苯作业工人职业流行病学研究及MDR1基因多态性对白细胞计数的影响

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学校代码学号等学力申请硕士学位伪拐士葬大拿硕学位论文苯作止工人职皿流行病学研究及基因多态性对白细胞计数的影响华山医院院系所业一一二丝兰一一名一燮些公一指导老师完成日期 苯作业工人职业流行病学研究及基因多态性对白细胞计数的影响硕士学位论文复旦大学硕士研究生毕业论文苯作业工人职业流行病学研究及基因多态性对白细胞计数的影响勿认七场专院系华山医院业生内科学研究黄简抒导师邹和建教授口为饭导师组成员口沙副教授周元陵副研究员 苯作业工人职业流行病学研究及基因多态性对白细胞计数的影响硕士学位论文目录中文摘要二”……”“”“…“””……“…“”…”…“二”…””二“……”…“……“…””二英文摘要……””二”二”……””二“”“”……“…”””“…“””…“…”“二前言…“……“…”……““……”二”……”……“……“”……“”“”……中英文对照缩略词表””……“”…“…。“””…“……“”“…“…”…”二“…第一部分苯作业工人职业流行病学研究”二””…”…””…”“二“……“二“…”…第二部分基因多态性对苯作业工人外周血白细胞计数的影响二”””……综述一职业性苯中毒诊断标准一编制说明…“……““……“…综述二苯的血液毒性遗传易感性研究进展“”……”……“…”””””……附录……””……”二““二”…”””……致谢……“二”…”…论文独创性声明封三论文使用授权声明封三 苯作业工人职业流行病学研究及基因多态性对白细胞计数的影响硕士学位论文中文摘要职业性苯中毒是常见的职业病之一,年由卫生部颁布了《职业性苯中毒诊断标准》一,年对《职业性苯中毒诊断标准》一进行了修订,修订内容主要包括增加单纯血小板计数减少为诊断的起点指标。为探讨苯接触人群单纯血小板减少的可能机制,本研究对苯作业工人进行职业流行病学调查,设计统一问卷调查表,估算工人累计接触苯剂量,检测工人外周血血常规,采用酶联免疫吸附法检测对照组和接触组血小板相关抗体工、、工,观察苯作业工人血小板抗体水平的变化规律。本组研究对象作业环境中苯浓度一巧,个体累积接苯浓度一,。接触组、队、增高,队异常检出率升高,随累积接苯浓度增加,、队有升高趋势,存在剂量一效应关系。吸烟、饮酒苯作业工人工明显高于对照组,而非吸烟以及非饮酒苯作业工人工、异常不显著。提示接触低浓度苯时,血小板相关抗体改变可能出现于外周血常规异常以前,免疫破坏是苯中毒患者单纯血小板减少的可能机制,吸烟、饮酒等因素可能起到协同作用。为寻找一种新的苯血液毒性易感性标志物以及探讨苯血液毒性机制的新途径,本研究分别利用聚合酶链反应一限制性片段长度多态性分析和高分辨熔解曲线分析技术两种方法检测例正常对照组和例苯作业工人的基因多态性,并对苯作业工人中携带不同基因型个体的白细胞计数进行比较。对照组基因型,基因型,基因型接触组基因型,基因型,基因型,两组差异无统计学意义户。接触组基因型士,基因型士,前者明显低于后者产。与一检测结论一致,前者比后者易于操作、价格便宜。关键词苯职业性苯中毒诊断标准血小板相关抗体多药耐药一糖蛋白基因多态性限制性片段长度多态性分析高分辨熔解曲线分析 苯作业工人职业流行病学研究及基因多态性对白细胞计数的影响硕士学位论文即《》一,,,、、,斤。,即,、、、、、一、,、,一、一办,,,一,,,,,,,赞 苯作业工人职业流行病学研究及基因多态性对白细胞计数的影响硕士学位论文即士伍伍翻邓,士一,一一犷 苯作业工人职业流行病学研究及基因多态性对白细胞计数的影响硕士学位论文目叮舀苯分子式一一,存在于原油中,广泛应用于石油化工,是油、脂、橡胶、油漆、氯丁橡胶的良好溶剂及稀薄剂,也是苯乙烯、苯酚、合成洗涤剂、合成染料、化肥、炸药及农药等制造行业的原料。苯是常见的环境污染源,汽油中含有一定比例的苯,燃料、烟草、木材、木炭等燃烧副产物中也存在苯或其活性代谢产物。职业性苯中毒是常见的职业病之一,急性苯中毒主要累及中枢神经系统,慢性苯中毒主要累及造血系统。年由卫生部颁布了《职业性苯中毒诊断标准一》,该标准对急、慢性职业性苯中毒的诊断和处理起到了指导作用。既往认为慢性苯中毒早期以白细胞计数持续降低为主,《职业性苯中毒诊断标准》一中以白细胞或中性粒细胞减少为诊断的起点指标,但是临床中存在外周血单纯血小板计数减少的慢性苯中毒病例'】,如果应用一进行诊断,这部分单纯血小板下降的病例不能诊断为苯中毒,劳动者得不到应有的保护,因此有必要对该标准进行修订。在《职业性苯中毒诊断标准》一的修订过程中,课题组增加了单纯血小板下降作为诊断的起点指标,使既往诊断困难的单纯血小板减少的慢性苯中毒病例诊断有法可依,达到了保护劳动者的目的。为《职业性苯中毒诊断标准》的修订进一步提供依据,需进行职业流行病学研究,观察苯作业人群的血常规、尤其是血小板的变化规律而且慢性苯中毒中单纯血小板下降的机制目前尚不明确,虽然部分病例伴有血小板相关抗体升高,提示免疫破坏在其中的作用,但病例数量较少,结果外推困难,也需要职业流行病学研究的结果进一步论证。目前认为,苯的毒性主要由苯的活性代谢产物所致,苯的代谢产物通过氧化应激、加合、干扰细胞周期调控、诱导凋亡等途径导致骨髓造血细胞损伤、断裂、骨髓造血微环境破坏,并发生一系列血液系统疾病降。苯在体内的代谢途径如图所示,苯经肝脏细胞色素氧化酶生成苯的环氧化物,环氧化物经非酶重排形成苯酚,苯酚经氧化生成氢酮、儿茶酚、苯三醇,这些代谢中间产物经血液到达骨髓后,经髓过氧化物酶氧化生成毒性更大的苯醒,经还原型辅酶工醒氧化还原酶解毒,还原成毒性较低的二醇,苯的双轻基、三轻基化合物还可以经苯酚硫转移酶 苯作业工人职业流行病学研究及基因多态性对白细胞计数的影响硕士学位论文、尿昔一葡萄糖醛酸转移酶作用,谷胧甘肤琉基转移酶,分别与硫酸或葡萄糖醛酸结合,以硫酸盐或葡萄糖醛酸衍生物、谷肤甘肤结合物的形式从尿中排出苯的环氧化物经环氧化物水解酶代谢生成苯的二氢二醇,再经二氢二醇脱氢酶作用生成苯的环氧化物经催化生成开环产物反式,反式一粘康醛,再进一步转化成反式,反式一粘康酸,一,或经生成苯硫醇尿酸,,一和均从尿中排出少量苯以原型从尿中排出卜。苯代谢过程中关键酶的活性对苯的血液系统毒性有一定影响,具有高活性、、的个体催患苯中毒的风险增高,、、属于相代谢酶,催化外源化合物经工相代谢酶生成的中间产物与内源性强极性物质如谷肤甘肤,葡萄糖醛酸,硫酸结合,有利于从尿中或胆汁中排出,、、活性增高苯中毒风险降低件`'。除此之外,香烟烟雾中含有一定量的苯,吸烟人群尿中苯的生物标志物排出增多【`,苯的酒精通过诱导活性以及减缓尿中,一等代谢物的排泄增强苯的骨髓毒性【”。苯卜一一卡直接以原型从尿中排出随尿液排出丁△占…勺乙月︼︵苯硫醇尿酸一苯的环氧化物一一一一一卜,一粘糠醛一一一一锐,一粘糠酸吧白口一发闷住匕咬化一、︺︵灯旧醇脱氢酶氢酉昆一一一一一一一一一州卜苯三醇剑研川硫酸盐△`葡萄糖试谷胧甘肤结合物一苯酉昆一一轻基一…,一苯醒一苯醒随胆汁或尿液排出图苯在体内的代谢途径 苯作业工人职业流行病学研究及基因多态性对白细胞计数的影响硕士学位论文年等首次提出多药耐药,的概念,指细胞同时对多种结构及作用机制不同的药物发生交叉耐药的现象【',基因过度表达产生大量的能量依赖性蛋白一一糖蛋白一叩,一是多药耐药发生的重要原因,一在小肠上皮细胞、胆道微管细胞、肾脏近曲小管等许多具分泌、排泄功能的正常细胞和组织上表达,将细胞内或细胞膜上的物质泵出细胞,并分泌到肠道、胆汁和尿道,保护细胞免受损害',',骨髓造血干祖细胞一表达水平较低,因此骨髓对化疗药物敏感,化疗中易发生骨髓抑制口,'。一由人类基因编码,基因位于号染色体长臂,其号外显子的多态现象是汉族人常见的单核昔酸多态现象,可以影响一的表达,并干扰机体排泄外源性物质的能力,叭等报道基因型与基因型相比,一呈低水平表达。苯进入机体后,经相代谢酶作用以后极性增强,从胆汁或尿中排出,起到解毒的作用,、相当于骨髓造血干祖细胞的外源性物质,因此,我们在这里提出假设,基因型的个体小肠上皮细胞、胆道微管细胞、肾脏近曲小管、骨髓造血细胞的一可能呈低水平表达,导致机体外排苯硫醇尿酸、硫酸盐、葡萄糖贰、谷胧甘肤结合物的速率减缓,骨髓造血细胞外泵、的效率降低,最终使个体骨髓造血细胞对苯毒性代谢产物的敏感性不尽相同。我们拟利用职业流行病学和分子生物学方法探讨对苯作业人群血液毒性的影响。如果证实对苯血液系统毒性有一定影响,在岗前可以对该基因进行筛查,敏感者尽量不要从事苯作业岗位,达到保护劳动者的目的。聚合酶链反应一限制性片段长度多态性分析一法是研究基因突变和单核营酸基因多态性的经典方法,但是,限制性内切酶价格昂贵,不易获得,操作过程中反复开盖,易致污染,前后需电泳次,费时费力。近年来,高分辨熔解曲线分析成为研究基因突变或的新方法,它不需要产物后续操作、能简单灵敏地区分不同突变位点与不同基因型,的原理是实时监测升温过程中双链荧光染料与扩增产物的结合情况并进行分析,例如,杂合子双链位点不匹配,因此双链在升温过程中会先解开,荧光染料从局部解链的分子上释放,从荧光强度与时间曲线、熔解曲线的峰型上可以判断是否存在,因此分析能够有效区分不同位点与不同基因型,'。 苯作业工人职业流行病学研究及基因多态性对白细胞计数的影响硕士学位论文本课题的研究内容有两部分对苯作业工人进行职业流行病学研究,获得历年作业场所空气检测苯浓度,评估工人苯接触水平,检测工人血常规和血小板相关抗体工、工、,观察在该接触水平下苯作业工人的外周血象及血小板抗体的变化规律,为《职业性苯中毒诊断标准》修订提供依据利用一和,研究对苯作业工人外周血白细胞计数的影响,寻找一种新的苯血液毒性易感性标志物以及探讨苯血液毒性的一种新途径。在本课题研究基础上,对《职业性苯中毒诊断标准》一中的部分内容进行修订,撰写了职业性苯中毒诊断标准一的编制说明,主要包括增加单纯血小板计数减少为诊断的起点指标、在附录中增加对苯接触工龄低于三个月的慢性苯中毒的说明等等。 苯作业工人职业流行病学研究及基因多态性对白细胞计数的影响硕士学位论文缩略语一览表英文缩写英文全称中文全称漫性苯中毒骨髓增生异常综合征再生障碍性贫血造血干细胞造血祖细胞一细胞色素氧化酶髓过氧化物酶酉昆氧化还原酶一一谷肤甘肤一转移酶一一酚硫转移酶坤妙氢酮苯酉昆短时间接触浓度血小板相关抗体酶联免疫吸附法多药耐药一一一糖蛋白单核普酸多态性聚合酶链反应限制性片度长度多态性澳乙锭一高分辨率熔解曲线分析 苯作业工人职业流行病学研究及基因多态性对白细胞计数的影响硕士学位论文第一部分苯作业工人职业流行病学研究年由卫生部颁布了《职业性苯中毒诊断标准》一,近年来该标准某些方面已不能适应一些苯中毒的临床特点,有必要重新进行修订,既往认为慢性苯中毒早期以白细胞计数持续降低为主,据报道苯中毒患者可表现为外周血单纯血小板计数减少,由于一中以白细胞或中性粒细胞减少为诊断起点,因此单纯血小板下降患者诊断有一定困难而且单纯血小板下降的机制目前尚不明确,虽然部分病例伴有血小板相关抗体升高,免疫功能紊乱可能是苯中毒患者血小板下降的原因,但这部分病例数量较少,缺乏大规模职业流行病学调查的依据,结果外推困难。为了给《职业性苯中毒诊断标准》修订提供临床依据,本文以某石化企业为研究现场,对苯作业工人进行职业流行病学调查,内容包括分析历年作业场所苯浓度资料,评估工人苯接触水平,统一问卷调查,检测血常规和血小板相关抗体以工,探讨该接触水平下苯作业工人血常规和工的变化规律。对象与方法仪器和试剂离心机,恒温水浴锅,超低温冰箱,微量移液器,酶标仪。血小板相关抗体试剂盒购自上海太阳生物技术有限公司,使用前一℃冷藏保存。研究对象选择某石化企业下属炼油化工车间为研究现场,该车间始建于上世纪年代。选择该企业主要接触毒物为苯的名工人作为调查对象,同时选择名健康人群为对照组,对照组人群与接触组人群生活在同一地区,生活环境、经济条件基本相似,均无接触有毒有害因素的作业史。苯作业工人除接触苯,不接触其他有毒有害物质。问卷调查 苯作业工人职业流行病学研究及基因多态性对白细胞计数的影响硕士学位论文采用统一的调查问卷,由研究设计者及统一培训的职业体检工作人员于该厂工人进行职业体检时给予问卷调查,经知情同意后,逐项询问问卷内容,获得调查对象的一般人口统计学指标姓名、出生日期、性别、民族、家庭地址、文化程度、身高、体重、职业史工厂名称、车间、工种、苯作业起始时间、防护情况、工作的主要任务、家族史父母或兄弟姐妹是否患白血病、淋巴瘤、再生障碍性贫血、骨髓增生异常综合征及其他肿瘤、既往史传染病史、输血史、血液系统疾病史、自身免疫系统疾病史、用药史氯霉素、磺胺药、抗结核药等、线接触史、吸烟史、饮酒史等资料。其中既往患血液系统、自身免疫系统疾病和传染病者均予以剔除,既往服用药物,如氯霉素、磺胺药、苯妥英、秋水仙碱、环磷酞胺、他巴哇、丙硫氧嚓陡、抗结核药物、、伯氯喳、雷公藤、含铅或砷类中成药等,总计超过个月者均予以剔除。每日至少吸烟一支,至少持续一年,被认为是吸烟。每周饮用至少个标准当量酒精个标准当量酒精等于克酒精,或啤酒,白酒,米酒,葡萄酒超过六个月被认为是饮酒。作业场所空气中的苯浓度本次研究收集了该厂自年月至年月各装置苯定点采样的全部浓度资料,平均每月采样一次,共个数据。车间空气苯浓度由厂方的安全和环境保护部根据国家标准进行定点和定时测定,均为短期接触浓度。其中重整装置设一一个点、环丁矾抽提装置设一、一、一三个点,吗吠琳抽提装置设一、一与一之间二个点,歧化异构化装置设一一个点,分析方法为热解析气相色谱分析。血常规及测定空腹采血选在该公司职业病体检当日进行,于上午一经静脉抽取血液,一狡抗凝后,在一血细胞测定仪上测定血常规各参数。另用离心管抽取静脉血,一抗凝后,利用法对血小板相关抗体、、进行检测,具体步骤参见试剂说明,每个抗体的酶标包被板都做两条标准曲线,取其平均值。 苯作业工人职业流行病学研究及基因多态性对白细胞计数的影响硕士学位论文统计学方法所有项目通过编码并认真核对后录入计算机,问卷资料采用软件进行分析,对计量指标进行正态性检验,不符合正态分布对数据进行对数转换,再利用两组独立样本的检验、单因素方差分析或法检验均数对计数指标进行卡方检验对数据进行多因素方差分析和一元线形相关分析。结果生产工艺流程经现场调查后发现,该企业以原油为原料,经重整、抽提、歧化异构化生成二甲苯,抽提溶剂包括环丁矾和吗吠琳,工人在重整、环丁矾抽提、吗吠琳抽提、岐化异构化装置可接触到释放到空气中的苯,工人主要通过呼吸道吸收苯,不通过皮肤吸收见图一。苯△,甲△△今,减饱局原压柴不月旨口芳香度纯苯甲油油目肪烃目芳闷烃烃图一炼油化工车间主要工艺流程示意图炼油化工车间各装置平均接苯浓度炼油化工车间近年的空气苯浓度测定值为一巧中位数,其中的测定值高于年之后国家制定的卫生标准。每一个装置近年空气苯浓度均呈正态分布,因此取各装置近年苯浓度的算术平均数作为各装置平均接苯浓度,依次为,重整装置,环丁矾抽提装置,岐化异构化装置, 苯作业工人职业流行病学研究及基因多态性对白细胞计数的影响硕士学位论文吗吠琳抽提装置尸,由表一可见,各装置月接触苯浓度经比较差异无统计学意义尸。表一一年各装置平均接苯浓度留装置浓度又士重整士环丁矾抽提士岐化异构化士吗吠琳抽提士苯作业工人累积接苯浓度估算累积接苯浓度以平均接苯浓度与苯作业工龄的乘积表示,接触组苯作业工人累积接苯浓度为一,中位数。按照累积接苯浓度将接触组分为组,扩,共人,列为低浓度组一,,共人,列为中浓度组妻,共人,列为高浓度组。调查对象的基本情况此次调查共获得有效问卷份,其中接触组份,对照组份,获得两组人员的基本情况。由表一可见,两组人员在年龄、性别构成、民族、体重指数、吸烟、饮酒、输血史、既往史、家族史等方面,经比较差异无显著性尸,在文化程度方面差异非常显著尸,接触组的学历以高中中专为主,对照组以本科大专为主。在吸烟状况的调查中发现,两组人员虽然在吸烟构成比、每日烟量、吸烟开始年龄、吸烟年支方面差异不明显。 苯作业工人职业流行病学研究及基因多态性对白细胞计数的影响硕士学位论文表一调查对象的基本情况对照组接触组基本情况值年龄士士士性别男女民族汉族少数民族文化程度'初中小学高中中专︸日︸︵︸叶月︶气卜钊户钊了」︸本科大专体重指数士士肚饮酒状况饮酒人数非饮酒人数夕吸烟状况吸烟人数非吸烟人数,每日烟量支士士士乙厂开始吸烟年龄士士士吸烟年数士士士吸烟年支输血史有输血史无输血史既往史有既往史,,无既往史家族史有家族史无家族史注经行列卡方检验,接触组与对照组比较,两组人群血常规、比较 苯作业工人职业流行病学研究及基因多态性对白细胞计数的影响硕士学位论文由表一可见,接触组、、与对照组差异无统计学意义,接触组、、显著高于对照组。两组人群异常检出率比较、、正常值分别为。一岁、一留、一酬,高于上述正常值定义为异常,计数两组人员异常的人数,与两组人数的比值定义为异常检出率。由表一可见,接触组异常检出率显著高于对照组,、队异常检出率差异无统计学意义。吸烟分层后两组人群血常规、比较由表一可见,经吸烟分层以后,吸烟人群中,接触组、、与对照组差异不显著,、、显著高于对照组尸,非吸烟人群中,接触组与对照组相比,、、、、、差异均无统计学意义。饮酒分层后两组人群血常规、比较由表一可见,经饮酒分层以后,饮酒人群中,接触组、、与对照组差异无统计学意义,、、显著高于对照组。非饮酒人群中,接触组显著高于对照组,、、、、差异无统计学意义。不同累积接苯浓度血常规、队比较按不同累积接苯浓度分组,进一步对血常规、进行比较,由表一可见,随累积接苯浓度增加,、、、差异无统计学意义,、有上升趋势,中浓度组高于对照组,差异有统计学意义高浓度组,中、高浓度组明显高于对照组,差异非常显著尸。此外,中浓度组高于低浓度组,差异有统计学意义尸高浓度组、中、高浓度组明显高于低浓度组,差异非常显著尸。 苯作业工人职业流行病学研究及基因多态性对白细胞计数的影响硕士学位论文不同装置血常规、比较由表一可见,各装置的、、、经比较差异无统计学意义。吸烟、饮酒、累积接苯浓度对接触组的影响由表一可见,吸烟、饮酒对、的影响无统计学意义,对的影响非常显著累积接苯浓度对队、的影响有统计学意义,对的影响无统计学意义。接触组队与的相关性由表一可见,接触组、、队与的相关性无统计学意义。 卿山国侧︵︶寸洲仍工寸曰洲叭哟洲凶卿州侧山︵︶洲寸寸洲锌担拓眯泪层卿惑彰翁掌或。﹄岁︵︶罗州工︵︶白口卿山侧︵︶的叭﹀凶桃娜并理征眯袱易窿五书粥卿之,工袅拓林袱易波娜粥五侧卿之,工侧德的叫﹀并理习拓欧侧卿惑罗洲工︵︶岁工的闪︵︶树润泪攀补日内担奸翻娜兰翩友、期划眨火”臼日臼工︵︶。价凶寸内洲的寸担娜五翩钾翻禽恃耸侧冷豁腹绷坦翌、卜”卜凶兴举长侧伙俱华缤侧扑哥涛日扭友塑报姚溯侧督名绷牡型界困缺签工名锌担拓眯书卿惑日。罗寸工的︵︶岁闪工︵︶怕洲工洲仍凶洲仍凶洲哟寸洲价的工洲乞妙之日工山渗︵︶。日洲洲工洲凶工内洲的洲的寸翻常斟篡擎翩联吹﹃洲工洲凶工翻禽翌嘿擎盛侧绷吹﹃ 卿侧山岑︵︶寸凶的凶工洲的哟工卜哟寸卜囚价工卜仍寸工洲卜的仍凶10内蕊工︿︶卜乞凶离价卜寸的卜洲卜洲工哟仍令恃耸侧娜期坦卯翻担娜五易衡眨窿戴日掌或口武气。﹀、“叭卜”能众粤粥拓吠翻峻噢彭暇昌窿娜五,工侧白回助尸口卿衬国︵︶闪寸卜心卜蔑袄甘、心尸叫尸叫尸叫,叫洲润扑书划肾囚卜旧工的帅旧工闪寸闪的旧寸工谕闷二国︵︶洲的寸漪琴埠袱侧识俱华侧哥毒外日划袍姚期扭有囚侧戴卞契界督名缺工名芝乞江日工口莽山工口︵︶口︵︶。囚闪旧的囚的寸工寸囚的工的卜卜寸的洲的仍寸洲州寸闪洲洲的哟寸价洲的卜寸卜凶寸了、、、、称粤皿价袱多粤髓袱目翻禽眨擎晨易盛衡眨硬擎易侧易吹︸ 层卿蔑︵︶的价卜洲的卜凶洲内寸寸内工州凶州洲的工价怕寸刹试兽惑︵从︶卜冈肉价洲认卜工洲卜工的卜的寸寸彰写军喊娜武五翻友钾爱翻理气恃耸侧髯令腹绷坦。﹀﹄”卜。咨娜缺兰暇征裤袱翩创窿饵噢余彭卿卸粥之冲工口白︿︶兽叫目洲工卜心价们心叼、心甲州尸叫,叫,叫拟润划扑书层寸的旧工旧卜寸囚卜洲寸的帅洲囚帅洲妞︿︶切洲内凶但氧罐名卞蜜界扭友坦换临囚溯。,旧寸闪寸的工卜洲寸州旧闪囚的闪荆闪工寸洲臼日工口︵︶。的价乞日工口国莽︵︶卜洲价寸洲内洲闪洲闪州洲的洲工寸内国皇伙扑毒嘿华娓长侧刽举兴爵侧日厂卜厂寸闪亡闷叱卜髓袱鄂矛监下髓只肆群翩翌留蜘侧硬泌洲翌衡洲侧暇鞭某盛 芝卿侧川︵︶护叼口泊丘卜护司寸日喻哟价寸洲工洲凶工哟怕凶卜骊象拿代司口叫﹀。司闪寸凶的叭下司门买凶卿惑州︿︶工寸的洲的洲司的叫﹀叭兴华岭粥娜五彩回袅密侧说呱班昌卜燕回侧助`尹臼斗惑日工臼︵︶。绷洲坦鉴求板泪坦之却翻多娜翻禽喇娜五翻啊林尊钾五蟹巴言重气叭﹃﹀”凶凶洲闪的尸叫寸工洲、以二,叫,叫润划扑书冷袱的闪帅寸的闪旧寸帅旧寸卜价洲州凶寸旧寸仍举特代侧蝗伙扑嘿华侧爵毒日掣徽憾斓喇恤友囚界督名戴卞裂碳名自芝工价闪叫叭工洲怕凶洲洲的卜寸工的凶闪的叭工洲寸洲的卜哟工卜乞闷日工国莽︵︶侧。凶卜洲价洲闪价的喃洲洲闪的价价洲叭内寸洲内卜甲叫二字寸寸侧袋盛困︸于侧袋翻框侧易袋某盛翻禽醚裂擎易叭气 层卿侧山︵︶价工怕卜晒闪的闪工仍的卜价卜的工的价闪哟工凶寸价八山蕊工︶洲卜寸卜仍闪价的寸卜洲闪叭卜叭闪价内闪卜白卿氏吮︵﹀山洲价凶卜粥郊娜五翩晨回岭骥捉名侧啊叩工目砚助“叼、寸叼、厂】、卜叮、了划扑书侧日润寸工洲叭洲洲闪卜寸工卜凶洲闪洲卜仍卜的工价的工的喃洲卜锰刀国︵︶卜哟闪卜的兴举袱侧娓伙扑壤荤侧哥毒日箱姚囚溯喇塑戴姐衡名卞理界督鹉层工国乞巴八日匕日工莽工︵﹀日︶。寸旧囚闪卜工闪旧寸囚的寸闪旧的卜寸洲仍卜的洲价卜的凶的洲凶价洲闪叼、价怕写闪】、寸闪门闪骥卑落卜险霉眯牟瞥翠骥早普誉雪翻吹﹃渊侧 苯作业工人职业流行病学研究及基因多态性对白细胞计数的影响硕士学位论文表一吸烟、饮酒、累积接苯浓度对接触组的影响影响因素观察值吸烟饮酒累积接苯浓度分组月,剐一注连`︸卜︵︸勺二一日厂,︸耐…'”注经多因素方差分析,,尸表一接触组与的相关性因变量尸一一 苯作业工人职业流行病学研究及基因多态性对白细胞计数的影响硕士学位论文讨论为了使单纯血小板下降的慢性苯中毒诊断有法可依,《职业性苯中毒诊断标准一》中增加了单纯血小板下降为诊断的起点指标。关于患者单纯血小板下降的机制目前尚无定论,据报道当作业环境中苯浓度达时,短期接触可致苯中毒,出现血小板相关抗体升高,介导血小板被吞噬细胞破坏,杀伤致敏血小板,并引起单纯血小板下降,提示免疫破坏在苯中毒所致血细胞减少中的重要作用,也可以解释一修订的内容,但是该报道病例数较少,结论外推需慎重。因此本研究对苯作业人群进行了职业流行病学研究,观察苯接触工人的血常规和血小板相关抗体的变化规律,为诊断标准的修订以及机制探讨提供流行病学依据,达到保护劳动者的目的。苯在体内经氧化生成苯的多轻基化合物,再经髓过氧化物酶氧化生成毒性更大的苯酮,大量流行病学调查支持长期接触苯可致、、、、下降,甚至再生障碍性贫血、骨髓增生异常综合征、白血病,但是本组研究对象与对照组相比,外周血、、差异无统计学意义,可能的原因有两点国有企业健康监护工作相对完善,一旦出现血常规异常达到观察对象的程度,即被调离苯作业岗位,造成一定程度偏倚苯接触水平相对低,作业环境中苯浓度一巧,个体累积接苯浓度一,,在低水平苯接触条件下,却出现血小板相关抗体异常,包括、、升高,队异常检出率增高,随累积接苯浓度增加,、队有升高趋势,存在剂量一效应关系。提示,免疫功能紊乱、自身抗体形成可能出现于外周血常规异常以前,如果累积接苯浓度进一步增加,队水平进一步增高,可能会导致大量作用于血小板糖蛋白,单核一吞噬细胞吞噬增加,血小板破坏加速并引起下降。血小板相关抗体是由机体对血小板表面抗原产生的自身抗体,多数是由依赖辅助性细胞的淋巴细胞活化生成,病毒作为半抗原,可以与某些血小板糖蛋白结合形成抗原,是特发性血小板减少性紫瘫发生的机制之一。免疫毒性是苯慢性毒作用之一,苯染毒小鼠脾脏淋巴细胞增生,苯作业工人血清免疫球蛋白工、、工增高,外周血细胞减少,勺比例下降,提示存在体液免疫和细胞免疫异常一。近年来,许多学者发现,苯 苯作业工人职业流行病学研究及基因多态性对白细胞计数的影响硕士学位论文的活性代谢产物、苯酮,不仅是苯血液毒性的“元凶”,还是强烈的半抗原,通过抑制辅助细胞生成干扰素工一,来增强机体对介导的抗原抗体反应,苯作业工人、的特异性抗体水平增高,并存在剂量效应关系,。因此,是否可以提出假设,苯吸收入人体以后,经、等相代谢酶转化为活性代谢产物,同时作为强烈半抗原,在机体内与血小板糖蛋白结合,并刺激工产生。本研究中,与、体重指数、累计接触剂量等因素无明显相关,可能由于包括种成分真正的抗血小板抗体,循环免疫复合物,非特异性吸附于血小板表面的血浆免疫球蛋白,因此灵敏度相对高,特异性相对低,针对血小板膜糖蛋白或的抗体特异性相对高,今后可进一步研究。既往研究发现,香烟烟雾中含有苯的活性代谢产物氢醒,酒精是肝脏细胞色素氧化酶的诱导剂,吸烟、饮酒对慢性苯中毒发生有协同作用,,本研究发现吸烟、饮酒苯作业工人明显高于对照组,而非吸烟工人以及非饮酒苯作业工人、异常不显著。在本研究中,由于异常主要存在于吸烟、饮酒人群中,为了明确这种异常是源于苯接触还是生活方式,我们以吸烟、饮酒、累积接苯浓度为影响因素,对接触组进行了多因素方差分析,结果提示累积接苯浓度对、队有影响、吸烟、饮酒对队有影响,对无影响三种因素对均无影响。提示吸烟、饮酒等混杂因素对苯所致异常可能存在协同作用。苯造血系统毒性机制复杂,涉及免疫功能紊乱、氧化应激、损伤、细胞周期调控异常、骨髓造血微环境改变、程序性细胞死亡等多种途径降,至今为止,苯血液系统毒性机制尚未完全阐明,本文通过职业流行病学研究发现,异常可能是苯血液毒性的早期表现之一,而对苯作业工人,除了控制作业环境中的苯浓度,改变吸烟、饮酒等生活方式也至关重要。 苯作业工人职业流行病学研究及基因多态性对白细胞计数的影响硕士学位论文小结本组研究对象苯接触水平相对低,作业环境中苯浓度一巧,,个体累积接苯浓度一,。接触组与对照组相比,外周血、、差异无统计学意义。职业接触苯工人血小板相关抗体、、升高,异常检出率增高,随累积接苯浓度增加,、有升高趋势,存在剂量一效应关系。吸烟、饮酒苯作业工人工明显高于对照组,而非吸烟以及非饮酒苯作业工人工、工异常不显著。经多因素方差分析,提示累积接苯浓度对、有影响、尸吸烟、饮酒对有影响尸,对无影响三种因素对均无影响。提示吸烟、饮酒等混杂因素对苯所致异常可能存在协同作用。与无明显相关。 苯作业工人职业流行病学研究及基因多态性对白细胞计数的影响硕士学位论文第二部分基因多态性对苯作业工人外周血白细胞计数的影响年,首次报道多药耐药现象,由基因编码的一糖蛋白一依赖供能将进入胞内的药物泵至胞外,是发生的重要原因〕,除了药物以外,进入细胞内的异源物质杀虫剂、致癌物、毒性代谢产物等也可以被一泵出,以维持机体稳定,一表达水平的高低影响外源性物质被机体清除的效率,。苯进入机体后,经相代谢酶作用以后极性增强,从胆汁或尿中排出,未及时排泄的苯代谢产物则经血液循环到达骨髓,通过氧化应激、加合等方式对抗原标记的造血干祖细胞产生一系列毒作用,骨髓细胞一表达水平低、阳性率仅士,为苯血液系统毒性的发生提供了生理学基础。一的表达水平受其编码基因基因的单核普酸多态现象所影响,目前己知的有种,其中是汉族人常见的,,基因型与基因型相比,一呈低水平表达【'。从理论上来讲,基因型的个体小肠上皮细胞、胆道微管细胞、近曲小管、骨髓造血细胞的一可能呈低水平表达,导致机体外排苯代谢产物的速率减缓,骨髓造血细胞外泵、的效率降低,最终使个体骨髓造血细胞对苯毒性代谢产物的敏感性不尽相同。为证实我们的假设,本研究利用职业流行病学和分子生物学方法探讨对苯作业人群血液毒性的影响。聚合酶链反应一限制性片段长度多态性分析一法是检测的传统方法,高分辨率熔解曲线是近年来发展起来一种新技术,通过实时监测升温过程中双链荧光染料与扩增产物的结合情况,从荧光强度与时间曲线、峰型上判断是否存在,能够有效区分不同位点与不同基因型,具高特异胜和高灵敏度,“'。本研究分别应用一、两种方法检测在苯作业工人中的分布,并对两种方法进行比较。对象和方法研究对象具体参见第二部分 苯作业工人职业流行病学研究及基因多态性对白细胞计数的影响硕士学位论文经职业健康体检后,根据《职业性苯中毒诊断标准》,接触组中有人被诊断为职业性慢性苯中毒或苯作业观察对象,列为白细胞低值波动组,其余人列为白细胞计数正常组。仪器离心机,电子天平,酸度计,恒温水浴锅,超低温冰箱,紫外分光光度仪一公司,水平电泳仪及几一凝胶成像分析系统上海天能科技有限公司,微量移液器,上海天呈科技有限公司,比公司。试剂琼脂糖,,澳乙锭购于上海生工生物工程中心血液基因组提取系统一购自生化公司酶,,购自生物工程公司限制性内切酶购自生物技术有限公司饱和荧光染料购自公司。抗凝血提取具体步骤参加试剂说明。一检测根据文献,由上海生工生物技术有限公司合成引物,上游,下游。反应体系包括酶,。含`,,上、下游引物各,模板,然后加入双蒸水补齐至协。反应条件预变性后,、、,共循环次,最后再℃延伸。取产物加入琼脂糖凝胶电泳负极端的加样孔,以澳酚蓝为指示剂,为染色剂,在电压下电泳,紫外线灯下观察带型。取产物,加入限制性内切酶,,然后加入双蒸水补齐至,水浴过夜进行酶切反应。酶切后取酶切产物加入琼脂糖凝胶电泳染色,观察带型。限制性内切酶的订购需提前周,费用昂贵,每个样本一元,由于两次电泳、反复开盖,容易出现阴性对照被目的片段污染,影响实验结果,导致实 苯作业工人职业流行病学研究及基因多态性对白细胞计数的影响硕士学位论文验失败,需要重新进行。两次电泳,实验人员接触诱变剂的几率增加一倍。测序验证随机抽取产物送华大生物公司进行测序,每个样本测序费用在一元勺检测随机抽取样本进行分析,每次进行时,均包含通过测序已明确序列的种基因型样本作为标准。分析产物适宜长度为一,产物长度超过时,过长的双链可能包含多个,影响熔解曲线的解读。因此根据文献重新合成引物,上游,下游。反应体系包括酶,火。含,`,咖,上、下游引物各,模板,然后加入双蒸水补齐至。反应条件预变性后,、℃、,共循环次,最后再延伸。产物长度为,产物加入染料,利用仪器,条件,,再从℃开始,以℃的斜率采集熔解曲线,到℃结束,用。软件对采集后的曲线进行分析。操作过程中不需要反复开盖,阴性对照被污染的几率远低于。统计学方法所有项目通过编码并认真核对后录入计算机,采用软件进行分析,对计量指标进行正态性检验,再进行两组独立样本的检验对计数指标进行卡方检验。对数据进行多因素方差分析。结果研究对象的基本情况具体参见第二部分、、测序的比较由表一可见,费用昂贵,试剂订购不易,前后需电泳次,一方面增加污染的机会,一方面接触的几率增加,酶切往往需要过夜,实验时间明显延长。而只要在电泳以后进行熔解曲线采集,就可以判断基因型。 苯作业工人职业流行病学研究及基因多态性对白细胞计数的影响硕士学位论文但是对产物的长度要求高于,这是设计引物时需要注意的。测序当然是明确基因型的金标准,但是费用昂贵,可以随机抽取少量样本,辅助其他方法对实验结果进行印证。表一一和的特点比较方法以后的价格电泳酶切产物结果的试剂订购次数过夜长度可靠性不易限制昂贵需要要求不高相对可靠性内切酶容易便宜不需要相对可靠测序无需订购最昂贵不需要要求不高金标准产物及酶切后电泳结果由图一可见,经琼脂糖凝胶电泳,、、、泳道均可见长度为的产物。的片段由于基因突变而产生或失去了一个特异性内切酶的酶切位点,使得酶切产物的片段发生改变,限制性内切酶识别位点为',因此型产生,的片段型不被酶切仍是杂合子型则产生,,的片段。由图一可见,经琼脂糖凝胶电泳,泳道见、条带,提示基因型为、、、泳道见、、条带,提示基因型为泳道见条带,提示基因型为。图一基因产物 苯作业人职业流行病学研究及基因多态性对白细胞计数的影响硕士学位论文图一酶切后电泳结果测序结果经测序证实酶切前产物为,同时证实位点存在型、型、型种基因型,具体参见图一。测序结果与一检测的基因型达到一致。七屯月“”“`日二”“日砚“注左图中图右图图一苯作业工人典型测序结果结果通过熔解曲线的图形可以区分的不同基因型见图一。由可见,基因型的曲线形状与基因型基本相同,由于间热稳定性低于,基因型熔解温度低于后者,杂合子曲线形状与纯合子不同,下降温度变化范围广,由于突变位点不匹配会导致双链在升温过程先解开,杂合子熔解温度低于纯合子。此外,由可见,的值大于的值约℃,也便于区分和基因型,杂合子则表现为双峰。随机抽取的样本经分析后与 硕士学位论文鲤燮鱼些翌鲤堕检测的基因型一致。,留。﹂﹄三﹄眺既解跳沮度℃原始的熔解曲线图,方﹄司山`再八诵'︶卜﹂﹃“已“︸叫以吐`一一一薪荔百丽下丽而`“`““'`望眨臼目石供麟念退度℃熔解曲线衍生图图一高分辨率熔解曲线示意图对苯作业工人的影响由表一可见,对照组,,, 苯作业工人职业流行病学研究及基因多态性对白细胞计数的影响硕士学位论文接触组,,,各基因型分布差异无统计学意义户。由表一可见,苯作业工人中,白细胞低值波动组和白细胞计数正常组各基因型分布差异无统计学意义户。表一对照组和接触组分布组别尸对照组接触组表一白细胞低值波动组和白细胞计数正常组分布组别白细胞低值波动组白细胞计数正常组对苯作业工人的影响由表一、表一可见,接触组、、基因型差异无统计学意义。考察基因型的分布频率,基因型与非基因型相比,外周血明显下降,差异有统计学意义户。表一接触组不同基因型匕较基因型几尸士士士表一接触组非与基因型匕较基因型仇,︸伪乙勺了士士注经两个独立样本检验,与组比较,尸 苯作业工人职业流行病学研究及基因多态性对白细胞计数的影响硕士学位论文接触组外周血白细胞计数的多因素分析通过多因素方差分析,探讨吸烟、饮酒、累积接触剂量分组、以及非基因型对接触组的影响,结果显示饮酒、累积接触剂量分组对应的八直分别为和,去除没有统计学意义的饮酒和累计接触剂量分组以后进一步进行多因素分析,由表一可见,吸烟、基因型对接触组的影响有统计学意义尸,。表一吸烟、饮酒、累积接苯浓度基因型对接触组的影响影响因素观察值吸烟饮酒累积接苯浓度分组基因型一注经多因素方差分析,,讨论本研究发现,在苯作业人群中,基因型与非基因型相比,白细胞计数明显下降二,通过多因素方差分析也明确了基因型对的影响非常明显尸。编码产物为一即,一是分子量为的跨膜糖蛋白,通过消耗将细胞内或细胞膜上的物质泵出并分泌到具排泄功能的组织和器官,以保护细胞免受损害'',基因位于人类染色体,由个外显子组成,己经确认的单核普酸多态现象超过个,其中位于外显子的是汉族人常见的。基因型表达无论是在水平还是在蛋白质水平均明显低于、基因型书,尚可影响一在细胞膜中的植入,从而改变底物与抑制剂相互作用位点的构象〕。苯的解毒途径中,涉及苯的多轻基活性代谢产物经苯酚硫转移酶、尿普一葡萄糖醛酸转移酶作用,谷肌甘肤琉基转移酶作用,与硫酸、葡萄糖醛酸或结谷肤甘肤结合,以硫酸盐或葡萄糖醛酸衍生物、谷胧甘肤结合物的形式从尿中排出,未被及时结合并排出体外的多经基化合物随血液抵达骨髓,生成苯醒,对骨髓造血细胞及微环境产生一系列毒性作用。本组苯作业人群携带基因型的个体,一方面可能由于一即在具排 苯作业工人职业流行病学研究及〕基因多态性对白细胞计数的影响硕士学位论文泄功能的组织如肾脏近曲小管上低水平表达,导致机体排泄不利,一方面在骨髓造血细胞的表达低于非基因型个体,引起造血细胞外泵、的效率低下,最终表现为个体对苯毒性代谢产物的敏感性不同,外周血白细胞计数因而受到影响。因此,携带基因型可能是慢性苯中毒的易感性基因,工人在岗前应加强对易感性基因的筛选。白细胞低值波动组和白细胞计数正常组中,分布差异无统计学意义,可能的原因是由于慢性苯中毒和苯作业观察对象的样本数量太少,今后需要继续搜集中毒病例,扩大样本进一步研究。本研究通过多因素方差分析发现吸烟对接触组有显著影响,由第一部分研究结果可知,本组研究对象苯接触水平相对低,作业环境中苯浓度一耐,个体累积接苯浓度一,香烟中除了含有苯的活性代谢产物,也含有苯,在低水平接触苯的环境中,吸烟对苯血液系统的影响可能相对增高,川,因此,苯作业人群应加强对吸烟等生活方式的控制。苯有蓄积效应,即使脱离接触,病情仍可能进一步恶化,慢性苯中毒无特殊解毒药,一旦发生、或白血病,预后差。有学者尝试用配型全相合的异基因外周血造血干细胞移植治疗苯中毒所致重型再生障碍性贫血,造血功能得以一定恢复,但配型、移植后并发症限制了。一的应用【,慢性苯中毒尤其是重度苯中毒的治疗仍在探索当中。近年来,许多学者以逆转录病毒为载体,将基因导入哺乳动物和人骨髓细胞,获得一的稳定表达,能增强骨髓细胞对化疗药物的耐受性并保护骨髓的造血功能。本研究发现,苯血液系统毒作用机制中可能涉及参与,在后续研究中,可以将基因转导入骨髓造血细胞,保护骨髓细胞免受苯及其代谢产物的毒作用,为苯中毒的治疗开辟新思路。一是研究基因突变和的经典方法,是近年来研究基因突变或的新方法,越来越多的文献证实与结合是医学上最为理想的诊断方法','“。本研究先后应用一和检测,并通过测序证实两种方法的可靠性。由于测序费用高,适用于验证其他实验方法的准确性。尺一操作过程中反复开盖,易出现空白管被目的条带污染,限制性内切酶价格昂贵, 苯作业工人职业流行病学研究及基因多态性对白细胞计数的影响硕士学位论文不易获得,而且前后需电泳次,酶切时间过夜,费时费力。不需要产物后续操作,通过加入饱和染料就能简单灵敏地区分不同基因型,而且价格低于一,更低于测序。值得注意的是,时产物片段不宜过长,过长的片段上可能携带多个位点,从而影响结果的特异性。 苯作业工人职业流行病学研究及基因多态性对白细胞计数的影响硕士学位论文小结接触组基因型士,非基因型士,前者明显低于后者。基因型对接触组有明显影响。基因型可能是慢性苯中毒的易感基因。白细胞低值波动组和白细胞计数正常组各基因型分布差异无统计学意义。在低浓度苯接触水平下,吸烟对接触组有显著影响。与一检测结论一致,前者比后者易于操作、价格便宜。 苯作业工人职业流行病学研究及基因多态性对白细胞计数的影响硕士学位论文总结本研究以石化企业职业苯作业工人为研究对象,采用职业流行病学方法观察苯作业工人的血常规和血小板相关抗体变化规律,为《职业性苯中毒诊断标准》一中增加单纯血小板减少为诊断的起点指标进一步提供流行病学依据并探讨单纯血小板减少的可能机制采用一和技术检测基因位点的单核普酸多态现象,并探讨对苯作业工人外周血白细胞计数的影响。首先,本研究探讨长期接触低浓度苯对血常规以及的影响,结果显示虽然苯作业工人、、与对照组差异无统计学意义,但血小板相关抗体、、增高,随累计接触剂量增加,地均有升高趋势,存在剂量一效应关系,吸烟、饮酒苯作业工人明显高于对照组,而非吸烟以及非饮酒苯作业工人、异常不显著。提示免疫功能紊乱、自身抗体形成可能出现于血常规异常以前,吸烟、饮酒对苯所致异常可能存在协同作用。随着的进一步升高,可能出现血小板破坏增多并表现为单纯血小板减少,因此,《职业性苯中毒诊断标准》一的颁布可以使单纯血小板减少的苯中毒病例避免漏诊,保护劳动者。其次,本研究分别采用一即和技术探讨多药耐药基因基因多态性对苯作业工人外周血白细胞计数的影响,应用卡方检验和检验分析不同基因型在两组人群中的分布以及接触组不同基因型的白细胞计数,结果显示两组人群不同基因型差异无统计学意义尸接触组基因型士又沉,非基因型士几,前者明显低于后者尸,吸烟对苯作业人群的有显著影响尸。一操作过程复杂,技术简单灵敏,而且价格低于前者。综上所述,在该石化企业现有生产和防护条件下,苯可能造成免疫功能紊乱、自身抗体形成,并对进一步引起免疫破坏性血小板减少提供基础。基因型苯作业工人外周血白细胞计数相对较低,,提示基因型可能是慢性苯中毒的易感性基因,岗前应加强对基因型的筛查。苯作业工人应控制吸烟等生活习惯。 苯作业工人职业流行病学研究及基因多态性对白细胞计数的影响硕士学位论文参考文献【孙道远,谢兰兰,张玲,等高浓度接苯工人血小板减少例的临床分析」中华劳动卫生职业病杂志,,一,,,,,一,,,【,,一【,,,,,一,,,一一,,一」,,,,,一【,,,,,一,研厄,,,一,一【,,【,一【,,,,, 苯作业工人职业流行病学研究及基因多态性对白细胞计数的影响硕士学位论文,,一川,一,,一,,一【,,,,,,一,,,一,,一」,形【,,一,,一,,一【,,一【」,匕,几,,,一【认值,,从厄,即,,一【,,,,一 苯作业工人职业流行病学研究及基因多态性对白细胞计数的影响硕士学位论文,,一,,,一,,,,一」,,,一诚一,,一」,,认值,,,,,,,一【,【,,一一,亡,,,一咚」马印图,李振奇,王全立血小板抗体检测技术进展中华检验医学杂志,,一陈嘉榆,余卫,刘薇薇,等长期苯作业工人外周血细胞亚群的变化特点【中华劳动卫生职业病杂志,,一,,一,,一【张红斌,张春燕,岳维,等接触苯、甲苯工人血清免疫球蛋白的变化及意义」中国实用医学,,一」,,,,【,,一,,,, 苯作业工人职业流行病学研究及基因多态性对白细胞计数的影响硕士学位论文,,一,,一,,一,,,一,,一,一一一勿勿,一,,一【一,如,一一【,一,,,勿一一,,一【曹文静,邹萍多药耐药基因在人骨髓细胞中的表达及对化疗药物的耐受性中华检验医学杂志,,一、妞,认,,【,,一一,职业性苯中毒诊断标准直,,一」,,一 苯作业工人职业流行病学研究及基因多态性对白细胞计数的影响硕士学位论文李芸,陈梓宏,李淑慧,等急性髓性白血病的多药耐药基因一基因多态性一即表达的相关性研究实用医学杂志,,一一,,兀,”,,「,,一肠,,耐,,一砰黄振倩,陈嘉榆,曹履先,等异基因外周血干细胞移植治疗苯中毒性再生障碍性贫血中华劳动卫生职业病杂志,,一,,几,们【,,一 苯作业工人职业流行病学研究及基因多态性对白细胞计数的影响硕士学位论文综述一《职业性苯中毒诊断标准》编制说明职业性苯中毒是常见的职业病之一,年由卫生部颁布了职业性苯中毒诊断标准》一,该标准对急、慢性职业性苯中毒的诊断和处理起到了指导作用。近年来,职业性苯中毒的报道明显增多,原标准的某些方面已不能适应一些苯中毒的临床特点,有必要对该标准进行修订。年月组成由复旦大学附属华山医院为牵头单位,上海市杨浦区中心医院、上海市职业病医院、上海市化工职业病防治院、上海市疾病预防控制中心、上海交通大学医学院附属新华医院参加的课题协作组,年月浙江省台州市中心医院、浙江省温岭市第一人民医院也加入到本协作组,共同承担《职业性苯中毒诊断标准》的修订工作。课题组对一年国内外公开报道的职业性苯中毒相关文献进行分析总结,收集了各协作单位的职业性苯中毒病例,结合课题组成员多年的临床经验,于年月起草了《职业性苯中毒诊断标准征求意见稿,在征询标委会专家意见的基础上,经过再次修改,形成送审稿。现对送审标准中修订的主要内容进行说明。适用范围本标准适用于各种职业活动中接触苯引起中毒的诊断和处理,如接触以苯为溶剂、稀薄剂的油、脂、橡胶、油漆、喷漆和氯丁橡胶,或者接触以苯为原料的苯乙烯、苯酚、合成洗涤剂、合成染料、化肥、炸药及农药等制造行业。职业性急性苯中毒一般由于意外事故,国内使用含苯建筑涂料做地基的防水处理,因通风不良、缺乏个人防护时,可发生急性中毒甚至致死慢性苯中毒见于长期苯接触或短期间多量重复接触时,尤其是某些皮鞋或箱包行业。非职业活动中的苯中毒亦可参考本标准。本次修订的主要内容强调“体征”对急性轻度苯中毒诊断的重要性急性轻度苯中毒的诊断标准中有许多主观性较强的症状,如头晕、头痛、恶心、呕吐等,如仅根据这些主观症状即诊断急性轻度苯中毒,势必造成“过度诊断”,因此在本标准中强调在诊断时应该具备烦躁不安、意识模糊等轻度意识障碍的体征,并在附录中加以说明。 苯作业工人职业流行病学研究及基因多态性对白细胞计数的影响硕士学位论文在急性重度苯中毒临床症状中,增加了“碎死”在职业病临床工作中,已发现在短期接触极高浓度的苯蒸气后,可以发生碎死〔`、,。为充分反应急性重度苯中毒严重性和危害性,在急性重度苯中毒的临床症状中加入了“碎死”这一临床表现,并在附录中加以说明,指出其诊断可参照职业性急性化学源性碎死诊断标准。因为碎死在急性重度苯中毒中并非多见和普遍的现象,故未单独列出。增加单纯血小板计数减少为诊断的起点指标增加的理由课题组收集了一年浙江省台州市职业性重度苯中毒例,其中例起病初期白细胞计数大于火,伴或不伴血红蛋白减少,根据一中白细胞计数或血红蛋白的标准,可列为观察对象,但例患者血小板计数波动于一护,例低于,临床以出血表现为主,如齿叔出血或皮肤癖点、癖斑,随访中例患者外周血逐渐出现三系下降,后经骨髓检查明确为再生障碍性贫血郝凤桐等报道,一名接触苯年的刷漆工,因牙酿出血查血常规见血小板计数,白细胞计数、血红蛋白均正常,后行骨穿提示骨髓增生异常综合征〔习高浓度接触苯也可导致免疫性血小板减少性紫瘫,外周血象表现为单纯血小板计数减少,血小板计数可低于,〔`〕。既往认为早期苯中毒以白细胞计数持续降低为主要表现〔·〕,一以白细胞计数减少作为诊断苯中毒起点指标,血小板计数波动于时为苯作业观察对象,白细胞计数低于或中性粒细胞低于伴血小板计数低于扩时为慢性中度苯中毒。但上述病例提示,临床中存在单纯血小板计数低于扩的苯中毒病例,按照现有的诊断标准,少部分以血小板为首发表现的苯中毒病人可能被漏诊。以血小板计数减少为诊断起点的分级标准孙道远等报道的例苯中毒致免疫性血小板减少性紫瘫患者中,血小板计数均低于,例低于又,,例波动于一,〔。本课题组收集的例台州市重度苯中毒病例中,例患者起病初期白细胞计数正常,血小板计数为一,其中例低于 苯作业工人职业流行病学研究及基因多态性对白细胞计数的影响硕士学位论文,例低于。血小板低于扩时可致内脏出血,其中颅内出血是致死的主要原因,但免疫性血小板减少性紫瘫经糖皮质激素、环抱霉素等免疫抑制剂治疗后预后良好〔,,有别于再生障碍性贫血、骨髓增生异常综合征或白血病的发病过程,因此将单纯血小板波动于一扩者列为轻度苯中毒,将白细胞计数低于或中性粒细胞低于、伴血小板计数波动于粉,或者单纯血小板计数低于扩者列为中度苯中毒。在附录中增加说明苯接触工龄低于三个月的慢性苯中毒一般认为,慢性苯中毒多发生在较长期接触苯的人群中,其接触期一般大于三个月〔、`〕,临床表现为血液系统损害。但是近年来在临床实践发现有部分患者苯作业工龄不足三个月即可发病,其临床表现与慢性苯中毒类似,可表现为周围血一系或多系细胞减少,直至出现再生障碍性贫血。一般多见于每天接触苯时间长,作业环境苯浓度明显超标的人群中。因其发病相对较急,有专家提出“亚急性苯中毒”这一概念〔一`。其理由是这部分患者发病时间上符合“亚急性”的特点,病情来势凶猛,临床多表现为急性再障,将这部分病例和既往概念中的慢性苯中毒区分开来,可以引起临床医生重视。在征求标委会专家意见过程中,专家一致认为尽管这部分患者在发病时间上表现为“亚急性”的特点,但是在临床症状上,又接近于“慢性中毒”,这与通常“亚急性中毒与急性中毒临床表现接近”的普遍规律不符。而且这部分患者的临床特点与慢性苯中毒没有本质上的区别,因此不建议在本版标准中增加“亚急性苯中毒”的诊断。为充分引起到对此部分患者的重视,在附录中作了特别说明。关于苯中毒所致白血病苯所致白血病已分别列入职业性苯中毒诊断标准及职业性肿瘤诊断标准中,《职业性肿瘤诊断标准》中限定苯作业累计接触工龄为年以上含年,潜隐期为年以上含年,而以往职业性苯中毒诊断标准中对苯引起的白血病未作时间上的限定,理论上苯接触时间大于三个月均有可能被诊断为慢性重度苯中毒白血病,为使《职业性苯中毒诊断标准》与《职业性肿瘤诊断标准》保持一致,在本版标准中将《职业性肿瘤诊断标准》作为规范性引用文件,并 苯作业工人职业流行病学研究及基因多态性对白细胞计数的影响硕士学位论文在附录中予以说明。关于观察对象观察期的问题职业性苯作业观察对象定义为“苯作业工人的血液检验发现有以下改变之一,在个月内每周复查一次仍无好转,且不能找到其他原因者,可列为观察对象”。在临床实践中常易将此个月误解为观察期,此个月实质是血液系统异常的确诊期,单次血常规检查常受多种因素的影响而出现误差,只有经过多次的检查才能明确是否有血液系统的异常。在明确有血液系统异常后,才正式属于“观察对象”进入观察期。既往没有明确提出“观察期”这个概念,其时间长短更无依据。本标准中明确提出了“观察对象”的“观察期”的概念,并规定此期在苯作业“观察对象”中为个月,观察期结束后,应提出诊断意见。以个月为观察期的依据是个月的观察过程已经可以区分血液系统异常改变属于生理性波动还是属于病理状态,对于苯引起的血液系统的一些病变如、再生障碍性贫血、白血病,其开始出现周围血细胞数量或形态改变到周围血象明显异常其时间间隔均较短,均少于个月。因此个月的观察期能够达到“观察”的目的。关于周围血常规检查标本采集及检测版标准未对周围血常规检查采血方法进行规定,在标准使用过程中可能造成一定的偏差。本版标准对此进行了统一,将目前卫生部规定的临床检测方法一一采用静脉血和自动血细胞计数仪测定作为本标准使用的检测方法。关于骨髓增生异常综合征上版标准中,是附录中对苯引起的骨髓增生异常综合征有专门段落加以说明。近年来,尽管对于的分类有很多新的进展,其分类方法也有很大改变,但是考虑到苯所致的与其它原因导致的无本质上的区别,为使标准更为简练,在新版中删除了对苯所致的描述。处理原则的更改为增加标准的易用性,本版标准对苯中毒患者的处理进行了修改。修改的内容文字更加简单,实际操作性更强。 苯作业工人职业流行病学研究及基因多态性对白细胞计数的影响硕士学位论文参考文献〔了,〕,一「李继猛一起急性苯中毒死亡事故报告【」职业卫生与应急救援,,〔」郝凤桐,赵培青,宋桂珍,等慢性苯中毒致继发骨髓增生异常综合征例〕中华劳动卫生职业病杂志,,一「〕孙道远,谢兰兰,张玲,等高浓度接苯工人血小板减少例的临床分析〕中华劳动卫生职业病杂志,,一何凤生中华职业医学人民卫生出版社,,一,〔一,,〕,一〔〕吴中亮,夏世钧,吴伯钦毒理学辞典「湖北科学技术出版社,,〕任引津,张寿林,倪为民,等实用急性中毒全书「人民卫生出版社,,「」陈姓生,邝守仁,孔凌珍,等亚急性苯中毒致严重造血障碍例报告「〕中国职业医学,,一「江苹,陈丽榕,蒋景辉,等亚急性苯中毒例临床分析〕中国职业医学,,【」姚苹苹,陈福深,严建华,等亚急性苯中毒致死例报告「〕中国工业医学杂志,,李晓军,宋莉,石冬梅苯中毒致急性造血功能严重损伤例临床分析中国工业医学,,,一戴鸿儒,蒋淑珍,王玲安,等亚急性苯中毒致血液系统损害例报告汇〕中国工业医学杂志,, 苯作业工人职业流行病学研究及基因多态性对白细胞计数的影响硕士学位论文综述二苯的血液毒性遗传易感性研究进展黄简抒综述邹和建审校苯是应用最为广泛的化工原料和工业原料之一,慢性苯中毒可致骨髓造血功能损伤,但暴露在相同苯环境下,不同个体苯中毒的发病不尽相同,提示遗传易感性对苯的血液毒性有一定影响,本文就近年来的相关文献做一综述。苯代谢酶的基因多态性职业性苯中毒以呼吸道吸收为主,经肺泡毛细血管膜的被动扩散,一的苯吸收入血。进入体内后,苯经肝脏细胞色素氧化酶氧化生成苯的环氧化物,再经以下途径进一步代谢经非酶重排形成酚,酚经氧化生成苯的双经基或三轻基化合物,如氢醒、儿茶酚、苯三醇,这些代谢中间产物经血液到达骨髓后,经髓过氧化物酶氧化生成毒性更大的苯醒,经还原型辅酶工酮氧化还原酶解毒,还原成毒性较低的二醇,苯的双轻基、三轻基化合物还可以经苯酚硫转移酶、尿普一葡萄糖醛酸转移酶作用,分别与硫酸或葡萄糖醛酸结合,以硫酸盐或葡萄糖醛酸衍生物的形式从尿中排出经环氧化物水解酶代谢生成苯的二氢二醇,再脱氢生成以被催化生成开环产物反式,反式粘康醛,再进一步转化成反式,反式一粘康酸,一,,一从尿中排出先形成前苯基硫醇尿酸,再通过谷肤甘肤琉基转移酶与还原型谷肤甘肤结合,形成一苯硫醇尿酸,起到一定解毒作用,从尿中排出,,。其中、、、属于相代谢酶,通过氧化、还原、水解作用,改变化学物质所具有的功能集团、、属于相代谢酶,催化外源化合物经工相代谢酶生成的中间产物与内源性强极性物质如谷肤甘肤,葡萄糖醛酸,硫酸结合,使其极性增强,有利于从尿中或胆汁中排出,针对上述代谢关键酶,许多学者对编码它们的基因的多态现象做了相关研究。细胞色素氧化酶己证实,超家族中,亚型是苯主要的代谢活化酶,该基因的 苯作业工人职业流行病学研究及基因多态性对白细胞计数的影响硕士学位论文'转录调节区域一,识别、一,。,限制性内切酶识别和第六内含子限制性内切酶工识别的多态现象,影响其转录表达的调控,杂合子突变型的代谢活性是野生型转录活性的一倍。等研究代谢酶基因多态现象对低浓度苯作业工人尿中生物标志物的影响,或工位点基因变异引起监测前尿中,一。水平升高,但不影响监测后尿中,一水平,位点基因变异引起监测后尿苯一水平降低,监测前尿苯一。水平也有类似变化,但无统计学意义【`。玩等发现,位点的多态现象对催患影响不明显。叶榕等也得到同样结论,但按性别分层后发现,针对、工位点,苯中毒组和接触组携带、基因型的男性发生的危险性较型、型升高,而女性各基因型在两组间差异无显著性,未发现饮酒、吸烟与各基因型对的发生有联系。的其他亚型也是外源性化学物质在体内代谢的重要的相代谢酶之一,通过氧化、还原、水解作用,改变化学物质所具有的功能集团或使其分解,能活化多种环境致癌物致突变物。杨爱初等对苯作业工人进行酶活力检测,发现苯作业组该酶活力明显高于健康对照组。等发现,携带基因型的个体催患苯中毒的风险高。主要存在于肝脏的内质网中,对多种药物、环境化学物及生物毒素都具有代谢活化作用。基因第外显子突变使酶活力完全丧失,突变使该酶活力下降。等报道,携带,,和。基因型个体苯中毒的危险性较高。是髓细胞的特异性标志,位于该基因编码区上游一位点处的变异能降低其的表达。等发现,携带一基因型的苯作业工人,与携带一或基因型的人群相比,其外周血明显下降。认龟等发现,基因的在病例组和对照组之间的分布没有统 苯作业工人职业流行病学研究及基因多态性对白细胞计数的影响硕士学位论文计学差异,经性别分层后,男性携带一基因型在两组之间分布差异明显,经吸烟分层后发现,吸烟人群中,病例组基因型比例高于对照组,不吸烟人群中,病例组从基因型比例低于对照组,按饮酒分层后发现,饮酒人群中,病例组基因型比例高于对照组,不饮酒人群中,病例组基因型比例低于对照组,但均无统计学意义,提示不良生活习惯可能掩盖了该基因变异的效应。酿氧化还原酶困,位点一突变可能使酶活力改变,野生型酶活力正常,杂合型活力降低,纯合突变型活力完全丧失。等发现,在新鲜分离的骨髓涂片、骨髓祖细胞中不能检测出蛋白或酶的活性,无论位点是何种基因型。经低浓度或染毒后,携带或基因型的骨髓细胞酶活力增加,并被诱导生成蛋白,而携带基因型的骨髓细胞经染毒后未发现上述变化,提示可能丧失被苯代谢产物诱导生成的能力。等发现,携带基因型的个体与携带或基因型的个体相比,苯中毒的危险性增加倍。芳香烃或脂肪烃类化合物在体内生成的环氧化物,经催化可降低其毒性。孙品等对基因、、、多态及基因多态与发病遗传易感性的关系进行研究,结果发现,在携带基因型的个体中,同时携带等位基因个体的发病风险降低,在携带基因型个人体中,同时携带等位基因个体发病风险升高尸“。谷肤甘肤琉基转移酶具有催化谷肤甘肤与多种亲电子底物结合的功能,从而消除亲电子外源化合物和氧化应激所引起的危害作用。是一个同工酶超家族,等发现,携带野生型基因的个体比缺失型个 苯作业工人职业流行病学研究及州基因多态性对白细胞计数的影响硕士学位论文体尿水平明显增高,提示在超家族中,是催化苯代谢产物与结合的关键酶。等报道,携带缺失基因型个体发生苯中毒的危险性是具有非缺失基因型个体的倍报道,缺失型个体与非缺失型个体相比,发生的危险性升高`。等将人类外周血淋巴细胞与共同孵育,发现缺失型淋巴细胞微核率明显高于非缺失型,但对姊妹染色单体交换无明显影响,和基因型对淋巴细胞的和影响不显著【」谷肤甘肤过氧化物酶在人体抗氧化系统中也起到重要作用,维持体内还原型谷肤甘肤和氧化型谷肤甘肤的动态平衡,提供充足的达到抗氧化、解毒作用。彻等经研究发现,多态现象与尿中一水平相关'。是超家族中的一种重要的同工酶,可催化苯的代谢产物形成易溶于水的结合物,排出体外,降低其毒性作用。在基因第外显子第和位点上存在个即卜和,可使该酶活性改变。孙品等经研究发现,苯作业人群中,等位基因个体发生苯中毒的危险性是基因型的倍,等位基因个体发生苯中毒的危险性是基因型的倍尸,经单倍型分析,携带基因单倍型个体是携带单倍型个体的倍尸,`。又称磺基转移酶,催化代谢产物与硫酸结合,使其毒性减低,是目前研究较多的亚型。等发现,基因突变与的关系不显著。修复关键酶的基因多态性 苯作业工人职业流行病学研究及基因多态性对白细胞计数的影响硕士学位论文苯的活性代谢产物具遗传毒性,苯代谢过程中产生的过氧化氢和轻基自由基,可直接造成氧化损伤、断裂,并进一步引起染色体畸变,苯作业工人的淋巴细胞微核率和染色体畸变率明显高于健康对照组”“。氧化损伤过程中,可形成具强致突变能力的一轻基脱氧鸟镖吟一,据等报道,城市儿童接触苯的浓度相对高,其白细胞和尿一水平明显高于乡村儿童,苯的接触剂量与白细胞一水平显著相关【`。断裂时,机体具一定代偿功能,可通过碱基切除修复助、核酸切除修复助、非同源末端连接途径、同源重组等多种途径修复,涉及很多关键酶,包括、、、、、、、、、和即等`。等发现,和不同基因型在苯中毒组和对照组间的分布存在显著差异性,的各基因型在两组间的分布差异不显著,及多态现象与的发病风险没有关系黄慧隆等发现,密码子、和位点的基因型在苯中毒组和对照组的分布具明显差异,携带变异等位基因的个体发生的危险性升高。等发现,苯作业人群中,洲的种一,,一,一公,的种、的种与减少明显相关`。人体内主要由、和蛋白联合参与一的修复,张忠彬等发现携带仃和基因型的个体发生的风险性较携带和基因型明显升高,同时携带和可两种基因型的个体发生的风险性明显低于同时携带和的个体。和造血调控相关的细胞因子、粘附分子等研究编码细胞因子、粘附分子、趋化因子基因的对苯作业工人外周血象的影响,发现一一、一一,'、一一、一、一朴等种与减少相关,一与增加相关,粘附分子一 苯作业工人职业流行病学研究及基因多态性对白细胞计数的影响硕士学位论文与细胞、细胞、细胞、单核细胞减少相关。在位苯作业工人中,一介和一分别引起一祖细胞集落形成减少和增加。苯的代谢产物可改变骨髓祖细胞对肿瘤坏死因子一。。的反应,使的核转录受阻,与一协同作用,使凋亡增加,并导致一系列血液系统毒性。现己发现多个一。启动子的多态性,其中最重要的是一位点一的多态性,其次是一位点一的多态性。等研究苯接触健康工人和正常健康人群一。基因一位点以及一位点的多态性,发现其分布在两组人群中差异无显著性,其与的关系还有待进一步研究,。结论综上所述,苯的活化代谢,修复途径、造血调控中涉及到诸多关键酶,编码它们基因的多态现象,可能改变这些酶的活力并影响苯的血液系统毒性。了解上述基因的多态性,有助于了解个体对苯毒性的遗传易感性,从而明确高危个体,并对之加以保护。值得注意的是,性别、饮酒、吸烟等因素,可能起到协同作用。参考文献〔」,,,,,,,一〕,,,一,,一,,,,又【,,一 苯作业工人职业流行病学研究及基因多态性对白细胞计数的影响硕士学位论文」叶榕,管继如,谢晓敏,等毒物代谢酶基因多态性与慢性苯中毒易感性的关系【中国工业医学杂志,,一一「杨爱初,刘移民,王致,等苯及同系物接触者,相代谢酶基因多态性与酶活性关系研究热带医学杂志,,一〔〕,,厄双,印,,,,,,一」,,,,,一〔,,,。乙丁了苍巧丫,了解双八幼刀,叹夕刃脚,召夕厂邵,,一,,卿」,,一〕,矶,甲一,,一「孙品,张忠彬,吴芬,等基因及基因多态与慢性苯中毒易感胜的关系复旦学报医学版,,一【,,,,,【,,一,一,,一「,,一 苯作业工人职业流行病学研究及基因多态性对白细胞计数的影响硕士学位论文「〕孙品,张忠彬,万俊香,等,,和基因多态与慢性苯中毒遗传易感性关系卫生研究,,一巧〔〕,,,,,,,,一【,,,,,,一〕,,,,一而,,,,,,,,一,认厄,,,,,,形,,一黄慧隆,许建宁,王全凯,等基因多态性与慢性苯中毒易感性的相关险中华劳动卫生职业病杂志,,一〕,,,一一,,一〔〕张忠彬,刘薇薇,顾寿永,等。及和基因多态性与慢性苯中毒风险性的关系中华劳动卫生职业病杂志,,一〕,,,印,,一,」,,,一,,一 苯作业工人职业流行病学研究及基因多态性对白细胞计数的影响硕士学位论文附录硕士在读期间发表文章黄简抒,韩志英,金沈雄,等石化行业职业性接触性皮炎临床分析工业卫生与职业病,,一黄简抒,金复生镁对噪声性听力损伤的影响及研究进展工业卫生与职业病,,一黄简抒,吴鑫,钟先玖丙烯睛对嵘螺皋丸精原细胞的诱导损伤工业卫生与职业病,,一黄简抒,吕玲,邹和建近期国内相关期刊报道亚急性苯中毒病例分析中华劳动卫生职业病杂志,,一黄简抒,刘添沉,顾尹瑛,等苯对作业人员血小板参数影响的调查分析中华全科医学杂志,,一黄简抒,王朋,刘添沉,等苯作业人员血小板相关抗体水平变化规律的探讨中国工业医学杂志己修回硕士在读期间参与课题年参加了导师主持的卫生部课题对《职业性苯中毒诊断标准》一进行修订,现《职业性苯中毒诊断标准》一已颁布。年参加了上海市卫生局科研项目《丙烯睛作业人群、和基因多态性研究》,现该课题已完成。年申请了金山区科委科研项目一乃基因多态性与慢性苯中毒遗传易感性关系研究》。 苯作业工人职业流行病学研究及基因多态性对白细胞计数的影响硕士学位论文致谢在此我首先要衷心感谢我的导师邹和建教授对我的悉心指导和无私关怀,正是他对我的辛勤培养才使我的临床技能和科研能力有了很大的进步。他高尚的医德和精湛的医术将使我受益终生,而他在生活中的点滴关心更使我永怀感激并将一生铭记。衷心感谢我的导师组成员吕玲副教授、周元陵副研究员,他们为我实验的设计与实施给予了关键指导,在我前进的道路上始终为我指明方向。感谢华山医院职业病科资深专家徐麦玲教授、万伟国副教授、张炯主治医师、顾映丽主治医师,以及我的师姐妹薛愉、郑舒聪、孔宁、宣丹丹、姜莉、徐雪,她们在我的学习、工作和生活中给予了最最无私的支持与帮助。衷心感谢复旦大学附属华山医院中心实验室关明主任,他开拓了我的视野,使我对分子生物学初窥门径,感谢华山医院中心实验室张心菊、马玮哲、顾小叶、许笑,他们为我的实验提供良好的工作环境、技术支持及无私帮助,并给予我最大的宽容与忍耐。衷心感谢上海市化工职业病防治院李思惠主任、闻建范主任,上海市职业病医院孙道远主任、张巡森老师、黄琳医师,上海市杨浦区中心医院匡兴亚主任,他们为本课题组无私提供病例、不计得失,各位资深专家主任对后生晚辈耐心指导、悉心提携,他们博大的胸襟值得我一辈子致敬。衷心感谢复旦大学附属金山医院中心实验室范卫主任、史继敏、张继红老师,从最基础的移液器使用,到标准曲线的计算,他们不厌其烦,手把手指导,肩并肩陪伴,与他们共事是我的荣耀,也是我一生难忘的美丽时光。衷心感谢复旦大学附属金山医院职业病科的朱瑞娟老师、施春媛老师、马力医师、陈昌发医师、陈永伟医师给予我的温暖和帮助感谢我的同事兼好姐妹王朋、李秀菊对我至始至终的关怀和照顾虽然袁海明博士和我仅共事一年,但他在复旦大学生命科学院继续求学期间,仍真诚关心我,指出我实验中的每个关键点,为我实验的顺利进行做出了不可磨灭的贡献,他的热情与诚挚是我继续前行的动力。感谢曾经在我生活和工作学习中给予过帮助的所有老师、同学、同事。最后衷心感谢我的父母、丈夫多年来始终如一的鼓励和支持,感谢我的女儿未未,她的到来点燃了我的生命。 论文独创性声明本论文异我个人在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果。论文中除了特别加以标注和致谢的地方分,不包含其他人或其它机构已经发表或撰写过的研究戌果。其他问志对本研究的启发和所做的贡献均已在论文中作了明确的声明并表示了谢意。日期汐口、,,,者签名封通论文使用授权声明本人先全了解复旦大学有关沐留、使用学位论文的规定,即学扩有汉·保留送文论文的复印件,允许论文被查阅和借阅学校可以公布论文的全部或部分内容可沙'采用影印、缩印或其它复制手段保存论'。保密的论文在解密后遵守此规定,作者蒯一六冲日一邑笠