livin反义寡核苷酸诱导人肾癌细胞凋亡及其机制的研究

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1、livin反义寡核苷酸诱导人肾癌细胞凋亡及其机制的研究刘川1吴小候2张唯力1唐伟2尹志康2何云锋2杜虎2（重庆医科大学:1第二临床学院泌尿外科，重庆4000102临床学院泌尿外科，重庆400046）作者简介：刘川（1971-5-16），男，汉族，重庆市南川区人，博士研究生，副主任医师，主要从事泌尿系统肿瘤的研究。电话：（023）63693576，13996052082。E-mail:liuchuan100@126.com通讯作者：吴小候，电话（023）89011122基金项目：重庆市卫生局资助课题（

2、04-2-131）Supportedbyprojectofchongqinghealthbureau（04-2-131）提要：目的探讨livin反义寡核苷酸(ASODN)对人肾癌细胞株786-OlivinmRNA及蛋白表达的抑制作用以及对细胞凋亡的影响。方法设计合成全硫代磷酸化修饰的livinASODN，脂质体辅助转染至786-O细胞内。采用RT-PCR检测转染后livinmRNA的变化，细胞免疫化学、激光扫描共聚焦显微镜观察livin蛋白在细胞内的分布、转染后表达的变化及细胞形态的变化，流式细胞仪

3、检测细胞凋亡率的变化，激酶法测定Caspase3活性的变化。结果转染livinASODN后，RT-PCR显示786-O细胞表达livinmRNA减少(P<0.01)，激光扫描共聚焦显微镜下见细胞表达livin蛋白减少、细胞形态发生变化，流式细胞仪检测细胞凋亡率显著增加(P<0.01)，Caspase3活性明显增加(P<0.01)。结论LivinASODN能明显下调786-O细胞livin基因的表达，诱导细胞凋亡。抑制Caspase3活性是livin抑制细胞凋亡的途径之一。Livin有望成为肾癌治疗的

4、靶基因。关键词livin；寡核苷酸类，反义；细胞凋亡；肾肿瘤中图法分类号：文献标识码：Antisenseoligonucleotidetargetinglivininducesapoptosisofhumanrenalcarcinomacell786-Oandit’smechanisminvitroLIUChuan1,WUXiao-hou2,ZHANGWei-li1,TANGWei2,YINZhi-kang2,HEYun-feng2,DUHu2（ChongqingmedicineUniversity

5、:1DepartmentofUrology,theSecondCollegeofclinicalmedicine,Chongqing400010,2DepartmentofUrology,Collegeofclinicalmedicine,Chongqing400016）Abstract：ObjectiveToinvestigatetheeffectofantisenseo1igonuc1eotidestargetinglivinontheinhibitionoflivinmRNAandprotei

6、nexpressionandapoptosisinhumanrenalcarcinomacellline786-Ocells.MethodsSpecificphosphorothioateantisenseoligodeoxynucleotidetargetingLivinweresynthesizedandthentransfectedinto786-Ocells.TheexpressionsoflivinmRNAweredetectedbymeansofreversetranscription-

7、polymerasechainreaction(RT-PCR).Expressionandlocationoflivinwereobservedbyconfocallaserscanningmicroscope(CLSM).Apoptosisrateof786-Ocellswasinvestigatedbyflowcytometer.TheactivityofCaspase-3wasperformedbycolorimetricassay.ResultsAfterthetransfectionofA

8、SODN,theexpressionoflivinmRNAwasdecreased(P<0.01),thefluorescencesignaloflivinobservedbyCLSMwassignificantlydecreased,theapoptosisratesdetectedbyflowcytometrywereapparentlyincreased(P<0.01),andthecaspase-3activitywasenhanced(P<0.01).Con