08吸光光度法1

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1、吸光光度法Spectrophotometry分析化学孟建新生命科技学院化学系吸光光度法吸光光度法是以物质对光的选择性吸收为基础的分析方法.别名：吸收光谱分析AnalysisofAbsorptionspectroscopy吸光光度分析，吸光度法（分析）分光光度法（分析），常用的吸光光度法包括可见光吸光光度法,紫外吸光光度法，红外吸光光度法非发光物质的颜色与光吸收的关系非发光物质的颜色：白光是各种不同波长的光的复合光；白光照射在物质上后，某些颜色的光被物质选择性吸收，不能被吸收的光就透过或反射到人眼被感知

2、出不同的颜色。一般物质的颜色就是物质吸收光的互补光的颜色：被物质吸收的光和不能被物质吸收的光合起来就是白光，它们互为互补光。不同颜色光的互补光电磁波谱与光谱类型吸光光度法的特点灵敏度高：检测下限和常用浓度10-5-10-6mol/L准确度高：相对误差1％－5％?简便快速：常无需分离样品，可直接测定灵活方便：可测物种广泛廉价易得：仪器成本很低吸光光度法的这些优异特点使之成为应用最为广泛的一种仪器分析方法化学分析与仪器分析方法比较化学分析(Chemicalanalysis)：常量组分(>1%),Er0.1

3、%～0.2%依据化学反应,使用玻璃仪器仪器分析(Instrumentalanalysis)：微量组分(<1%),Er1%～5%依据物理或物理化学性质,需要特殊的仪器例:含Fe约0.05%的样品,称0.2g,则m(Fe)≈0.1mg重量法m(Fe2O3)≈0.14mg,称不准容量法V(K2Cr2O7)≈0.02mL,测不准光度法结果0.048%～0.052%,满足要求准确度高灵敏度高吸收光谱的产生吸收光谱的谱峰位置与分子的能级结构有关，从原子能级到分子能级：不同的分子结构决定了不同分子有不同的能级分子的

4、能级分子结构的不同决定了各种物质的分子都具有特有的能级分子的能级按照运动方式的不同分子电子能级，振动能级，转动能级。吸收光谱的产生溶液对不同波长的光吸收具有选择性;A~λ作图得吸收曲线(吸收光谱)吸收光谱的谱峰位置与分子的能级结构有关，因此不同的物质有不同的吸收光谱，因此吸收光谱可用于物质的定性分析吸收曲线absorptionspectrum不同物质吸收曲线的形状和最大吸收波长均不相同。光吸收曲线与物质特性有关，故据此可作为物质定性分析的依据。不同浓度溶液的吸收曲线形状相似，最大吸收波长不变。KMnO

5、4溶液最大吸收波长lmax=525nm。在最大吸收波长max附近，吸光度测量的灵敏度最高。这一特性可作为定量分析选择入射光波长的依据。光吸收强度的表示Ia＋I=I0I0I溶液照射到溶液的入射光(I0)除去少部分被反射和散射外，有一部分被溶液吸收(Ia),剩余的透过溶液(I).透光度TtransmittanceT=I/I0吸光度AabsorbanceA=-lgT=lgI0/IIaA、T与浓度(c)的关系T-c非线性不便用于定量分析Ａ-c呈线性在定量分析中常用朗伯比尔定律（Lambert-Beer’sl

6、aw)一束平行单色光通过有色溶液时，溶液的吸光度A与液层厚度b和溶液浓度c的乘积成正比。A=KbcI0I溶液朗伯比尔定律朗伯比尔定律包括两部分,由两人分别发现：朗伯定律(A与b成正比)比尔定律(A与c成正比)朗伯比尔定律适用于所有均匀透明体系。如溶液，晶体，玻璃，空气等吸光系数和摩尔吸光系数常数K的大小与b,c的单位有关：常用的系数有两种：吸光系数(absorptioncoefficient,a)摩尔吸光系数(molarabsorptivity,)=a·M由于吸光度A没有单位，所以摩尔吸光系数是

7、最常用的吸光系数cbKg·L-1cmaL·g-1·cm-1mol·L-1cmL·mol-1·cm-1A=Kbc摩尔吸光系数ε表示吸光物质浓度为1mol/l,液层厚度为1cm时溶液的吸光度。值越大，溶液的吸光能力越强，显色反应的灵敏度越高。是吸光物质在特定波长下的特征常数。值是选择显色反应的重要依据。常用测量体系的大于104。吸光系数换算示例浓度为0.51mg/ml的Cu2+溶液,用双环己酮草酰二腙光度法测定.在600nm波长处用2cm比色皿测得A=0.297.求,a.吸光光度法的基本应用

8、试液和标准溶液目视比色法：用眼睛观察，对比试液和不同浓度标准溶液颜色深浅的差别，颜色相同者浓度相同。标准对照法（标准比较法）：浓度相近的标准溶液cs和试液cx的吸光度As和Ax，满足标准曲线法A=Kbc比色法标准曲线法1.配制系列标准样品2.测量标准样品的A3.绘制标准曲线（A-c曲线）4.在同样条件下测量待测样品的A5.根据标准曲线得到待测样的浓度A=Kbc对比尔定律的偏离按照Beer定律A~c有线性关系:A=bc但有时会发生偏离,浓度较大时,偏离更