死亡或者造模不成功的大鼠，最后剩下空白组、模型组各10只，对照组、治疗组各11只。采集标本检测大鼠FBG、血清中TG、TC及胰腺匀浆中MDA的水平，SOD的活性。结果：1、模型组较空白组相比饮水量和尿量明显增多；希美宁治疗组和血脂康对照组较模型组的饮水量与尿量出现不同程度的减少。2、采用高糖高脂饮食联合STZ造模法后，模型建立成功的大鼠空腹FBG、TC、TG明显高于空白组，与空白组相比有极显著差异（P<0.01），有统计学意义，确定模型建立成功。3、希美宁治疗组和血脂康组较模型组的FBG、TC、TG均有所降低，有统计学意义（P<0.05）；4、与模型组比较，希美宁治疗组及血脂康对照组胰腺组织中MDA水平降低（P<0.05），有统计学意义；希美宁治疗组及血脂康组胰腺组织中SOD的活性均有不同程度的升高（P<0.05）；5、希美宁治疗组比较血脂康对照组胰腺组织中MDA含量无显著差异，但SOD的活性明显升高，有统计学意义（P<0.05）。结论:1、希美宁有改善2型糖尿病合并高脂血症模型大鼠血脂代谢紊乱的作用。2、希美宁有降低血液中MDA含量，增强SOD活性的作用，从而促进氧自由基清除，减轻胰腺组织损伤。3、希美宁可以降低大鼠血清中FBG的含量，这可能是通过调节2型糖尿病大鼠脂代谢紊乱微环境，降低大鼠的氧化应激水平，使得胰岛素信号传导障碍降低，从而实现改善胰岛素抵抗的作用，达到降低血糖的目的。关键词:希美宁；2型糖尿病；高脂血症；氧化应激II 黑龙江省中医药科学院硕士学位论文ABSTRACTObjective:ToobservetheeffectofXiMeiningonthelevelofMDAandtheactivityofSODintype2diabeticpatientswithhyperlipidemia，andtoexplorethemechanismofXiMeiningtoimprovethedisorderofglucoseandlipidmetabolism，andtoinvestigatetheeffectofXiMeiningonhyperlipidemiaDiagnosisandtreatmentofexperimentalbasis．Methods:SixtypuremaleSDratswererandomlydividedintoblankgroupand50ratsinthemodelgroup．Ratsinthemodelgroupweretreatedwithhigh-fatandhigh-glucosefor4weeksandinjectedwithlow-dosestreptozotocin(STZ)foroneday．Thediabeticmodelratsweredividedintothreegroups：diabeticgroup，XuezhikangpositivecontrolgroupandXiMeiningtreatmentgroup．Fourgroupsofratsweregiventhecorrespondingdrugordistilledwaterfor30days．Duringtheexperiment，ratswereexcludedfromdeathorunsuccessful，andfinallyblankgroup，10ratsinthemodelgroup，11inthecontrolgroupandthetreatmentgroup．Thelevelsoffastingbloodglucose(FBG)，serumtriglycerides(TG)，totalcholesterol(TC)andSODactivityandMDAinpancreashomogenateweremeasured．Results:1，Comparedwiththeblankgroup，thedrinkingwatervolumeandtheurinevolumeofthemodelgroupweresignificantlyhigherthanthoseinthecontrolgroup．Comparedwiththemodelgroup，thedrinkingwatervolumeandtheurinevolumeofXiimeiNingtreatmentgroupandXuezhikanggroupweredifferent．2，TheFBG，TCandTGofthefastingratsweresignificantlyhigherthanthoseoftheblankgroup(P<0.01)，andtherewassignificantdifferencebetweenthetwogroups，Todeterminethesuccessofthemodel．3，ThelevelsofFBG，TCandTGinXiemingninggroupandXuezhikanggroupweresignificantlylowerthanthoseinmodelgroup(P<0.05)．4，Comparedwiththemodelgroup，thelevelsofMDAinpancreatictissuedecreasedintheXiemeiNingtreatmentgroupandXuezhikanggroup(P<0.05)，andtheactivityofSODinthetissueofXiimeiNingtreatmentgroupandXuezhikanggroupwasdifferent(P<0.05)；5，TherewasnosignificantdifferenceinthecontentofMDAinthepancreastissueofXiayingkanggroup，buttheactivityofSODwassignificantlyincreased(P<0.05)．Conclusion:1，XiMeininghasimprovedthetype2diabetesmellitushyperlipidemiamodelofbloodlipidmetabolismdisorders．2，XiMeininghaslowerbloodMDAcontent，enhancetheroleofSODactivity，therebypromotingoxygenfreeradicalscavenging，III 黑龙江省中医药科学院硕士学位论文reducepancreatictissuedamage．3，XiMeiningcanreducethecontentofFBGinratserum，whichmaybethroughtheregulationoftype2diabetesmellituslipidmetabolismdisordermicroenvironment，reducethelevelofoxidativestressinrats，makinginsulinsignalingbarrierstoreduce，inordertoachieveimprovedinsulinTheroleofresistancetoachievethepurposeofloweringbloodsugar．Keywords：Type2diabetesmellitus；XiMeining；hyperlipidemia；oxidativestressresponse．IV 黑龙江省中医药科学院硕士学位论文前言2型糖尿病（type2diabetesmellitus，T2DM）是一种以持续性高血糖为临床特征的内分泌代谢性疾病。由于我国国民生活水平的提高，饮食渐渐偏于肥甘厚腻，在生活压力的催化下，我国糖尿病患者人群数量增长的速度日益加快。早在2005年，亚洲糖尿病治疗现状中就指出中国在2型糖尿病方面的形势十分严峻，2013年中华医学会糖尿病分会在中国2型糖尿病防治指南上指出，2010年我国成年的糖尿病病人有1.139亿，并有4.934亿的糖尿病前期人群存在。由此可见，我国的糖尿病发病情况并不乐观。而脂代谢紊乱通常贯穿于整个糖尿病过程中，两者之间有着密不可分的关系。大量临床试验证实，高脂血症通常会加快血管的粥样硬化速度，从而加快糖尿病并发症的进程。而且高脂血症由于“脂毒性”可导致胰岛素抵抗，进一步损伤胰岛细胞。在正常情况下，人体自由基的生成和消除维持在稳定状态，但在高血糖、高血脂等病理情况下，机体自身的清除能力无法赶上体内自由基的加速增长，从而氧化应激反应增加，推进2型糖尿病的进程。而测定SOD的活性和MDA的水平可以反映出大鼠的抗氧化水平。有研究表明减少氧化应激反应、提高组织的抗氧化能力可以保护机体组织免受损伤，从而保护组织功能。糖尿病伴高脂血症现在的临床诊治多数是通过降糖、调脂治疗，在2015年美国临床内分泌医师学会（AACE）新指南中，针对糖尿病前期管理的指导提出，如果患者通过减重以及参加一定时间的体力活动等方式干预3-6个月后，血糖仍不达标且发展为糖尿病的中高风险人群，建议药物治疗，但主要集中在西药治疗方面[5]。这些药物虽然疗效显著，但是长期服用调脂和降糖药物存在复合型不良反应，诸如停药反跳、胃肠道不适、低血糖、肝肾损害、过敏和乳酸中毒等副作用。而我们通过对古今文献的研究发现，中医药治疗糖尿病伴高脂血症疗效较好，能改善糖脂代谢紊乱及胰岛素抵抗，且副作用少，并可以预防、延缓并发症的出现有良好的应用前景。但却因其缺乏治疗作用机理的佐证，使其临床应用和国际推广受到阻力，故通过现代科学技术深入研究并明确中医药防治糖尿病的作用机制，在现实生活中具有重要意义。本课题以给予希美宁干预的2型糖尿病模型大鼠为研究对象，观察此方对糖尿病大鼠糖脂代谢紊乱和氧化应激反应的影响。希美宁是导师李显筑教授根据多年来治疗糖尿病伴高脂血症的临床经验而总结出的经验方，此中药复方以扶助正1 黑龙江省中医药科学院硕士学位论文气，祛除“浊毒”为主要治疗原则，在临床取得了较好的疗效。现已有动物实验研究表明，希美宁方有明显降低大鼠的血糖、血脂、血流变和血清中TNF-因子的作用[2][3]。为了拓展其作用机制，我们欲通过观察糖尿病合并高脂血症的发生和氧化应激反应之间存在的关系，深入探索希美宁在防治糖尿病脂代谢紊乱的作用原理，为其更好的应用到临床，提供一些理论依据与数据支持。2 黑龙江省中医药科学院硕士学位论文文献综述1祖国医学对糖尿病和高血脂症的认识糖尿病在中医学中相当于“消渴病”的范畴，高脂血症在中医学中属于“痰浊”、“眩晕”、“痰湿”等范畴。消渴病日久，由于阴液亏损、阴阳两虚、阳虚寒凝，皆可化成痰、瘀等浊毒，随血而行，至全身各处，久病及络，导致变证丛生。这两个病的中医病因病机相互联系、相互影响，与西医研究中认为糖尿病与高脂血症具有相关性的观点是一致的。1.1祖国医学对糖尿病的认识糖尿病的主要临床表现为“三多一少”的症状：多饮、多食、多尿、消瘦，故名为消渴。消渴首见于《内经》的《灵枢·五变》：“五脏皆柔弱者，善病消瘅。”又于《素问·通评虚实论》曰“消瘅，脉实大，病久可治……久不可治”，文中“消瘅”的含义为五脏之精气虚衰，转为内热消耗肌肉。《素问·奇病论》中帝问：“有病口甘者，病名为何？何以得之？”岐伯答道：“此五气之溢也，名曰脾瘅。夫五味入口，藏于胃，脾为之行其精气，津液在脾，故令人口甘也……故其气上溢，转为消渴。治之以兰，除陈气也。”文中提到的“脾瘅”为五气上溢，转为消渴，并解释了此病的病因是多食甘美而肥之物，大抵是现代的高脂高糖饮食。糖尿病又有肺消、鬲消、脾瘅、消中、食亦、肾消等称呼，汉朝医圣张仲景在伤寒杂病论中对消渴病的病因病机做出了描述，认为消渴的病机之一是胃肠燥热、热毒内盛、耗伤阴津，并给出汤剂人参白虎汤。而唐代药王孙思邈对于消渴病的认识则可在《千金方》中见到：“内有热气者，则喜渴也，除其热则止，渴兼虚者。须除热，而兼宜补虚，则病愈。”认为消渴病的治疗应当解毒养阴，并且创立黄连丸，至今仍有很重要的临床意义。后至宋朝的《太平圣惠方》中提出的“三消”论，为后世消渴病的三消分型奠定了基础。后金元四大家之一的刘完素在《保命集》里提到“消渴之疾，三焦受病也：有上消、中消、肾消。上消者，上焦受病……治法宜养血以整肃，分其清浊而自愈也。”将上、中、下三消的临床症状作出了详细的阐述。“三消”的提出对消渴病的病位、病因病机及临床表现作出了较为详细的阐明，为临床辨证论治提供了更多的依据，并沿用到现在。现在一般认为，消渴病的病位在脾胃、肺、肾，特别是和肾的关系密切。治疗上有侧重于润肺生精、养护脾胃、温阳补肾的3 黑龙江省中医药科学院硕士学位论文差别，但多以清热解毒，养阴润燥为治疗原则。1.2祖国医学对高脂血症的认识古代中医并无“高脂血症”、“脂代谢紊乱”等病名，但是古代医家在对此病的认知上却有着丰厚的历史底蕴，相关认识可见于《黄帝内经》等古籍中。在《灵枢·五谷津液别》中提到:“五谷之津液，和合而为膏者，内渗于骨空，补益脑髓，而下流于阴股。”可见古代医家早已对人体脂、膏有所认识。张景岳于《类经》解释此段话为:“膏，脂膏也。津液和合而为膏，以填补于骨空之中，则为脑为髓，为精为血。”由上可知膏、脂本是人体所必需物质，并由后天水谷化生成为脑、髓，遍布全身各器官组织，其正常生理主要靠脾的运化功能、肺的宣降、肝的疏泄、肾的封藏作用。在脏腑功能失调的情况下，气血运行不畅，膏脂瘀滞，导致浊毒内生，气壅血浊，形成高脂血症。根据高脂血症的临床特点和它的病因病机，中医学多将其归于“痰浊”、“瘀血”、“痰湿”等范畴。经过归纳总结我国现代的六位名老中医梅国强[5]、符为民[6]、聂惠民[7]、王绵之[8]、王多让[9]、袁海波[10]对于治疗此病的思想，可得出结论：高脂血症为本虚标实之证，标实主要为痰浊、瘀血，本虚主要为肝、脾、肾三脏，属全身性疾患。所以大多数学者认为高脂血症多从肝、脾、肾三脏论治，此病的形成发展关键病机在于肝失疏泄、脾失健运、肾失气化[11]。郭姣曾进行过实验研究，以“疏肝化痰，健脾益肾，理气凉血，祛瘀解毒”的治疗原则组成的方剂，可显著改善实验大鼠的血脂水平[12]，从而在侧面证明此病从肝脾肾论治的大方向是正确的。同时国医大师颜德馨认为，高脂血症的中医病理机制主要为痰瘀胶结，因脾为后天之本，生痰之源，故此病与脾关系密切。脾失健运，脾胃功能失调，不能运化水谷精微，痰浊内生，滞留于血脉，使脉络瘀阻是关键所在；肝失疏泄，气机壅滞，血瘀痰湿阻塞脉络是其根源。同时年老体虚，肾气渐衰，肾阳无法温煦脾土而产生脂毒、痰饮，也是导致血脂异常的原因之一。众多文献表明中医药在治疗高脂血症方面确实有着独到和突出之处，且副作用相对较小，疗效较好。22型糖尿病伴高脂血症的发病因素糖尿病是一种终生性的慢性疾病，对患者的身体和心理造成巨大影响。到疾病后期通常会引起各种并发症，给患者带来极大的痛苦，例如：视网膜病变、周围神经病变、糖尿病肾病、糖尿病足和心脑血管病变等，严重时候甚至可导致患者截肢、肾衰或者失明。因此，对2型糖尿病的研究是非常必要的。高脂血症与2型糖尿病的发生发展有着密不可分的关系，2型糖尿病患者多4 黑龙江省中医药科学院硕士学位论文伴有脂代谢紊乱[13]，并且高脂血症是影响糖尿病并发症的关键因素之一。傅晓英通过160例的临床病历，观察到2型糖尿病患者中有78.7%的人有不同类型的脂代谢紊乱[14]。而且高脂血症由于“脂毒性”可导致胰岛素抵抗，进一步损伤胰岛细胞。2015年美国临床内分泌医师学会新指南指出，代谢综合征是糖尿病前期的等危症，而高脂血症是代谢综合征的重要诊断条件之一。有文章表明，89%的2型糖尿病患者伴有脂代谢紊乱，也资料显统计显示，部分2型糖尿病患者脂代谢紊乱也可早于高血糖发生，脂代谢紊乱主要诱发因素是糖代谢紊乱[14]。脂代谢紊乱通常贯穿于整个糖尿病过程中。2型糖尿病的患者中有百分之六十到七十合并脂代谢异常，而大量临床试验证实，高脂血症通常会加快血管的粥样硬化速度，从而加大各种大小血管并发症的概率。脂代谢紊乱是引起动脉粥样硬化（AS）的重要因素，严重威胁着病人的生命。同时血脂异常会增多胰岛细胞和肌肉、肝脏细胞里的脂质，从而影响这些细胞的正常新陈代谢与功能，加重胰岛素分泌量和胰岛素抵抗。因此对2型糖尿病患者进行血脂干预应得到特别重视。近年来由于诸多原因，例如肉类食物与甜食在餐桌上比例的增加以及快节奏的工作生活造成的压力等，我国糖尿病患者人数迅速上升。2015年中华医学会糖尿病分会上有文章报道，2010年我国成人糖尿病患者（年龄达到18周岁以上）就达到1.139亿，而前期人群约有4.934亿人口。据世界卫生组织统计推算，可能2005到2015年的10年间有高达5577亿美元的经济损失将是由糖尿病和心血管疾病造成的[15]，对国家医疗财政造成了巨大的经济负担。现在我国已经取代印度成为世界上糖尿病发生最严重的国家。因此，预防和治疗2型糖尿病已经成为我国一个非常重要紧急的任务。但现在2型糖尿病的明确发病机制尚未探明，一般认为其发病与环境、遗传相关。2.1遗传基因的影响研究表明，2型糖尿病虽然不符合孟德尔遗传定律和线粒体母系遗传定律，但仍有明显的遗传倾向，它是一种先天基因控制的、后天环境综合影响的遗传疾病。首先，2型糖尿病大约有60%的患者有家族史；其次2型糖尿病患者的直系亲属患病率明显高于普通人，可高达9.6%；到目前为止，相关科研人员已经发现有超过250个基因与糖代谢、脂质代谢、能量代谢以及胰岛素信号传导等糖尿病发病机制有关。例如人类白细胞抗原(HumanLeukocyteAntigen，HLA)，UCP3的基因表达水平[16]，UCP3基因的异常表达[17]，胰岛素受体底物(insulinreceptorsubstance，IRS)的突变等。5 黑龙江省中医药科学院硕士学位论文2.2生活环境的影响已有研究表明，肥胖、高脂高糖饮食及运动量少等后天环境影响均与2型糖尿病的发病有密切联系。2.2.1饮食的影响因为人民生活水平的提高，饮食结构变得不合理，促进了糖尿病的发病。有研究表明，在每天脂肪摄入量比正常饮食增加40g的情况下，糖尿病患病率便会增加3.4倍[18]。高脂高糖饮食可以诱发糖尿病，高糖高脂饮食增多，必然使膳食纤维的摄入相对减少，而膳食纤维有亲水性，可增加饱腹感，使饮食量减少。同时还可以减少和减慢葡萄糖吸收、减少胰岛素抵抗等功效[19]。同时微量元素与糖尿病发病机制也有紧密联系，缺乏微量元素会使身体出现糖代谢紊乱。2.2.2肥胖的影响由高糖高脂饮食引发的中心性肥胖是引发2型糖尿病的一个关键因素之一[20]。美国在分析调查肥胖与糖尿病的发病情况时，曾调查了近20万的成人的糖尿病危险因子，通过数据分析表明，肥胖者（BMI≥40kg/m2）人群的糖尿病发病率更高，相较于BMI正常的人，肥胖者发生糖尿病的优势比(OR)为7.37%(AliHetal，2001)。浙江省某市对当地的一千多位群众进行的问卷调查中，也表明了肥胖与糖尿病发病率之间存在显著联系[21]。并有学者调查了甘肃某3个乡镇居民的BMI与糖尿病之间的关系，发现在BMI>28.0、28.0>BMI>24.0、BMI<24.0的群众中，糖尿病患病概率分别是11.6%、9.7%、5.8%，以上数据说明BMI指数越高，糖尿病的发病率也越高，糖尿病发病率会随着BMI的增高而升高[22]。另外有研究证明，中心性肥胖比四肢肥胖者更容易患糖尿病[23]。2.2.3运动的影响随着社会进步，脑力劳动在人们在工作生活中的占据越来越重要的位置，相对则体力活动变少。而运动可以提高机体的胰岛素敏感性，从而减少糖尿病的发生。国内有研究发现游泳运动可以改善2型糖尿病模型大鼠的糖脂代谢紊乱，并降低炎症反应和氧化应激反应[24]。国外也有研究发现，适当的运动可以减少2型糖尿病的发病率[25]，不运动的人比有适当的运动强度和运动量的人，此病的发病率高出66%[26]。除此之外，运动锻炼的频率与糖尿病的发生率也有很大联系。有研究证明，每周运动2-4次的人，其相对危险度降低0.15[27]。32型糖尿病和氧化应激反应的关系研究表明，氧化应激是指机体内抗氧化能力与活性氧(reactiveoxygenspecies，6 黑龙江省中医药科学院硕士学位论文ROS)、活性氮(reactivenitrogenspecies，RNS)的产生失去动态平衡[28]。氧化应激会导致活性氧和活性氮产生过多，使机体的蛋白和核酸受到损伤[29]。高血糖可使氧化应激增强，主要通过线粒体电子传递链这条途径增加体内ROS和RNS的产生，并且这条途径也是其它产生ROS的途径的基础。高血糖使得在三羧酸循环中线粒体膜电位升高，当线粒体升高的膜电位阈值后，线粒体中的酶复合物会一直产生各种氧自由基，这些氧自由基又会再次激活多元醇通路、葡萄糖自氧化和PKC途径等，恶性循环从而产生更多的自由基。多项研究发现，氧化应激致使胰β细胞功能障碍和外周胰岛素抵抗，以诱导糖尿病的形成，严重者甚至会糖尿病视网膜病变、促进糖尿病肾病、心血管疾病等并发症的形成。3.1氧化应激对胰岛β细胞功能的影响有学者将糖尿病的发病过程分两个阶段（糖尿病早期或超早期，2型糖尿病）。2型糖尿病早期指空腹血糖调节受损（FBG在5.6-6.9mmol/L之间）或者葡萄糖耐量异常（2hOGTT在7.8-11.0mmol/L之间）；若血糖指标尚未达到上述诊断标准，但是糖脂代谢已经出现紊乱，则可被定义为2型糖尿病超早期。糖尿病早期以及超早期都是2型糖尿病的前期代谢异常阶段，其人群具有进一步发展为2型糖尿病的高危性，与代谢综合征有着密切联系。当2型糖尿病早期或超早期转化为2型糖尿病后，则说明机体已经出现胰岛素抵抗或胰岛β细胞损伤引起胰岛分泌不足。胰岛β细胞的主要功能是合成并分泌胰岛素，而胰岛β细胞损伤致使的胰岛素分泌不足是2型糖尿病发病的重要原因之一[31]。多项研究表明，氧化应激可以导致胰岛β细胞功能衰退，甚至引起胰岛β细胞特别是细胞线粒体结构的损伤，从而引起β细胞炎症反应，导致胰岛素合成和分泌减少。ROS损伤胰岛β细胞的途径主要有两条，第一，直接引起β细胞损伤。氧化应激反应可以使机体产生大量的ROS，不仅容易攻击蛋白质、核酸和不饱和脂肪酸等大分子，损伤胰岛β细胞。还可以作为第二信使的信号分子，严重干扰细胞的正常信号传导。研究发现，胰岛β细胞线粒体合成的超氧化物歧化酶可以转化超氧化物，使之变成H2O2，但是胰岛β细胞合成过氧化物解毒酶的能力有限，如果H[32]2O2太多则不能很好的分解。因此胰岛β细胞很容易受到ROS攻击。第二，氧化应激通过核转录因子(nucleartranscriptionfactor-κB，NF-κB)通路引起β细胞损伤[33]。在静息细胞中，NF-κB中有p50、RelA和抑制蛋白IκB结合形成的三聚体形式的复合物，并存在于胞浆中，主要参与细胞对细胞因子、自7 黑龙江省中医药科学院硕士学位论文由基、应激以及瞬时调控基因表达[34]，还有细菌病毒等刺激的应答等。NF-κB会参与细胞凋亡、细胞增殖、免疫、和炎症等多种基因的调节[35]。有动物实验证明，通过一些特异性手段的抑制小鼠NF-κB的表达后，由STZ诱导的小鼠糖尿病发病率明显降低了。由此可知，NF-κB活性的调节是氧化应激致使胰岛β细胞损伤的一条重要途径。同时氧化应激反应会减少胰岛β细胞合成和分泌胰岛素。首先，氧化应激会影响PDX-1（胰岛素启动因子1）的表达。PDX-1是在胰腺中的一类可进行多基因调控的中枢基因，是在胰腺中特异性表达的转录因子，它的主要作用是促进胰岛素基因的转录和胰岛素的成熟分泌，调控胰腺的分化发育、胰岛β细胞等。有研究证明，ROS可减少PDX-1mRNA的合成[36]。有学者研究观察到，氧化应激可显著减少PDX-1在细胞核内的表达，改变PDX-1在细胞内的正常分布[37]。Kajimoto等发现，对糖尿病小鼠(C57BL/KsJ-db/db)进行抗氧化治疗后，明显增多了PDX-1在胰岛细胞核内的表达[38]。综上所述，氧化应激可使PDX-1与胰岛素基因启动子的结合减少，影响PDX-1的核质易位，而PDX-1的核质易位是促进胰岛素分泌的重要方面。所以氧化应激状态下，会减少胰岛素的合成和分泌。3.2氧化应激与胰岛素抵抗之间的关系胰岛素抵抗(insulinresistant，IR)是除胰岛β细胞功能减退之外的2型糖尿病另一重要特征。Mahadev等研究发现，ROS对胰岛素信号的调控作用具有双面性[39]。一方面，微量的生理性ROS可促进组织细胞对胰岛素的敏感性[40]。Mahadev等证实胰岛素的刺激会使机体快速产生少量ROS，而这个反应中的Nox(NADPHoxidase)依赖机制作为第二信使会产生氧化作用，从而抑制PTP1B的活性，达到促进胰岛素级联反应的作用[41]。正好相反的是，用DPI(diphenyleneiodonium)抑制Nox后，胰岛素受体和胰岛素受体底物在胰岛素刺激下的磷酸化下降了48%。但是另一方面，Nishikawa等证实，糖尿病患者因为长期处于高血糖状态，使身体通过线粒体途径产生大量的ROS，氧化应激反应对多个胰岛素信号传导通路，包括IRS、InsR、蛋白激酶B(proteinkinaseB，PKB)、磷脂酰肌醇3-激酶(phosphatidylinositol3-kinase，PI3K)和葡萄糖转运蛋白(glucosetransporter，GLUT)等都会产生负面作用，也就是胰岛素抵抗[42]。氧化应激反应既能直接损伤胰岛β细胞，还能作为信号分子，激活一些应急敏感通路，间接引起β细胞凋亡或坏死，加速糖尿病及其并发症的发生。综上所述，胰岛素抵抗常常是多种因素相互联系和作用的结果，而现在对糖尿病的治疗8 黑龙江省中医药科学院硕士学位论文主要集中在西药方面，但西药的药理作用相对单一，而且有一定副作用，很多患者并不适合。因此探寻并研制疗效确切、安全可靠，且副作用小的治疗药物仍将是今后一段时间研究的热点问题。而研究希美宁对2型糖尿病的氧化应激影响有助于进一步揭示希美宁对2型糖尿病的作用机制，为糖尿病的中医药防治奠定基础，对中医药学治疗此病的发展具有重要意义。4糖尿病的中医药防治进展近年来对单味中药及其有效成分研究很多。现代药理研究发现，单味中药在改善2型糖尿病胰岛素抵抗方面由于它的复合成分，所以具有多靶点、多途径的特点。会同时拥有改善多种代谢紊乱、减少IR、改善并发症等多种作用。这些中药既有滋阴清热药，如天花粉、黄连、黄萃、生地、葛根、玉竹、玄参、枸杞子等，也有补益药，如人参、黄芪、山药、何首乌、冬虫夏草等；还有活血化瘀、清热解毒、化痰祛湿中药，如三七、丹参、益母草、泽湾、苦参、茵陈、鱼腥草、桑叶、金银花等。其次，也有很多中外文献关于中药复方干预糖尿病胰岛素抵抗作用的报道，涉及的处方复杂多样，处方立法有滋阴清热、益气养阴、滋阴温阳、健脾祛湿、温肾化气、疏肝清肝、活血化癖、祛湿化痰等方法，作用机制可能与增加靶细胞上胰岛素受体数目、减少胰岛素拮抗激素水平、促进胰岛素合成分泌、增强胰岛素分子与其受体结合，以及改善受体后信号传递过程有关。近年來对中医药治疗2型糖尿病伴高脂血症的研究已逐年增长。目前已证实有大于60味中药以及多种中药复方可以降低血糖、改善胰岛素抵抗，并在改善机体糖脂代谢紊乱、抑制肠道葡萄糖的吸收等方面有积极作用[47]。9 黑龙江省中医药科学院硕士学位论文材料与方法1材料1.1实验药物希美宁：其中药饮片主要购自于黑龙江中医药大学附属第一医院，饮片构成主要是陈皮、厚朴、枳实、莪术、昆布、山楂、水蛭、地龙、泽泻、生薏苡仁、黄芪、党参等。血脂康：国药准字为Z210950029；剂型：胶囊；生产厂家：北大维信生物科技有限公司。1.2实验动物与饲料健康纯系SD雄性大鼠60只，体重210-230g，由黑龙江中医药大学实验动物中心提供，合格证号为SYXK2016009（黑）。大鼠皮毛光泽，状态良好，进食与活动正常，分笼饲养，室温为22士2℃，相对湿度在50~60%之间，每笼饲养10只，自由摄食和饮水。基础饲料购置于黑龙江中医药大学实验动物中心。脂肪乳配方为：猪油20g，胆固醇5g，吐温20ml，蔗糖5g，果糖5g，谷氨酸钠1g，丙二醇30ml，以上成分加水溶至100ml。1.3主要试剂试剂名称公司名称链脲佐菌素(STZ)美国sigma公司胆固醇北京化学试剂公司丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)南京建成生物科技有限公司测定试剂盒总胆固醇（TC）、甘油三酯（TG）中生北控科技股份有限公司测定试剂盒1.4相关溶液及配置（1）柠檬酸-柠檬酸钠缓冲液(STZ稀释液)：取柠檬酸1.68g溶于100mL超纯水中，配成A液；取柠檬酸钠2.35g溶于100mL超纯水中配成B液。然后分别取57mLA液和43mLB液混合均匀，配成pH=4.4的0.lmol/L的柠檬酸-柠檬酸钠缓冲液(使用前临时配置)。（2）STZ的配制：用pH4.4的柠檬酸-柠檬酸钠缓冲液配制最终浓度为10 黑龙江省中医药科学院硕士学位论文3mmol/L的STZ，置于冰水中，现用现配。（3）希美宁浓缩药液的配制方法：将希美宁中药饮片浸泡半小时，再以16倍蒸馏水回流提取一小时，滤出药汁后，再以14倍量蒸馏水回流提取40分钟，再滤出药汁。剩余药渣再以百分之95乙醇提取20分钟，提取两次。最后将4次回流提取的水醇提取物合并，浓缩至所需药量。冷却后保存在4°C冰箱中备用。（4）血脂康药液的配制方法：将血脂康溶于蒸馏水中，加入百分之0.01羧甲基肝素钠配置成浓度为5.5mg/ml的混悬液，保存在4°C冰箱中备用。1.5仪器仪器名称公司名称BSA224S-CW型电子天平赛多利斯科学仪器公司KEWEI型电热恒温水浴锅北京市六一仪器厂WD-9412A型恒温循环器北京市六一仪器厂Sigma3-18K型台式高速冷冻离心机德国Sigma公司UV-160A型紫外分光光度计日本岛津公司OlympusAu270型全自动生化仪日本岛津公司自动血糖仪上海罗氏诊断产品有限公司2方法2.12型糖尿病动物模型的制备60只健康纯系SD雄性大鼠适应性喂养一周后，随机取10只作为正常对照组（常规饲料+蒸馏水1ml/100g/d灌胃）；50只作为造模组（常规饲料+脂肪乳1ml/100g/d灌胃），脂肪乳配方同前。喂养4周后，对照组和造模组均空腹12h（禁食不禁水），造模组腹腔注射小剂量STZ(链脲佐菌素)30mg/kg(使用前，以PH=4.4的0.lmol/L柠檬酸-柠檬酸钠缓冲液配成1%的浓度)；对照组仅腹腔注射相同体积的柠檬酸钠缓冲液。注射一天。注射STZ一周后，空腹12小时（禁食不禁水）后尾静脉法测血糖，再眶静脉取血测空腹血脂，以FBG大于16.7mmol/L，血清TC、TG含量比空白组明显升高，存在显著差异的大鼠纳入实验。在模型制备过程中，死亡3只，主要考虑为不能耐受STZ或应激反应死亡，有5只大鼠的FBG、TC、TG水平不达标或未造成显著差异，被判定为造模不成功。将造模成功的42只2型糖尿病模型大鼠分为糖尿病模型组、希美宁治疗组和阳性药物（血脂康）对照治疗组各13只。11 黑龙江省中医药科学院硕士学位论文各组按其体重不同给药，并继续喂以普通饲料。2.2给药方法实验分为4组：正常对照组、糖尿病模型组、希美宁治疗组和阳性药物（血脂康）对照治疗组。所有大鼠除同等条件正常饲养外，根据人与大鼠的体表面积换算，因成人（按70kg体重计算）希美宁用量为3.73g/kg.d，血脂康成人用量为0.017g/kg.d。经过换算后得出，大鼠阳性药物对照组灌胃血脂康0.11g/kg.d，希美宁治疗组灌胃希美宁23.49g/kg.d，而正常对照组、糖尿病模型组每日以蒸馏水灌胃，持续灌胃30天。2.3FBG水平检测方法造模结束后次日和取材前尾静脉取血测血糖水平，具体方法为：大鼠尾巴尖端减去3-4mm，待血液渗出后去除第一滴血，第二滴血用血糖仪检测血糖。2.4TC、TG水平检测方法造模后采取眶静脉采血的方法；取材前采取腹主动脉采血的方法。以3000r/min的速度离心10min后分离血清，等待测定。按照总胆固醇和甘油三酯试剂盒说明书使用，并用全自动生化分析仪测定。2.5标本采集以及胰腺SOD、MDA检测方法各组大鼠药物干预30天后，禁食禁水24小时，以电子秤称取每只大鼠体重，进行麻醉。首先腹腔注射10mg/mL的戊巴比妥钠，以45mg/kg的剂量将大鼠麻醉。打开腹腔，腹主动脉取血，用采血针抽取5mL血液至含抗凝剂的负压管中，以3000r/min的速度，离心10min收集上清液，保存至-80°C冰箱备用；摘取大鼠胰腺组织，进行组织匀浆，测定SOD活性、MDA含量。3观察方法与指标检测3.1大鼠一般状态每日观察评估各组大鼠的精神状态、饮水和进食情况、以及尿量等。3.2大鼠血液相关指标的检测（1）血糖：大鼠断尾采血后血糖仪分析。（2）血清TG、TC的测定：按照试剂盒说明书方法操作。3.3大鼠胰腺组织相关指标的检测（1）大鼠胰腺组织样品的采集各组大鼠经腹主动脉取血后，剖腹迅速分离胰腺组织，冲洗、拭干、分离、12 黑龙江省中医药科学院硕士学位论文去脂，分别称重。并在低温环境下制成胰腺组织组织匀浆。（2）胰腺组织指标的检测根据南京建成生物工程研究所提供的测试盒说明书完成胰腺组织匀浆中MDA含量、SOD活性的测定。因在酸性条件下，MDA可与硫代巴比妥酸反应生成一种有色物质，并且此物质在532nm处有最大吸收峰值。根据此原理检测MDA含量，使用分光光度计测量它的吸光度。SOD活性釆用黄嘌呤氧化酶法测定，机理是通过黄嘌呤氧化酶反应系统会产生在显色剂的作用下呈紫红色的超氧阴离子，并使用可见光分光光度测量它的吸光度。并通过公式计算，求出胰腺组织匀浆中的SOD活性。计算公式如下：胰腺组织匀浆中MDA含量(mnol/mgprot)=(测定管吸光度-测定空白管吸光度)/(标准管吸光度-标准空白管吸光度)*标准品浓度(l0mnol/ml)+蛋白含量(mgprot/ml).胰腺组织匀浆中SOD活力(U/mgprot)=(对照管吸光度-管吸光度)/对照管吸光度/50%*反应液总体积/取样量(ml)/组织中蛋白含量(mgprot/ml)4统计学处理用SPSS17.0统计软件分析，首先用描述性统计和分析研究变量分布，确定数据符合正态分布和方差齐后，两组间用t检验比较，进行统计分析，数据以s表示，P<0.05则有统计学意义。13 黑龙江省中医药科学院硕士学位论文结果1一般状况观察实验期间前5周空白组与模型组大鼠精神状况良好、反应灵敏、体重正常增加、饮水和尿量正常、毛色光泽。造模后模型组逐渐出现行动迟钝、精神萎靡、体重增长较快、尿量及饮水量增多、饮食量增加、便溏、身体消瘦、毛发粗糙竖毛等，个别大鼠出现偏瘫、皮肤溃疡、足部溃烂等现象；5周后通过药物干预，阳性对照组和希美宁治疗组上述表现较模型组有不同程度减轻，特别是希美宁治疗组更加显著。最后模型组死亡3只，剩余10只；希美宁治疗组死亡2只，剩余11只；血脂康组(下简称对照组)死亡2只，剩余11只；空白组10只，无死亡。以下是大鼠的一般状态评分表：表1大鼠一般状态评分标准组别0分1分2分精神状态良好轻度萎靡萎靡不振反应灵敏度灵敏一般迟钝中度增加重度增加体重正常增加或减轻或减轻排尿量正常增加明显增加饮水量正常增加明显增加毛发光泽度良好略有粗糙粗糙且竖毛饮食量正常增加明显增加注：大鼠状态正常为0分，轻度异常为1分，明显异常为2分14 黑龙江省中医药科学院硕士学位论文表2前五周大鼠一般状态评分组别空白组模型组时间（周）0w4w5w0w4w5w精神状态000002反应灵敏度000001体重000012排尿量000002饮水量000012毛发光泽度000001饮食量000001总评分0000211表3五周后大鼠一般状态评分组别空白组糖尿病模型组阳性对照组希美宁治疗组时间（周）7w9w7w9w7w9w7w9w精神状态00221111反应灵敏度00121111体重00221111排尿量00222121饮水量00222121毛发光泽度00111111饮食量00122111总评分00111310898根据各个时间段各组大鼠的总体评分情况可以看出，空白组一直状态良好，糖尿病模型组随着时间的延长逐渐恶化，而希美宁治疗组和阳性药物对照组的状态较糖尿病模型组在用药后均有改善，且随着用药时间延长改善更明显，在用药4周后状态显著改善。15 黑龙江省中医药科学院硕士学位论文2各组大鼠FBG、TG、TC水平的比较表4各组大鼠FBG、TG、TC水平比较（s）组别nFBG(mmol/L)TG(mmol/L)TC(mmol/L)空白组104.630.720.450.061.020.10###模型组1020.611.070.920.131.930.23***血脂康对照组1117.211.350.770.131.690.14***希美宁治疗组1115.471.660.670.121.360.13#*注：与空白组比较P<0.01；与模型组比较P<0.05；与对照组比较P<0.05图一：各组大鼠FBG比对图二：各组大鼠TC比对16 黑龙江省中医药科学院硕士学位论文图三：各组大鼠TG比对实验结果表明，各组大鼠血液中FBG、TC、TG的含量如表4、图1、图2、图3所示：糖尿病模型组大鼠血清中FBG、TC、TG含量明显升高，均极显著高于空白组，有极显著差异（P0.01），表明2型糖尿病伴高脂血症模型大鼠造模成功。希美宁治疗组、血脂康对照组大鼠血液中FBG含量较糖尿病模型组显著降低（(P<0.05）。希美宁治疗组血清中FBG含量低于血脂康对照组，说明希美宁治疗组降糖作用优于血脂康对照组，差异显著（P0.05）。与空白组比，模型组TG、TC含量升高，有统计学意义（P0.01）。与模型组比较，血脂康对照组、希美宁治疗组中TC、TG含量降低，差异显著(P<0.05)。与血脂康组比，虽然希美宁组TG差异不显著（P0.05），但希美宁中的TC含量降低，差异显著（P<0.05），上述数据说明希美宁有着良好的降糖、降脂作用。3各组大鼠胰腺组织中MDA含量、SOD活性的比较表5各组大鼠胰腺中MDA含量、SOD活性的比较（s）MDASOD组别ｎ（μmol/mgprotein）（U/mgprotein）空白组100.49士0.1047.55士2.82##模型组102.70士0.2921.04士2.78**血脂康对照组111.41士0.1535.10士2.63**希美宁治疗组111.26士0.1739.82士2.72#*注：与空白组比较P<0.01；与模型组比较P<0.05；与对照组比较P<0.0517 黑龙江省中医药科学院硕士学位论文图四：各组大鼠胰腺MDA比对图五：各组大鼠胰腺SOD比对由表5、图4可知，模型组胰腺组织中SOD的活性比正常组明显降低（P<0.01）。在希美宁治疗组和血脂康对照组中，胰腺组织中超氧化物歧化酶的活性相对于模型组升高幅度明显，差异显著（P<0.05）。希美宁治疗组的SOD活性高于血脂康组（P<0.05），通过上述结果表明，希美宁对于糖尿病大鼠胰腺组织中酶的活性18 黑龙江省中医药科学院硕士学位论文有显著影响，且优于血脂康组。各组大鼠胰腺中MDA含量见表5、图5。糖尿病模型组大鼠胰腺组织中MDA含量均高于空白组，而希美宁治疗组和血脂康对照组大鼠的胰腺组织中MDA含量较模型组显著降低（P<0.05）。但希美宁治疗组的MDA含量与血脂康组相比无显著差异（P0.05），通过上述结果表明，希美宁对于糖尿病大鼠胰腺组织中的MDA含量有显著影响。19 黑龙江省中医药科学院硕士学位论文讨论1关于大鼠模型复制的选择方法目前2型糖尿病模型大鼠的复制方法主要有以下几种：①胰岛细胞破坏或移植；②内分泌；③饮食；④神经性；⑤遗传性与自发性；⑥病毒性。其中，①和③在国内较为常用。胰岛细胞破坏或移植可用切除全胰或结扎胰管手术加高糖饮食，但此法难度较大，且造模容易失败。用化学药物损伤细胞，常用药物有四氧嘧啶和链脲佐菌素，这是两种可选择性的损伤胰岛细胞，引起实验性糖尿病。由于STZ对大鼠的胰岛细胞有高度选择性毒性作用，因此被广泛应用。饮食法是给予动物过量的食物或高蛋白高脂高糖饮食，使动物细胞负荷过重而发生萎缩，文献报道高脂饲料(含猪油20%或以上)可引起大鼠肥胖、高胰岛素血症伴胰岛素抵抗，而高蔗糖饲料则使其血中TG明显升高、并发现高胰岛素血症和胰岛素抵抗[48-51]。而西方国家使用较多的自发性糖尿病动物模型，如KK小鼠、遗传性肥胖性高血糖小鼠等，较为理想，但价格昂贵，货源较少。高脂高糖饮食诱导糖尿病发生的机制主要为：首先，使细胞膜磷脂里面的脂肪酸含量改变，从而影响胰岛素受体功能和胰岛素信号传导；第二，高糖高脂饮食可降低磷脂酰肌醇3激酶的活性，减少葡萄糖从胞浆向细胞膜表面的转位；第三，高脂血症还会诱导胰岛β细胞的凋亡，使胰岛素分泌减少。膳食纤维摄入过少也是2型糖尿病发生的发病因素之一。基于以上认识，我们在参考多种文献后，结合实际情况，在本实验中采用给大鼠腹腔注射链脲佐菌素损伤胰岛B细胞并配合高脂高糖饮食的方法造模，该法操作方便且易于实行，可引起大鼠2型糖尿病伴高脂血症。本实验中，经过高脂饮食喂养4周后的大鼠血液中血糖、总胆固醇和甘油三酯的含量都有明显上升，模型组较空白组有显著性差异，这说明本次实验中建立的2型糖尿病伴高脂血症模型大鼠造模成功。2对于希美宁治疗糖尿病伴脂代谢紊乱的认识中医论治消渴病伴脂代谢紊乱时认为，这类患者多表现为体型中心性肥胖，神疲乏力，少气懒言，月经血块多，身体疼痛甚至出现足部溃烂，苔白腻，亦出现舌胖大有齿痕，舌下脉粗、色青紫等临床症状，遂根据中医辨证原则，可将此类患者归为脾气虚弱，痰瘀互结的类型。导师李显筑教授认为此病病机复杂，病因主要是饮食不节，过食肥甘厚腻，20 黑龙江省中医药科学院硕士学位论文导致脾胃虚弱，亦因现代生活方式缺乏运动，导致脾胃气机壅滞，中焦气滞，升降不利，“出入废则神机化灭，升降息则气立孤为”，脾胃运化无力，无法化生膏脂。《素问·经脉别论》曰:“饮入于胃，游溢精气，上输于脾，脾气散精，上归于肺，通调水道，下输膀胱，水精四布，五经并行。”正常情况下，水谷精微可以濡润、滋养身体，脾胃是否能够有效吸收精微物质，关键在于脾的运化和散精功能，而今脾胃虚弱，无法化生水谷精微，膏脂也会化生失常，则会化生成湿浊、痰饮，身体内生痰湿。湿浊再次阻碍中焦气机造成恶性循环。另一方面，此病大多数患者吃多、少动，久卧伤气，脾气虚弱，气机壅滞，“气滞则血瘀”，脾胃气机壅滞，则瘀血内生。中心性肥胖往往是此病的来源，继之出现各种大小动脉粥样硬化导致的并发症。脾胃运化功能失常，如若不能及早防治，久则气渐阻，血渐瘀，形成流痰，痰瘀互阻，互为因果，互相转换。痰瘀互结病久损伤血管内皮、增加血黏度、影响血流变使血液变稠、血流变慢，都是属于中医血瘀的范畴。脏腑、经络、气血功能失调，阴阳失调，络脉气血运行受阻，久则会使经络阻塞，造成心、脑、肾等脏器病变、衰败。所以应该在高糖、高脂环境还未对身体造成严重影响的时候，用药物化瘀通络，防治并发症的形成。导师李显筑教授从中医学角度分析2型糖尿病伴高脂血症，认为其病因病机比较复杂，由多因素导致，但主要体现在一个“浊”字上面：“浊者，以水不清而混浊”，也指液体的混浊。在人体上，主要是指脂毒、郁热、痰湿、瘀血诸毒兼夹为病，“浊毒”垢积日久，随血液运行，遍布全身各个部位，粘滞难除，碍气滞血，蒙清伤络，从而引发各种变证。浊毒内生、浊毒蕴血，可伤及肾络，出现糖尿病肾病；伤及目络，出现糖尿病性视网膜病变；伤及心络，出现糖尿病冠心病；伤及脑络，出现脑梗塞；伤及下肢络脉，出现糖尿病足等。并认为“浊毒”容易反复，故应以生活饮食调理为基础，加上药物综合调理，方能奏效。现已有临床研究表明希美宁治疗2型糖尿病脂质代谢紊乱具有很好的作用，不仅能降低患者的血糖、血脂水平，还可以改善2型糖尿病患者的胰岛素抵抗、血流变，对希美宁方的作用机制做了部分实验观察，但其药理学机制尚有待进一步明确。现为了进一步明确希美宁方的药理作用机制，本实验主要通过观察希美宁方对于糖尿病伴高脂血症大鼠的氧化应激反应的作用，探讨其治疗T2MD的作用机制，并提供相应的实验证据。2.1希美宁的立法依据及组方分析导师李显筑教授经过30余年的临床实践和实验研究，总结出经验方希美宁。21 黑龙江省中医药科学院硕士学位论文导师认为糖尿病伴高脂血症的病机为痰浊脂毒蕴藏于血液，毒随血行，到达身体各处，从而损害身体各组织器官。此病的病因为本虚标实。本虚是指正气亏虚：①在整体上，阴虚血滞，气虚浊流；②在脏腑上，脾胃虚弱，肝肾亏虚。标实为诸邪交织：浊邪为首，可致瘀血、痰湿、郁热等复杂病机。所谓浊者，水不清而混，也指液体的混浊。《吕氏春秋》中提到“流水不腐，户枢不蠹，动也”。瘀血、痰湿、郁热等诸邪夹杂，本虚标实，气壅血浊，蕴热酿毒，损络伤体，病及周身导致浊毒内生、气机不畅。杂毒垢积日久，痰热脂瘀诸毒兼夹，毒随血行，至全身各处，碍气滞血、蒙清伤络，从而出现各种变证。故清理机体的浊邪尤为重要，如同污水处理需要清淤泥、通河道、截断排污源，以及水质净化处理等等措施一样，身体的浊邪相对应需要化瘀、除痰、清热、行气等。本方主要用于糖尿病病人中气机壅滞，浊邪停留者，通过祛瘀血、化痰湿、除郁热、通气机的治疗方法，降低患者血脂，改善胰岛素抵抗，达到防治2型糖尿病的目的。临床上用其治疗2型糖尿病伴高脂血症患者疗效显著。此方主要由陈皮、厚朴、枳实、莪术、昆布、山楂、水蛭、地龙、泽泻、生薏苡仁、黄芪、党参等组成。如下为部分希美宁方组方原则分析：浊壅气滞，行气理气：方中陈皮，性辛苦温，健脾燥湿，利气下痰，《本草备要》谓之：“能燥能宣，有补有泻，可升可降……同补药则补，升药则升，降药则降。”枳实，可破气消积，化痰散痞。厚朴燥湿消痰，下气除满，其力即可下行，又可上升外达。此三味药共奏行气通浊之功。血滞瘀阻，宜活宜化：莪术，性辛苦温，行气破血，消积止痛，其活血作用颇强，《雷公炮制性解》强调：“虚人禁之”，《药性通考》亦有记载其“乃攻坚之药”，可见此药活血力量之强大。诸邪胶结，宜软宜散：昆布软坚化痰，消瘿散结；山楂消食积，化瘀滞；两药合用，软坚散结，消脂毒。莪术、昆布、山楂三药合用，行气活血，化痰消积，共奏调气通窍之功，以祛除垢积日久之脂毒。久瘀入络，宜搜宜剔：方中水蛭为嗜血之物，善搜剔络脉瘀血。有破血，逐瘀，通经，搜剔通络，祛瘀生新之功效；地龙则气腥走窜，善于通经活络。消散之邪，宜渗宜利：取泽泻渗利之性，与生薏苡仁相配合以助邪有出路，进而增强全方燥湿化痰、活血化瘀的效果。气虚血滞，宜补宜运：方中黄芪甘微温，补气升阳，重用黄芪补气，使气行22 黑龙江省中医药科学院硕士学位论文血亦行，治“气虚浊流”，党参甘平归脾肺经，补中益气，健脾益肺。两者合用，“气行则血行”，推动血液运行，用于气虚浊流，使浊邪有出路。因高脂血症是痰浊脂毒淤积所致，其性粘滞难化，阻碍气血运行，以致机体阴阳不调，蕴久生毒，损伤络脉。脏腑、经络的毒邪壅滞会导致正气不达、药力不至，以至邪气难祛，效果不佳，治疗关键在于疏通周身气机、消导渗利以达到活血、软坚消导、解毒通络的作用。2.2希美宁方单味药现代药理学研究2.2.1陈皮陈皮的主要药效成分是黄酮类化合物和挥发油。这两类成分都具有强大的抗氧化活性，实验证明，采用ABTS法和FRAP法，陈皮黄酮类化合物模拟体系液均显示出很强的抗氧化能力，以橙皮苷的抗氧化活性最好。抗氧化作用与黄酮类化合物中的酚羟基有关，它可以和活性自由基中的氢原子相结合，生产更稳定的黄酮自由基[52]。采用FRAP法的黄酮类化合物混合状态下能发挥一定的协同抗氧化作用。最强的是橙皮苷和橘皮素，抗氧化能力比理论值增加了50.17%。另外挥发油还对各种菌种有一定的抑制作用，尤其是对革兰氏阳性菌和真菌具有明显的抑菌作用[53]。2.2.2厚朴厚朴中的主要有效成分是厚朴酚，它首次是藤田在1973年从厚朴中分离出来的一种活性成分，现有研究可以证明厚朴酚具有多种功效，包括抗氧化作用，有实验采用三种化学发光体系（过氧化氢-鲁米诺、Fe2+-过氧化氢-鲁米诺、邻苯三酚-鲁米诺体系）制备出的厚朴样本，以清除各种自由基的能力验证其抗氧化活性，发现这三种样本都具有很强的清除自由基的能力，证明了厚朴中的成分具有很强的抗氧化活性[54]。其抗氧化作用的原理之一是厚朴酚的酚羟基很容易被氧化。Sun等用TO-SC法证实厚朴中的丁香苷、和厚朴酚、厚朴酚均有较强的自由基清除能力[55]。厚朴酚具有抗糖尿病作用，Choi等的实验表明，厚朴酚与可通过激活PPAR（过氧化物酶体增殖物激活受体），是胰岛素的敏感性提高[56]。Kim等的实验证明，厚朴酚可以通过抑制ERK/MAPK/Akt信号通路降低人的视网膜因为高血糖引起的TGF-1和纤连蛋白升高，提示厚朴酚可能对糖尿病视网膜病变有一定的预防作用[57]。另外，厚朴酚还有抗抑郁作用，神经保护作用，抗肿瘤作用，缓解炎性作用等。23 黑龙江省中医药科学院硕士学位论文2.2.3枳实枳实里面主要有效活性成分和陈皮一样，也有橙皮苷，它是一种黄酮类化合物，有很强的抗氧化作用，焦士蓉通过体外实验发现枳实提取物有明显的清除自由基以及抑制脂质过氧化的作用[58]。而且Kim发现枳实中的黄酮类化合物可以通过Akt信号传导途径抑制脂肪的形成[59]。黄爱华等发现枳实里面的黄酮化合物还有可改善功能性消化不良大鼠的胃排空和小肠蠕动功能，并推测可能是和增加了胃动素的分泌有关系[60]。除此之外，枳实里面的有效成分还有生物碱类和挥发油类化学成分，生物碱类化合物（辛弗林等）是很强的脂肪分解剂，而且副作用小[61]。挥发油成分中的-月桂芬还具有抗溃疡活性，可以显著降低消化系统的损伤，作用机制可能是因为减少了胃粘膜的氧化应激作用[62]。除此之外，有报道指出枳实提取物还有抗炎、抗癌、抗菌、抗焦虑的作用。由上可以推测，枳实可以通过抗氧化的作用预防糖尿病性胃轻瘫，并且可以改善糖尿病伴高脂血症病人的肥胖。2.2.4莪术莪术的主要有效成分是挥发油、姜黄素类成分和多糖类成分。对于莪术的近代研究主要集中在它的抗血栓和抗肿瘤方面，廖婉等在醋莪术对气滞血瘀证大鼠的影响的实验中发现，它能明显改善大鼠的全血黏度、红细胞聚集指数、血细胞压积等有关“气滞血瘀”的指标[63]，可见莪术具有很强的活血作用。莪术油是挥发油中的一种，盛辉等通过体外细胞实验发现它可以抑制甚至直接杀死体外培养的肺癌细胞[64]。宋爱莉等发现莪术油可以使乳腺癌癌前病变模型大鼠的血流变明显改善，改善大鼠乳房的的微循环[65]。同时莪术还具有抗炎、抗细菌病毒、治疗白血病、抗癫痫、提高自身机体免疫力和改善胃动力等作用。2.2.5昆布昆布的主要有效化学成分是昆布多糖，它同时具有调节血脂、降血糖、抗氧化以及抗凝血的作用。甑翱翾发现昆布的提取物能明显提高斑马鱼高糖模型在高糖环境中的生存率，并且可以抑制斑马鱼模型体内的氧化应激反应[66]。孙炜用实验表明昆布中的昆布多糖能对高血糖大鼠的糖耐量有明显改善，并能降低大鼠的血糖，他认为原因是昆布多糖有强大的吸水性，能增加大鼠的饱腹感，而且可以形成凝胶池减缓小肠对葡萄糖的吸收，从而达到降血糖、改善糖耐量的作用[67-68]。张融瑞等在用昆布提取液做的动物实验中发现，昆布的乙醚提取物有明显降低TC和TG的作用[69]。除上述以外，实验证明昆布还有调节免疫功能、抗肿瘤、抗辐射、抑菌、抗病毒的作用。24 黑龙江省中医药科学院硕士学位论文2.2.6山楂山楂的降脂作用很强，它降血脂的活性成分有总黄酮、植物甾醇、三萜酸、果胶五糖等。叶希韵等发现，山楂总黄酮能通过抗氧化途径对血管内皮细胞起到保护作用，它能显著的减轻乳酸脱氢酶（LDH）从细胞中的泄露，并使细胞内MDA含量降低，从而保护血管内皮细胞免受氧自由基的损伤[70]。张兴燊等发现山楂水提液及山楂颗粒能明显升高大鼠的高密度脂蛋白，降低低密度脂蛋白和TC、TG[71]。同时，谷仿丽也在试验中证实山楂总黄酮联合茶多酚有显著的增强血清及肝脏组织的谷胱甘肽过氧化物酶（GSH-Px）和SOD活力，并降低MDA水平的作用，并且大鼠的血脂在试验中也被降低[72]。上述实验均表明，山楂具有很好的降血脂和预防动脉粥样硬化的作用，并有抗氧化的作用。2.2.7水蛭水蛭是一种传统的破血药，其有效成分包括大分子类化合物比如水蛭素、氨基酸，小分子类比如糖脂类化合物等。水蛭在现代药理研究中最突出的功效是抗凝、抗血栓作用，因为水蛭素与凝血酶具有很强的亲和力，可以结合成一种共价复合物，十分稳定。从而使凝血酶水解纤维蛋白原受到抑制，有动物实验表明水蛭素的抗血栓作用比肝素强50%以上[73]。同时盛丽等人发现水蛭还有明显降脂的作用[74].除此之外有研究表明水蛭还能抗癌抗肿瘤、抗炎抗纤维化。2.2.8地龙地龙在现代研究中既可抗凝又有溶血栓的作用，具有双向调节功能。通过实验证明地龙体内有种具有抗栓活性的纤溶酶（蚯蚓纤维蛋白溶解酶）[75]。同时，地龙体内的蚓激酶既有较强的溶栓活性而且也具有抗凝、降纤的功效。有学者通过动物灌胃地龙冻干粉发现，地龙冻干粉有显著的降低小鼠血浆TC、TG和LDL-C的作用，并且能抗氧化应激，可以明显降低小鼠体内的SOD和MDA含量[76]。同时有实验证实蚯蚓提取物确实能影响小鼠的脂质过氧化水平，防治组织受到氧化损伤[77]。除上述之外，地龙还有解热镇静、抗惊厥和抗组胺、平喘、保护免疫力的功效。2.2.9泽泻泽泻的提取物对肥胖小鼠有明显的降血清中TC、TG浓度的作用[78]，有学者推测其降脂的机理可能和影响胆固醇的吸收、代谢有关系[79]，同时因为泽泻提取物还有抗凝的作用，从而可以防治粥样硬化。而且有学者证明它可以抑制脂肪肝的形成，对肝脏细胞具有保护作用，能改善肝功能。许文等发现泽泻提取物对伴25 黑龙江省中医药科学院硕士学位论文胰岛素抵抗的2型糖尿病有很好改善糖耐量的作用[80]。泽泻还有很好的利尿、降血压、抗肾炎、调节免疫等功能。2.2.10薏苡仁众多研究证明薏米具有很好的降糖、降脂作用，最早是日本的羽野寿发现，正常兔被注射薏苡仁油后会出现血糖下降的现象。后面又有学者用小鼠做动物实验，发现薏苡仁里面降糖作用最强的活性成分是薏苡仁多糖，徐梓辉等通过实验发现，无论是肾上腺高血糖小鼠、四氧嘧啶糖尿病小鼠还是正常小鼠，都会在注射薏苡仁多糖后血糖降低，并且薏苡仁的量越大，降血糖的效果越强[81-82]。YehPH等给糖尿病大鼠的高脂饲料总掺入薏苡仁后发现，大鼠的血糖和血脂都有明显降低，而排泄物中的胆固醇含量却明显上升[83]。薏苡仁还有明显的抗氧化应激作用，吕峰等发现薏苡仁多糖可使CCl4中毒导致肝损伤的小鼠SOD、GSH-Px的活性明显增强，同时使小鼠肝细胞的MDA水平明显降低，并且呈剂量依赖关系[84]。除上述作用之外，研究证明薏苡仁还有抗肿瘤、抗炎镇痛和提高免疫力等作用。2.2.11黄芪黄芪里面包括有黄芪多糖、黄芪黄酮类成分、黄芪皂苷、黄芪甲苷等多种活性成分。有动物实验证明四氧嘧啶性高血糖小鼠和肾上腺素导致的高血糖小鼠的血糖均能被黄芪甲苷明显降低，说明高血糖模型小鼠的血糖升高能被黄芪甲苷明显抑制。同时有实验证明在黄芪中提取的黄芪多糖有防治糖尿病的作用，可以明显降低大鼠的血糖、糖化血红蛋白，并且还有使TC、TG降低的作用[85]。段琦梅等发现黄芪具有一定的抗氧化能力，而且强于党参[86]。其次，黄芪被证实还有很强的免疫调节作用，并能抗肿瘤、抗病毒、抗衰老、治疗代谢性紊乱。2.2.12党参近年来我国对党参的研究很多，它在调节血糖、增强免疫功能、抗氧化、降压、延缓衰老以及调节胃肠功能等方面有较好的效果。党参的活性成分之一是党参多糖，它有很好的清除氧自由基的作用，段琦梅等通过检测党参提取物清除DPPH自由基活力的能力后发现，党参提取液具有一定的抗氧化活性，当浓度为0.12mg.mL-1的时候，其相应的自由基清除率为26.86%，而且浓度增加后自由基清除率也相应的增加[86]。傅盼盼等在动物实验中发现，在给予党参多糖后，糖尿病模型小鼠的SOD水平被明显升高，MDA生成减少，而且胰岛素敏感性也被改善，血糖较给药前明显降低[87]，上述实验说明党参多糖可以通过增强小鼠胰岛素敏感性来改善胰岛素抵抗。26 黑龙江省中医药科学院硕士学位论文3关于希美宁对MDA水平、SOD活性影响的讨论氧化应激标志物的种类较多，氧化应激标志物的含量以及活性的测定，可以反映出尿病患者机体内氧化应激水平，以及氧化应激其对机体的损伤程度。目前常用的检测方法有酶联免疫吸附(enzyme-linkedimmunosorbentassay，ELISA)、高效液相色谱(highperformanceliquidchromatography，HPLC)等技术对氧化应激标志物含量和活性进行测定。本实验选择的两个氧化应激指标中，MDA是常用来检测的自由基标志物之一，SOD是氧化酶的常用标志物之一。SOD与MDA一起测定，相互配合，因为SOD活力的高低能间接看出机体清除氧自由基的能力[30]，MDA浓度含量的高低可间接看出机体细胞受自由基攻击的程度。而研究表明自由基攻击增多和氧自由基清除能力减弱是糖尿病合并脂代谢紊乱发生的重要机制之一。在本实验中，糖尿病组大鼠胰腺组织中的MDA含量增高，SOD活性降低，提示糖尿病大鼠机体组织细胞中线粒体内存在脂质过氧化反应增强，抗自由基的作用减弱，从而引起胰腺受损，胰岛素抵抗，空腹血糖水平升高。而希美宁治疗组不仅2型糖尿病模型大鼠的糖脂代谢有明显改善，而且其体内的氧化应激反应也明显减轻，减少了脂质过氧化和自由基损伤，从而达到保护胰岛细胞、减轻胰岛素抵抗的目的。4问题和展望本实验采用腹腔注射STZ和高糖高脂饮食灌胃的方法制备的糖尿病伴高脂血症模型大鼠，虽然造模成功率高，造模周期短，但不能否认的是，动物模型制作过程中没有办法制备出符合中医症候分型，符合中医辨证论治思想的动物模型。本课题对于希美宁如何影响大鼠氧化应激反应的机制只是作出了初步的探讨，由于胰岛细胞的损伤和胰岛素抵抗是各方面因素引起的，不仅仅是由于某一因子或者某一通路所作用的结果，因此要深入探索它与各通路之间的联系及具体作用机制，才能更清晰的了解希美宁的作用机制，为其临床应用提供更多的思路。以期充分发挥中医和西医在治疗此病上的优点，达到早期防治的效果，为延缓其并发症甚至治愈此病提供充分可能！27 黑龙江省中医药科学院硕士学位论文结论1在糖脂代谢紊乱方面，本实验证明了希美宁方具有改善2型糖尿病模型大鼠血糖、血脂的作用。2在氧化应激方面，希美宁能有效减轻糖尿病伴高脂血症模型大鼠体内的氧化应激反应，减少脂质过氧化和自由基损伤，从而保护胰岛细胞、减轻胰岛素抵抗。28 黑龙江省中医药科学院硕士学位论文参考文献[1]潘长玉.中国糖尿病控制现状——指南与实践的差距亚洲糖尿病治疗现状调查1998,2001及2003年中国区结果介绍[J].国际内分泌代谢杂志,2005,25(3):174-178.[2]刘卫娟.希美宁对2型糖尿病高脂血症模型大鼠血脂、血流变及血清TNF-α的影响[D].黑龙江中医药大学,2008.[3]马新宇.希美宁对2型糖尿病高脂血症模型大鼠血脂、血流变及血清Leptin的影响[D].黑龙江中医药大学,2008.[4]徐赫男.对比针对糖尿病前期人群管理的国内外指南[J].糖尿病临床,2016(2):61-64.[5]叶勇.梅国强教授运用化痰活血法治疗高脂血症[J].光明中医,2003,18(6):22-24.[6]陈炯华,王国华.符为民临证治疗高脂血症举要[J].江西中医药,2004,35(3):8-9.[7]张秋霞.聂惠民教授治疗高脂血症的经验[J].现代中医临床,2003,10(3):38-39.[8]郑贵力,王煦,王绵之.王绵之教授治疗高脂血症学术思想及经验[J].北京中医药大学学报,2000,23(2):48-50.[9]庞春枫.王多让治疗高脂血症的经验--附28例小结[J].新疆中医药,2003,21(3):41-42.[10]孙天福,马仁生.袁海波教授治疗高脂血症学术思想及经验[J].中医研究,2004,17(2):41-44.[11]叶勇.高脂血症与痰浊淤血相关性理论基础与研究依据[J].时珍国医国药,2006,17(8):1561-1562.[12]郭姣,朴胜华.从高脂血症发病低龄化趋势探讨其中医发病机制[J].中医药信息,2008,25(6):4-6.[13]合湫,苏恒.胰岛β细胞损伤的分子机制探讨[J].实用糖尿病杂志,2011(6):10-12.[14]傅晓英.2型糖尿病患者糖代谢紊乱与脂代谢紊乱关系的临床研究[J].中国慢性病预防与控制,2004,12(5):200-202.[15]翁建平.指南与时俱进规范重在落实——解读2013年版《中国2型糖尿病防治指南》[J].中华医学信息导报,2014,29(4):11-11.[16]KrookA,DigbyJ,O'RahillyS,etal.Uncouplingprotein3isreducedinskeletalmuscleofNIDDMpatients.[J].Diabetes,1998,47(9):1528-1531.[17]SchrauwenP,XiaJ,BogardusC,etal.Skeletalmuscleuncouplingprotein3expressionisadeterminantofenergyexpenditureinPimaIndians.[J].Diabetes,1999,48(1):146-149.[18]HofmannMA,SchiekoferS,IsermannB,etal.Peripheralbloodmononuclearcellsisolated29 黑龙江省中医药科学院硕士学位论文frompatients,withdiabeticnephropathyshowincreasedactivation,oftheoxidative-stresssensitivetranscriptionfactorNF-kB[J].Diabetologia,1999,42(2):222-232.[19]MannJ.Dietaryfibreanddiabetesrevisited.[J].EuropeanJournalofClinicalNutrition,2001,55(11):919.[20]中华医学会糖尿病学分会.中国2型糖尿病防治指南(2007年版)[J].中华医学杂志,2008,88(18):1227-1245.[21]金寒洁,胡松林,雷莹,等.浙江省某市居民糖尿病患病情况调查及分析[J].中华全科医学,2011,09(3):425-426.[22]史军有.甘肃省武山县肥胖和2型糖尿病关系调查[J].中国医药科学,2011,01(2):85-86.[23]KahnSE;PrigeonRL;SchwartzRS;FujimotoWY;KnoppRH;BrunzellJD;PorteDJr.Obesity,BodyFatDistribution,InsulinSensitivityandIsletβ-CellFunctionasExplanationsforMetabolicDiversity[J].JournalofNutrition,2001,131(2):354S-60S.[24]柏海平,高前进.游泳运动对2型糖尿病大鼠炎症和氧化应激状态的影响[J].中国康复医学杂志,2013,28(8):708-713.[25]HelmrichSP,RaglandDR,LeungRW,etal.Physicalactivityandreducedoccurrenceofnon-insulin-dependentdiabetesmellitus.[J].NewEnglandJournalofMedicine,1991,325(3):147-52.[26]JamesSA,JamjoumL,RaghunathanTE,etal.PhysicalactivityandNIDDMinAfrican-Americans.ThePittCountyStudy[J].DiabetesCare,1998,21(4):555-562.[27]MansonJAE,NathanDM,KrolewskiAS,etal.AProspectiveStudyofExerciseandIncidenceofDiabetesAmongUSMalePhysicians[J].JamatheJournaloftheAmericanMedicalAssociation,1992,268(1):63-67.[28]李宏,杨红英.PARP-1与氧化应激在糖尿病神经病变发病机制中的作用[J].检验医学与临床,2011,08(3):334-338.[29]ReedMJ,MeszarosK,EntesLJ,etal.Anewratmodeloftype2diabetes:Thefat-fed,streptozotocin-treatedrat[J].Metabolism-clinical&Experimental,2000,49(11):1390.[30]严万里,陈晓明,郭丽燕,等.超氧化物歧化酶活性测定的影响因素研究[J].生物学通报,2011,46(3):50-53.[31]任春久,张瑶,崔为正,等.氧化应激在2型糖尿病发病机制中的作用研究进展[J].生理学报,2013,65(6):664-673.[32]JonasJC,M.Bensellam†,J.Duprez†,etal.Glucoseregulationofisletstressresponsesand30 黑龙江省中医药科学院硕士学位论文β-cellfailureintype2diabetes[J].DiabetesObesity&Metabolism,2009,11Suppl4(Supplements4):65.[33]HaydenMR,SowersJR.IsletopathyinType2diabetesmellitus:implicationsofisletRAS,isletfibrosis,isletamyloid,remodeling,andoxidativestress.[J].AntioxidRedoxSignal,2007,9(7):891-910.[34]PatelS,SantaniD.RoleofNF-κBinthepathogenesisofdiabetesanditsassociatedcomplications[J].PharmacologicalReportsPr,2009,61(4):595-603.[35]Węsierska‐GądekJ,BorzaA,WalziE,etal.NF-BFamilyofTranscriptionFactors:CentralRegulatorsofInnateandAdaptiveImmuneFunctions[J].ClinicalMicrobiologyReviews,2002,15(3):414-429.[36]RobertsonRP,HarmonJS.Diabetes,glucosetoxicity,andoxidativestress:Acaseofdoublejeopardyforthepancreaticisletbetacell[J].FreeRadicalBiology&Medicine,2006,41(2):177-184.[37]KawamoriD,KajimotoY,KanetoH,etal.OxidativeStressInducesNucleo-CytoplasmicTranslocationofPancreaticTranscriptionFactorPDX-1ThroughActivationofc-JunNH[sub2]-terminalKinase[J].Diabetes,2003,52(12):2896-2904.[38]KajimotoY,KanetoH.Roleofoxidativestressinpancreaticbeta-celldysfunction[J].AnnalsoftheNewYorkAcademyofSciences,2004,1011(1):168-176.[39]MahadevK,MotoshimaH,WuX,etal.TheNAD(P)HOxidaseHomologNox4ModulatesInsulin-StimulatedGenerationofH2O2andPlaysanIntegralRoleinInsulinSignalTransduction[J].Molecular&CellularBiology,2004,24(5):1844-54.[40]LohK,DengH,FukushimaA,etal.Reactiveoxygenspeciesenhanceinsulinsensitivity.[J].CellMetabolism,2009,10(4):260.[41]GoldsteinBJ,KalyankarM,WuX.RedoxParadox:InsulinActionIsFacilitatedbyInsulin-StimulatedReactiveOxygenSpeciesWithMultiplePotentialSignalingTargets[J].2005,54(2):311-321.[42]GoldsteinBJ,KalyankarM,WuX.RedoxParadox:InsulinActionIsFacilitatedbyInsulin-StimulatedReactiveOxygenSpeciesWithMultiplePotentialSignalingTargets[J].2005,54(2):311-321.[43]张秋梅.氧化应激与2型糖尿病的关系及α硫辛酸的应用[J].医学综述,2007,13(24):1984-1985.31 黑龙江省中医药科学院硕士学位论文[44]McgarryJD.BantingLecture2001DysregulationofFattyAcidMetabolismintheEtiologyofType2Diabetes[J].Diabetes,2002,51(1):7-18.[45]TomásE,LinYS,DagherZ,etal.Hyperglycemiaandinsulinresistance:possiblemechanisms.[J].AnnalsoftheNewYorkAcademyofSciences,2002,967(1):43.[46]MaestreI,JordánJ,CalvoS,etal.Mitochondrialdysfunctionisinvolvedinapoptosisinducedbyserumwithdrawalandfattyacidsinthebeta-celllineINS-1.[J].Endocrinology,2003,144(1):335-45.[47]孙青,梁晓春.中药改善胰岛素抵抗的研究进展[J].中国临床医生杂志,2012,40(10):37-40.[48翁维良.活血化瘀治疗疑难病[M].学苑出版社,1993.[49]杨文军,庄严.胰岛素抵抗综合征辨治初探[J].山东中医药大学学报,2002,26(4):275-276.[50]汤小虎,邓中甲,唐辉.代谢综合征的中医认识及治疗[J].中医研究,2007,20(5):5-7.[51]梁兴伦.胰岛素抵抗综合征中医药治疗研究进展[J].安徽中医药大学学报,2000,19(5):60-62.[52]陈琪,王伯初,唐春红,等.黄酮类化合物抗氧化性与其构效的关系[J].重庆大学学报自然科学版,2003,26(11):48-51.[53]高蓓.广陈皮黄酮类化合物和挥发油成分及其活性研究[D].华中农业大学,2011.[54]范琪.厚朴抗氧化活性成分的提取分离及其抗氧化活性测试研究[D].重庆大学,2014.[55]SunjuK,DoyoungK,YeongshikK,etal.Peroxylradicalscavengingcapacityofextractsandisolatedcomponentsfromselectedmedicinalplants.[J].ArchivesofPharmacalResearch,2010,33(6):867-873.[56]SunsilC,ByungyoonC,YoungsilL,etal.Magnololenhancesadipocytedifferentiationandglucoseuptakein3T3-L1cells.[J].LifeSciences,2009,84(25–26):908-914.[57]KimYS,DongHJ,NanHK,etal.EffectofmagnololonTGF-β1andfibronectinexpressioninhumanretinalpigmentepithelialcellsunderdiabeticconditions[J].EuropeanJournalofPharmacology,2007,562(1-2):12-19.[58]焦士蓉,马力,黄承钰,等.枳实提取物的体外抗氧化作用研究[J].中药材,2008,31(1).[59]KimGS,ParkHJ,WooJH,etal.Citrusaurantium,flavonoidsinhibitadipogenesisthroughtheAktsignalingpathwayin3T3-L1cells[J].BMCComplementaryandAlternativeMedicine,2012,12(1):31.32 黑龙江省中医药科学院硕士学位论文[60]黄爱华,迟玉广,曾元儿,等.枳实黄酮对功能性消化不良大鼠胃肠动力的影响[J].中药新药与临床药理,2012,23(6):612-615.[61]MercaderJ,WanecqE,JianC.IsopropylnorsynephrineisastrongerlipolyticagentinhumanadipocytesthansynephrineandotheraminespresentinCitrusaurantium[J].JournalofPhysiologyandBiochemistry,2011,67(3):443.[62]BonaminF,MoraesTM,DosSantosRC,etal.TheeffectofaminorconstituentofessentialoilfromCitrusaurantium:theroleofβ-myrceneinpreventingpepticulcerdisease[J].Chemico-biologicalinteractions,2014,212:11–19.[63]廖婉,章津铭,傅舒,等.醋莪术对气滞血瘀证血液流变学影响的表征及谱效相关性研究[J].中成药,2013,35(2):330-334.[64]盛辉,苑春莉,王医术.莪术油对肺癌SPC-A4细胞株的体外抑制作用[J].江西中医药大学学报,2006,18(5):51-52.[65]宋爱莉,张敬涛,李静蔚,等.莪术油对乳腺癌癌前病变造模大鼠血液流变学及乳房微循环的影响[C]//中华中医药学会外科分会、山东中医药学会外科专业委员会2008年中医外科学术年会.2008:458-460.[66]甄翱翾,姜云飞,吴操,等.中药昆布有效成分的提取分离及抗氧化活性的评价[J].长春中医药大学学报,2017,33(1):47-49.[67]孙炜,王慧铭.昆布多糖对高脂血症大鼠降胆固醇作用及其机理的研究[J].中国中药杂志,2004,29(10):1015-1016.[68]孙炜,王慧铭.昆布多糖对实验性高血糖大鼠治疗作用的研究[J].浙江中西医结合杂志,2004,14(11):667-669.[69]张融瑞,华一琍,冯群光,等.昆布不同溶剂提取物的降脂实验[J].南京中医药大学学报,1988(4).[70]叶希韵,王耀发.山楂叶总黄酮对血管内皮细胞氧化损伤的保护作用[J].中国现代应用药学,2002,19(4):265-268.[71]张兴燊,梁欣娜,王乃平,等.山楂水提液及山楂颗粒对高脂模型小鼠血脂的影响[J].时珍国医国药,2011,22(12):2905-2906.[72]谷仿丽,陈乃富,韦传宝.山楂总黄酮联合茶多酚对高脂膳食大鼠血脂及氧化应激的影响[J].生物学杂志,2012,29(3):24-26.[73]HeimJ,AgnelliG,CzendlikC.Pharmaceuticallyactivecombinationcomprisingaplasminogenactivatorandhirudin:EP,EP0365468[P].1994.33 黑龙江省中医药科学院硕士学位论文[74]盛丽,姚岚,王丽,等.水蛭、地龙抗实验性小鼠肺纤维化作用的研究[J].中医研究,2006,19(2):15-17.[75]何执中,尚广东,胡文军,等.具有抗栓活性的低分子量蚓激酶:,CN101768579A[P].2010.[76]武金霞,宇璐,刘雪英,等.蚯蚓冻干粉浸提物抗氧化及抗衰老作用[J].时珍国医国药,2011,22(10):2558-2559.[77]周亿金.蚯蚓提取物抗氧化作用的研究[D].湖南农业大学,2009.[78]张春海,毛缜,马丽,等.泽泻水提取物、醇提取物对小鼠脂代谢影响的比较[J].江苏师范大学学报(自然科学版),2005,23(2):68-70.[79]张洪,马红斌,蔡鸿生.降脂中药浅谈[J].时珍国医国药,1995(1):34-35.[80]许文,罗奋熔,赵万里,等.泽泻降糖活性提取物化学成分研究[J].中草药,2014,45(22):3238-3245.[81]徐梓辉,周世文,黄林清.薏苡仁多糖的分离提取及其降血糖作用的研究[C]//国际传统医药大会论文摘要汇编.2000:578-581.[82]徐梓辉,周世文,黄林清.薏苡仁多糖对四氧嘧啶致大鼠胰岛β细胞损伤的保护作用[J].中国药理学通报,2000,16(6):42-45.[83]YehPH,ChiangW,ChiangMT.Effectsofdehulledadlayonplasmaglucoseandlipidconcentrationsinstreptozotocin-induceddiabeticratsfedadietenrichedincholesterol.[J].InternationalJournalforVitamin&NutritionResearch,2006,76(5):299-305.[84]吕峰,黄一帆,池淑芳,等.薏苡仁多糖对小鼠抗氧化作用的研究[J].营养学报,2008,30(6):602-605.[85]谢春英.黄芪甲苷降血糖作用的实验研究[J].中药材,2010,33(8):1319-1320.廖苇萍，2009[86]段琦梅.黄芪、党参质量评价及其提取物活性研究[D].西北农林科技大学,2010.[87]傅盼盼.党参多糖降血糖作用及其机制的研究[D].吉林大学,2008.34 黑龙江省中医药科学院硕士学位论文致谢不知不觉三年的研究生学习即将结束，其间的成长和收获令我难忘。在此论文完成之际，向关心帮助我的老师、同学和亲友们表示最真挚的感谢，正是有了你们的帮助和支持，我才能从容的面对困难，顺利完成学位课题和学位论文的撰写。首先，衷心感谢我的导师李显筑教授。在临床学习中，李老师对中医四大经典的精通，严谨的作风，渊博的学识，以及高尚的医德等使我受益匪浅，导师的悉心教导将永远谨记于心。在科研工作中，这篇论文从课题的选定到科研理论的学习方法，都离不开李老师的指导和大力支持。在此，谨向李老师表示崇高的敬意和衷心的感谢！您是我终身的学习榜样！其次，感谢同门师姐朱洁宜、师兄宋仲涛在实验中给予的指导和帮助！感谢家人多年来对我无尽的关怀与支持，让我能开心轻松的在喜欢的学习与科研道路上勇往直前的走下去！最后，特别向参与本文评审而付出宝贵时间的各位专家和教授致以诚挚的谢意！35 黑龙江省中医药科学院硕士学位论文攻读硕士期间发表论文张晓燕,朱洁宜,李显筑.李显筑教授辨治胸痹经验[J].中医药学报,2016,44(6):60-62.36 原创性声明，本人郑重声明：所呈交硕士学位论文，是本人在指导教师的指导下独立进行研究工作所取得的成果，。除文中已经注明引用的内容外本论文不包含任何其他个人或集体已经发表或撰写过的作品成果。对本文的研宄做出重要贡献的个人和集体，均已在文中以明确方式表明。本人完全意识到本声明的法律结果由本人承担。学位论文作者签名：曰期年月铲曰７关于论文使用授权的说明本人同意学校有权保留并向国家有关部门送交学位论文的复印件，允许论文被查阅和借阅。同意学校及国家有关机构有权公布论文的全部或部分内容，并采用影印、缩印或其他复制手段保存论文。本论文内容以任何形式公开发表或成果转让时须经导师同意。论文作者签名：旅色指导教师签承日期：災丨严７月ｆ日
