心脑梗死患者凝血因子xiiia基因val34leu多态性及血浆水平

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1、心脑梗死患者凝血因子XIIIA基因Val34Leu多态性及血浆水平　　【Abstract】AIM:ToexploretheclinicalsignificanceofthepolymorphismofcoagulationfactorXⅢAsubunitgene(Val34/Leu),andFXⅢantigenandactivityinplasmaofpatientsyocardialinfarctionorbraininfarction.METHODS:TheplasmalevelofFXⅢan

2、tigeninpatientsandthehealthycontrolseasuredbysandelinkedimmunosorbentassayandtheactivityofFXⅢyocardialorbraininfarction(P>0.05).Thereyocardialinfarctionorbraininfarction.CONCLUSION:Thereisnodefinitelycorrelationbetorphism,plasmaFXⅢlevelandmyocardia

3、lorbraininfarction.　　【Keyyocardialinfarction;braininfarction;FXⅢVal34/Leupolymorphism;FXⅢantigenandactivity　　【摘要】目的：探讨凝血因子FXIIIA基因Val34Leu多态性、血浆FXIII抗原及活性水平在心肌梗死与脑梗死患者中的临床意义.方法：采用双抗体夹心ELISA法检测心肌梗死、脑梗死患者及健康对照者血浆FXIII抗原；生物素标记法检测血浆FXIII活性；等位基因特异PCR检测FXII

4、IA基因V34/L的基因型.结果：心肌梗死组和脑梗死组FXIIIA基因Leu34基因频率分别为0.018和0.029，较健康人群偏高，但三组之间无显著差异（P>0.05），且含Leu者的FXIII活性偏高，但与Val者无差异（P>0.05）.心肌梗死组和脑梗死组血浆FXIIIA亚基和B亚基抗原含量、FXIII活性与健康对照组比较无显著差异（P>0.05）.结论：中国人群FXIIIA基因Val34Leu多态性、血浆FXIII抗原和活性与心肌梗死及脑梗死患病危险性无明确相关性.　　【

5、关键词】心肌梗死;脑梗死;FXIIIA基因多态性;FXIII抗原和活性　　0引言　　FXIIIA基因多态性与心脑血管血栓性疾病有关，其中Val34Leu引起研究者广泛的兴趣，这一多态性位点距凝血酶的酶切部位仅3个氨基酸，可影响FXIII的激活过程.英国、芬兰和奥地利人群中Val34的存在可降低动脉闭塞性疾病如心肌梗死(MI)、脑梗死，但来自西班牙和法国南部的研究未发现有此相关性.我们对中国汉族人群进行了相关的探索.　　1对象和方法　　1.1对象　　2002/2004年来自河南省汉族人群，经心电图、

6、心肌酶谱及CT确诊心肌梗死112(男66，女46)例，年龄39~72(平均58.2)岁；脑梗死122(男58，女62)例，年龄45~84(平均64.7)岁；健康对照200(男120，女80)例为同期健康体检者，年龄18~65(平均50.8)岁.　　1.2方法　　采用双抗体夹心法检测FXIIIA:Ag和FXIIIB:Ag，其中FXIIIA抗体和FXIIIB抗体分别作为包被抗体.将FXIIIB抗体作为酶标抗体，用HRP进行标记，分别检测FXIIIA:Ag和FXIIIB:Ag.FXIII经凝血酶激活后，

7、FXIIIA可催化蛋白分子间和分子内γ谷氨酰胺基和ε赖氨酸氨基之间的脱氨反应，FXIIIA的活性与掺入的生物素化戊胺成正比.纤维蛋白原包板；10g/LBSA封闭；加入5mmol/Lbiotinpentylamine，标准品或样品，凝血酶（50kU/L），50mmol/LCaCl2，37℃，20min；加0.2mol/LEDTA终止反应；加avidinHRP37℃,30min，显色1～2min，ELX800酶标仪测490nm的A值.标准品FXIII分5个浓度建立标准曲线.以正常标准血浆为标准，检测各

8、样本FXIII:C.等位基因特异PCR(allelespecificPCR)检测FXIIIA基因V34/L的基因型.针对Val34位点设计3′端特异的上游引物5′CACAGTGGAGCTTCAGGGCG3′和5′CACAGTGGAGCTTCAGGGCT3′，下游引物5′CAGAGGATGTTTACCTGCAG3′.片段长度为133bp，反应总体积为25μL，95℃变性5min，95℃1min,62℃30s，72℃30s，共35循环，72℃延伸10min，降至4℃，在15g/L琼脂糖