层析填料选择.pdf

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1、层析填料选择MediaSelectionSepharoseFFSuperoseSepharoseHPSuperdexSepharoseBigbeadsSepharoseCLStreamlineMonobeadsSepharoseSepharoseXLSephadexSephacrylCaptosepharoseSOURCE新一代填料是什么呢？19601970198019902000填料的基本特点•五大类层析技术–凝胶过滤(GF)–离子交换(IEX)–亲和层析(AC)–疏水层析(HIC)–反相层析(RPC)•基架-颗粒越细、大小越均匀，分辨率越高，但反压亦

2、较高(SOURCE基架例外)•物理稳定性-新一代介质较坚固，能承受高流速，同时保持柱床体积和结构稳定，省却每次重新装柱，提高重复性•化学稳定性-新一代介质能承受极端pH，高盐度，促溶剂和有机溶剂，利于开发分离条件和在位清洗(CIP)，大大延长介质寿命并提高重复性如何选择层析填料•按照层析技术原理分类选择填料•层析工艺不同阶段选择填料的一般规律•根据目的物的性质选择填料•根据规模选择合适的层析预装柱•层析空柱选择3/GE/如何选择层析填料•按照层析技术原理分类选择填料•层析工艺不同阶段选择填料的一般规律•根据目的物的性质选择填料•根据规模选择合适的层析预装

3、柱•层析空柱选择4/GE/按照层析技术原理分类选择填料•凝胶过滤填料选择•离子交换填料选择•亲和填料选择•疏水填料选择•反相填料选择5/GE/凝胶过滤（GF）填料选择Gelstructure•原理：是根据分子量大小分离物质的一种层析方法。•精度：分子量差别一倍以上•重点：选择分离范围•类型：Sephadex、Superdex、Sephacryl、Sepharose、Superose6/GE/Sephadex系列填料50周年1959-2009－快速groupseparation首选Sephadex是由葡聚糖交联环氧氯丙烷形成的多孔结构Sephadex:羟基

4、基团，呈弱酸性Sephadex:SeparationPharmaciaDextran7/GE/Sephadex系列填料－快速groupseparation首选第一代凝胶过滤填料：G-10分离范围：<700G-25分离范围：1000－5000G-50分离范围：1000－30000SephadexLH-20分离范围:<50008/GE/Superdex系列填料－最受欢迎的凝胶过滤填料特点：结合了Sephadex的高选择性和琼脂糖的高物理稳定性，机械稳定性好,高分辨率高化学稳定性型号分离范围Superdexpeptide100－7000mAUSuperdex3

5、0prepgrad<10000dimer1500Superdex753000－700001000Superdex20010K-600Kmonomer50009/GE/0.05.010.015.020.025.0mlSephacrylS系列填料－经济的高分辨率填料Kav1.0-SephacrylS系列有6种不80.8-同分离范围（1000-10），提供广阔的选择性0.6-，甚至可分DNA质粒和病毒，经济、高效，易0.4-于自行装柱，是7Superdex外作下游纯化0.2-6的理想介质12453100010,000100,0001,000,00010,000

6、,0001.Superdex™Peptide2.Superdex753.Superdex2004.Sephacryl™S-100HR5.SephacrylS-200HR6.SephacrylS-300HR7.SephacrylS-400HR10/GE/Sepharose系列填料－快速大分子凝胶过滤首选•Sepharose的结构：β-D-半乳糖和3,6-脱水-L-半乳糖交替结合所形成的线Sepharose:Separation性多聚糖。Pharmacia在形成过程中由单独的多糖链先形成双螺旋，然后聚agrose集成胶束，胶束之间形成微孔，其大小取决于胶束的

7、多少，即琼脂糖的浓度。pH为4-9之间稳定。琼脂糖凝胶对样品的吸附作用很小，并且机械强度和孔穴稳定性都很好。11/GE/Sepharose系列填料－快速大分子凝胶过滤首选•Sepharose2B/4B/6B：分离范围10K-40000K适合分离分子量大小差异大，对分辨率要求不高的样本。如核酸、蛋白多糖等。•SepharoseCL2B/4B/6B：Sepharose与2,3-二溴丙醇共价交联得SepharoseCL，适合有机溶剂纯化。主要用于核酸、蛋白多糖分离等。•Sepharose6FF：分离范围10KD-4MDSepharose4FF：分离范围60KD

8、-20MD适用于巨大分子如多糖疫苗、病毒、乙肝表面抗原、DNA质粒纯化。12/G