c-myc反义寡核苷酸诱导白血病细胞凋亡的研究

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1、上海医科大学硕士学位论文c-myc反义寡核苷酸诱导白血病细胞凋亡的研究姓名：张宝春申请学位级别：硕士专业：生物物理学指导教师：单易非20000501c—myc反义寡核苷酸诱导白血病细胞凋亡的研究摘要c-myc癌基因编码产物属核蛋白类，可以作为转录因子在细胞的凋亡调控过程中发挥重要作用。本课题采用针对HL60细胞c-mycmRNA5’端非翻译区的一个18bp的反义寡核苷酸：5’CTTCTCGAGGCAGGAGGG3’与HL60细胞共培养10小时，用DNA凝胶电泳、ELISA、流式细胞仅、凋亡细胞计数等方法检测HL60细胞的凋亡情况。结果表明：c—myc反义寡核苷酸能够诱导HL60细

2、胞凋亡，且这种诱导作用呈剂量效应性，即随着反义核酸浓度的增加HL60细胞凋亡呈上升的趋势：此反义核酸对白血痛患者的白血病细胞凋亡也有诱导作用。从而为反义核酸治疗白血病的临床应用提供进一步的依据。{÷，关键词：白血病ic—myc基甙反义核《HL60细∥凋亡StudyontheApoptosisofLeukemicCellInducedbyAntisenseOligodeoxynucleotidesComplementarytoc-mycAbstractc．Mvcprotein，productofc—myconcogene，islocalizedtothenucleus．Asatra

3、nscriptionfactor．itregulatestheapoptoticprocessofcells．Inthepresentstudy，wetreatedHL60cellswithanti．mycoligomer，5dfc】盯CTCGAGGCAGGAGGGl3．complementarytothetranscriptionalinitiationofe．mycmRNA．After10hour．wedetectedtheapoptosisofHL60cellbyseveralmethod：DNAExtractionandAgaroseGelElectrophoresis，

4、ELISA(enzyme．1inkedimmunosorbentassay)，FlowCytometricAnalysis，AccountingthenumberofapoptoticcellsafterstainedwithWright，s．Astheresult，wefoundthatapoptosisofHL60cellswereinducedbytheanti．mycoligomer，andtheinductionofapoptosiswasdoes．dependent，i．e．moreHL60cellswereapoptoticaswetreatedthemwithhi

5、gherdoseoftheantisenseoligodeoxynucleotides．Theanti．mycoligomeralsoinducedtheapoptosisofleukemicpatients，leukocytes．Thisstudyprovidestheoreticbasisforleukemiatreatment．Keywords：HL60cells，Aportosis，c—mycgeneAntisenseOligodeoxynucleotides2日lJ舌白血病是一种常见的恶性肿瘤，占癌症总发病数的5％左右，在儿童及35岁以下的人群中发病占第一位⋯。急性白血

6、病的治疗以抗肿瘤化学治疗为主，从传统的细胞毒药物发展到应用分化诱导药物以加快和提高缓解率，这是急性白血病诱导治疗的一项变革，即从无限制地杀灭白血病细胞转到使用细胞分化诱导剂。尽管白血病的治疗取得了一些进步，目前也只有20％到30茗的急粒病人和不足半数的急淋病人可能得到长期无病生存，而大多数患者仍将由于白血病的耐药性而死亡[2

7、。细胞凋亡是细胞死亡的一种特殊模式，胚胎发育时，器官的变形，生理上组织保持稳定状态。即细胞增殖与死亡的平衡都离不开细胞凋亡[3]。目前认为细胞凋亡与肿瘤发生、生长、浸润、转移有密切关系，诱导肿瘤细胞凋亡是治疗肿瘤的一条有效途径[4]。细胞凋亡受许多癌基因、抑

8、癌基因的调控[5]，c-myc癌基因便是其中的一个。c-myc癌基因编码的蛋白可作为转录因予在细胞周期调节及细胞增殖、分化、凋亡调控过程中发挥着重要作用[6]。在人白血病，尤其是早幼粒白血病细胞系HL60细胞中，c-myc基因的扩增和过度表达促进了HL60细胞的增值并抑制其分化，与早幼粒白血病的发病有关[7'8]：同时c-myc基因的过度表达也影响HL60细胞的凋亡[9，l0

9、。c-myc反义核酸可以有效地抑制HL60细胞增殖[1l，12]，诱导HL60细胞分化[1引。本课题在我