糖尿病细胞模型及研究进展-陈晶

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临床与病理杂志2016,36(4)http://lcbl.amegroups.comJClinPatholRes507doi:10.3978/j.issn.2095-6959.2016.04.031Viewthisarticleat:http://dx.doi.org/10.3978/j.issn.2095-6959.2016.04.031糖尿病细胞模型及研究进展12陈晶综述李璟审校(1.南华大学附属省马王堆医院，长沙410016；2.湖南省老年医院研究所，长沙410016)[摘　要]本文从胰岛素抵抗和胰岛素分泌不足两个方面对不同类型细胞糖尿病模型的建立进行总结，并简述其优缺点，以期为研究者选择合适的体外糖尿病细胞模型提供参考。[关键词]胰岛素抵抗；胰岛素分泌不足；糖尿病细胞模型Advancesinestablishmentofcellculturemodelsofdiabetesmellitus12CHENJing,LIJing(1.HunanMawangduiHospitalAffiliatedtoUniversityofSouthChina,Changsha410016;2.HunanGeriatricHospital,Changsha410016,China)AbstractDifferenttypesofcellculturemodelsofdiabetesmellitusbasedoninsulinresistanceandinsufficientinsulinsecretionweresummarized.Meanwhile,alltheadvantagesanddisadvantageswerebriefed.Soastoprovidereferenceonchoosingappropriatecellculturemodelsofdiabetesmellitusinvitro.Keywordsinsufficientinsulinsecretion;insulinresistance(IR);cellculturemodelsofdiabetesmellitus目前国内外关于降糖药物的筛选以及药物征。本文将就这两方面对糖尿病细胞模型的建立降糖的作用机制研究中，仍以动物为主要模型，进行综述(表1)。但其存在实验周期长、实验繁琐复杂、费用高等问题；近几年，体外糖尿病细胞模型的建立逐渐1胰岛素抵抗的细胞模型建立发展起来，同前者相比较，能去除某些自然条件下不可能或不易排除的因素，更简便、节约、快胰岛素抵抗是指机体靶器官对胰岛素的敏速、客观地观察实验结果。也因此，细胞模型更感性降低，导致胰岛素相对分泌不足、对糖代谢多应用于高通量药物及药物毒性筛选、药物代谢作用紊乱的病理生理过程，是糖尿病发病机制之分析、中药分子药理学研究及药效学评价、细胞一。机体内对胰岛素敏感的主要作用部位是肝脏功能、受体及细胞因子之间的相互作用等研究领和外周组织(脂肪、肌肉)，当二者失衡时，在整体域。糖尿病是一组以高血糖为特征的代谢性疾水平上，相应的一个或多个部位会表现出一系列病，而胰岛素抵抗(insulinresistance，IR)和胰岛素的病症；在细胞水平上，则表现为细胞表面胰岛分泌不足是糖尿病的重要病理生理基础和显著特素受体数目减少和/或受体后缺陷。目前，实验室收稿日期(Dateofreception)：2016–02–06通信作者(Correspondingauthor)：陈晶，Email:64379257@qq.com 508临床与病理杂志,2016,36(4)http://lcbl.amegroups.com表1糖尿病细胞模型常用的细胞类型分类Table1Differentcellmodelsofdiabetesmellitusfromvariousspiecies模型分类来源代表种类应用领域优势不足胰岛素抵肝脏动物原代肝细胞可用于发病机制、便于人为控制培养条件；培养条件较苛刻，且随着抗模型细胞酶诱导、抑制研究、排除种间及个体间代谢差时间的延长，细胞活力、药物降糖机制、药异；同时获得大量均质性结构形态及功能发生变物筛选等样本；功能和细胞分化状化，基因表达异常态基本保留HepG2既保留了大部分肝细胞生在肝细胞的特异性功能上物学特性和代谢特点，又具有局限性，且表现程度便于体外培养，并且操作不一，并带有致瘤风险。简单方便、可重复另外，恶性肿瘤本身可能产生IR作用LO2与人肝细胞具有基本相同正常人肝细胞的来源牵涉的结构和功能，既具有持到伦理问题，需慎重久增殖能力，又无成瘤性脂肪人、动物脂肪原与人、动物脂肪细胞需从脂肪组织中分离，而细胞代细胞分离出来的脂肪细胞难以维持，无法进行时间较长的实验研究3T3-L1获取技术比较成熟，周期用于分化的前体细胞通常短、重复性好；模型建立需要在15代以内。传代相对稳定后生物学特性有一定变化肌细胞人、鼠原代肌肉培养简便、经济，可以更获取操作繁琐，不可传代，好的模拟体内环境容易被成纤维细胞污染，且分化时间长，产量低L6成肌细胞需诱导增殖与分化胰岛细胞原代胰人、动物原代胰药物对胰岛细胞的离体时间短，其特性同体分离过程严格，胰腺来源模型岛细胞岛细胞毒性作用及胰岛细内生理状态相似较少，细胞产量低，存在胞功能的研究被成纤维细胞污染的风险胰岛细RIN系(RINm5F、β细胞生长、存活因表型较稳定，获得的细胞有一定致瘤性胞系Ins-1)子、细胞毒性及细纯度高、可重复胞功能的研究HIT系分泌系统的生物化保留了正常胰岛素分泌的在培养过程中对葡萄糖及(HIT-T15)学研究本质，且对葡萄糖及其他其他促分泌物的反应逐渐促泌物的反应阈值较低丧失MIN系(MIN6)β细胞内胰岛素分泌GSIS以及反应曲线均类同HIT系的机理及基因水平似于正常胰岛细胞调控的深入研究。NIT系(NIT-1)β细胞免疫功能研究分泌胰岛素功能稳定细胞表面表达大T抗原，且存在亲嗜性逆转录病毒，且对糖刺激反应不敏感βTC系JNK信号通路、细胞维持分化约50代，有效同HIT系功能、药效评价等的分泌胰岛素βHC系GSIS机制、1型糖早期保留了正常的GSIS同HIT系，且后期己糖激尿病自身免疫抗体能力及完整的葡萄糖信号酶的含量会增加和β细胞自身免疫转导途径损伤的研究βTC-tet系同βHC系保持正常的GSIS反应超同HIT系过60代 糖尿病细胞模型及研究进展陈晶，等509评价胰岛素抵抗主要是通过对细胞膜表面胰岛素1.1.2HepG2细胞模型受体数目、亲和力、结合率等进行测定的。如受HepG2细胞来源于人肝胚胎瘤细胞，与肝体放射分析法测定高、低亲和力膜胰岛素受体数细胞表型极为相似，既保留了大部分肝细胞生物目和亲和力常数；Nishimura方法测定胰岛素受体学特性和代谢特点，又便于体外培养，并且操作结合率等。近20年来，国内外学者已经建立了数简单方便、可重复；但它在肝细胞的特异性功能种较为成熟的体外IR模型，已用于体外筛选药物上具有局限性，且表现程度不一，并带有致瘤风和营养物质及对其分子机制的研究，并且获得许险。另外，恶性肿瘤本身可能产生IR作用。有研[6]多研究成果。究者利用高浓度游离脂肪酸(freefattyacid，FFA)作用HepG2细胞，结果细胞产生了IR，可能是因为1.1肝脏细胞胰岛素抵抗模型胰岛素信号分子发生泛素化后，引起相关蛋白酶[7]肝脏是体内物质代谢的中心，也是胰岛素体的降解所导致。另外，也有研究发现HepG2细受体最密集的脏器之一，对胰岛素非常敏感。由胞株在高糖情况下胰岛素受体数目减少、功能有[8]于肝脏细胞数量较多、再生能力强、易获取，因缺陷。谢洁等采用含1μmol/L浓度的地塞米松持此，被广泛运用于IR模型的建立。目前使用的肝续作用于HepG2细胞48h，细胞产生了IR。细胞模型大多来源于动物原代肝细胞、人肝癌细1.1.3人肝细胞模型胞(HepG2)和人肝细胞模型(LO2)。LO2细胞是人正常肝细胞株，基本保留了人1.1.1原代大鼠肝细胞模型肝细胞的结构和功能，既具有持久的增殖能力，原代肝细胞具有肝脏的所有特异性功能，又无成瘤性，因此，从理论上来说，适用范围比[9]因此能精确模仿体内代谢情况，并且具有以下优肝肿瘤细胞模型更广。近年来，有人将LO2人肝点：1)便于人为控制培养条件；2)排除种间及个体细胞与多孔壳聚糖微载体共培养，结果获得的肝间代谢差异；3)同时获得大量均质性样本；4)功能细胞具有高密度与高活力。但正常人肝细胞的来和细胞分化状态基本上保留。可用于酶诱导、抑源牵涉到伦理问题，需慎重。[1]制研究，药物筛选等。但原代细胞在每次实验之前均需从肝组织中分离出来，培养条件较苛刻，1.2脂肪细胞胰岛素抵抗细胞模型且随着时间的延长，细胞活力、结构形态及功能脂肪组织是机体主要能量储存器官，且具有发生变化，基因表达异常。因此，严格的肝组织内分泌功能。现在许多研究认为脂肪组织尤其是分离、合适的细胞培养方法及适宜的细胞外基质内脏脂肪是IR产生的始发部位。因此建立成功的是成功建立体外原代肝细胞模型的基础。脂肪细胞体外模型对于研究IR产生的发病机制具肝细胞的分离方法主要包括非灌流法和灌流有重要意义。国内外建立胰岛素抵抗模型的脂肪法。前者具有操作简单、时间短，不需要复杂的仪细胞包括人和动物脂肪原代细胞、分化成熟的小器等优点，但是获取率和成活率都比较低。后者目鼠前脂肪细胞(3T3-L1)。但两者均需用胶原酶将前应用最为广泛的是原位胶原酶灌流法(Seglen两步脂肪细胞从脂肪组织中分离出来，而分离出来的灌流法)，此法所获取的细胞纯度和成活率高，还脂肪细胞难以维持，无法进行时间较长的实验研能分离肝实质细胞和肝非实质细胞，但操作流程较究。目前应用较多的脂肪细胞模型是3T3-L1前脂复杂、所需时间长、易污染、成本高。因此，有研肪细胞，技术成熟、周期短、重复性好，模型建[2]究者采用多点穿刺灌注消化分离人肝脏组织，综立相对稳定；但应注意的是，用于分化的前体细合了前两者的优点。随着对细胞生物学和细胞-基胞通常需要在15代以内，且传代后生物学特性有质相互作用的理解增强，目前国内外采用了模拟生一定变化。物的三维培养和共培养的方式对肝细胞进行培养，3T3-L1前脂肪细胞模型3T3-L1前脂肪细胞是关于三维培养及共培养可见下文。一种从Swiss3T3-L1小鼠(17~19d)胚胎的中胚层多[3]有研究者将大鼠原代肝细胞置于含胰岛素能干细胞中分离克隆获得的细胞株，具有分化为成的培养液中培养，观察其胰岛素抵抗作用；另有熟脂肪细胞表型的潜力。目前国内外比较公认的诱[4]报道采用不同浓度脂联素处理大鼠肝脏细胞，从导方法为IBMX+DEX+INSULIN诱导前脂肪细胞变[10]能量代谢角度去探讨胰岛素抵抗的作用机制；也为脂肪细胞。有学者利用高糖+胰岛素刺激成熟[5]有人采用高浓度葡萄糖刺激大鼠原代肝细胞，观3T3-L1脂肪细胞，发现细胞对胰岛素的敏感性减[8]察细胞凋亡情况。弱，发生了IR。也有人将1μmol/L地塞米松作用 510临床与病理杂志,2016,36(4)http://lcbl.amegroups.com于3T3-L1脂肪细胞，建立胰岛素抵抗模型。也有胶原酶处理过的SD乳鼠胰岛细胞，将其置于含四[11]研究将3T3-L1脂肪细胞经FFA体外作用后，发现氧嘧啶(AXN)的培养液中，结果细胞凋亡数目增IRS-1和GLUT-4水平下调，表明细胞产生了IR。加，细胞活性被抑制，胰岛素分泌量明显下降。1.3肌细胞胰岛素抵抗细胞模型2.2胰岛细胞系骨骼肌是体内耗能最主要的器官，经胰岛素随着基因工程技术的发展，国内外已经建立刺激后的葡萄糖转运总量占机体总量的75%。目前了多种胰岛β细胞系，保持了很多正常胰岛的关键国内外建立的肌细胞模型主要包括人、鼠原代肌功能。目前所有已建立的β细胞系都来源于致命性肉细胞系及鼠成肌细胞系。原代成肌细胞是分化放射线的照射或某种致癌基因表达的动物胰岛素成熟的骨骼肌细胞，不可传代，但培养简便，因瘤，前者主要包括大鼠RIN系(RIN-m5F，INS-1)、此可以更好的模拟体内环境；但其容易被成纤维仓鼠HIT细胞系(HIT-T15)、MIN细胞系(MIN6)，细胞污染，且所需分化时间长，产量低。有报道后者主要有NIT-1细胞系、βTC细胞系、βHC细胞[12][13]是关于原代骨骼肌细胞和C2C12骨骼肌细胞系、βTC-tet细胞系。获得的细胞系纯度高、可重建立IR模型的。前者采用棕榈酸诱导新生SD大鼠复，但部分细胞系弱化了对各种外来刺激反应，四肢原代骨骼肌细胞，发现骨骼肌细胞产生了浓导致胰岛素含量和葡萄糖刺激的胰岛素分泌(GSIS)度依赖性IR。后者同样以棕榈酸处理细胞，结果减少，不能如实地反应正常胰岛细胞功能。细胞发生了IR，考虑与内质网应激有关。2.2.1RIN细胞系L6成肌细胞模型是目前比较常用的骨骼肌IR大鼠胰岛素瘤(RIN)细胞系源于可移植的[8]模型。国内有人采用地塞米松诱导L6肌细胞成胰岛细胞瘤，但其仍有一定的致瘤性，常用的功建立胰岛素抵抗模型，另外还发现地塞米松作有RIN-m5F和INS-1。RIN-m5F是RIN-m的亚克用24h后将引起胰岛素受体底物的Ser307蛋白磷酸隆，可分泌较高的胰岛素，因此常被用于进一步[14][15]化。也有人通过胰岛素和棕榈酸诱导建立成的研究，如P53磷酸化、泛素化，信号通路P38熟L6细胞株胰岛素抵抗模型。MAPK途径等；但其同时还分泌生长抑素和胰高[18]血糖素。安丽萍等利用浓度为250及500μg/L2胰岛细胞的模型建立的软脂酸建立了RIN-m5F损伤模型，并认为是氧[19]化应激所导致。另有国外学者利用30mmol/L胰岛内具有分泌功能的细胞共4种，分别是葡萄糖培养48h成功建立细胞损伤模型。β细胞、α细胞、δ细胞及PP细胞。其中β细胞约占INS-1是在最初的RIN系的基础上经2巯基乙醇60%~70%，主要分泌胰岛素。而由于各种原因所引培养生成肿瘤物质而建立，其表型较稳定，不起的胰岛β细胞受损均可导致胰岛素分泌不足，是分泌胰高血糖素、生长激素及胰多肽，且对葡引起糖尿病的另一发病机制。因此，建立体外胰岛萄糖刺激和氧化应激损伤高度敏感，因此是研细胞受损模型对于研究糖尿病具体发病机制是必需究氧自由基介导、β细胞生长、存活因子、细[20]的。目前最常用的有人和鼠原代细胞、胰岛β细胞胞毒性及细胞功能的理想模型。丁静云等瘤克隆产生的胰岛细胞系及转基因鼠胰岛细胞系。将INS-1E细胞置于高糖培养基中培养，结果细胞胰岛素mRNA合成及GSIS均显著降低，且细胞的形[21]2.1原代胰岛细胞模型态无明显改变。也有研究予以12mmol/LAXN原代培养的胰岛细胞离体时间短，其特性诱导后，损伤的胰岛细胞IC50约为正常对照组的同体内生理状态相似，因此适用于研究药物对胰50%，可建立稳定的胰岛细胞损伤模型。岛细胞功能及毒性的作用。目前，主要通过胶原2.2.2HIT细胞系酶分级消化鼠胰腺获取胰岛细胞，单层培养法进HIT细胞是由分离的叙利亚地鼠胰岛细胞转行培养。该方法操作简便、易行，且费用较少；染SV40病毒得到的，而HIT-T15系是通过挑选母系但分离过程中需严格控制消化时间、温度及酸碱中胰岛素含量高的亚系获得的，保留了正常胰岛度，且胰腺来源较少，细胞产量低，同时存在被素分泌的本质，且对葡萄糖及其他促泌物的反应[16]成纤维细胞污染的风险。国外学者采用软脂酸阈值较低，是进一步研究分泌系统生物化学的重作用胰岛β细胞，结果胰岛细胞凋亡增加，从而导要工具。但它同时分泌胰升糖素，且在培养过程[17]致胰岛素分泌下降。国内有研究者取出生3d经中对葡萄糖及其他促分泌物的反应逐渐丧失。田 糖尿病细胞模型及研究进展陈晶，等511[22]慧采用不同浓度环孢霉素体外培养离体大鼠HIT想细胞类型。但在体外培养过程中，GSIS逐渐衰细胞，结果发现0.1μg/mL环孢霉素即对胰岛素分减，且40代以后反应性完全丧失。βHC细胞表达泌有抑制作用，此模型能保持稳定16h。也有实验两种类型的GAD，GAD水平接近正常胰岛细胞，研究利用棕榈酸成功建立HIT-T5细胞损伤模型，因而更适合用于1型糖尿病自身免疫抗体和β细胞[23]具体可参考文献。自身免疫损伤的研究。2.2.3MIN细胞系2.2.7βTC-tet细胞系MIN是应用现代基因工程技从转基因小鼠胰腺βTC-tet细胞系来源于四环素基因调控系统控[24]发生的胰岛细胞瘤中建立的胰岛β细胞株。研究制下表达SV40T抗原的转基因小鼠，保持正常的表明，胰岛β细胞株MIN6在高糖刺激下胰岛素分GSIS反应超过60代。但是随培养时间的延长，己泌增加明显，且分泌量以及反应曲线均类似于正糖激酶活性逐渐增加，然而这种改变在加入四环常胰岛细胞，也因此可以用于糖刺激β细胞内胰岛素后可逆转。国内外相关文献较少。素分泌的机理以及基因水平调控的深入研究。但其需要15%FBS培养，且在培养过程中会逐渐丧失2.3永生化胰岛β细胞系[25]反应强度和葡萄糖反应阈值。有实验研究采用由于上述原代细胞及胰岛细胞系存在的各种地塞米松刺激小鼠MIN6细胞48h后可诱导β细胞凋不足和应用局限性，因此研究者通过基因技术对亡，当浓度为800nmol/L时细胞由凋亡转向坏死。细胞进行永生化和可逆性永生化方面的改造，来也有通过棕榈酸来建立MIN6细胞损伤模型的，具建立理想的细胞模型。使获得的细胞既有无限增[26]体参考文献。殖潜能，又保持正常胰岛β细胞重要功能特征。2.2.4NIT细胞系也因此可用于研究胰岛素分泌机制、糖尿病药物NIT是NOD/Lt小鼠胰岛素启动子控制下的筛选、糖尿病病因学和胰岛移植。目前功能良SV40T抗原基因而自发产生的β细胞腺瘤。NIT-1好、状态稳定的有两种，分别是NAKT-15和BRIN-是其一种胰岛β细胞株，供β细胞免疫功能研究的BD11。前者是利用含有SV40Tag和hTERTcDNAs细胞系，培养18代后分泌胰岛素功能稳定，但仍重组逆转录病毒载体转染人胰岛β细胞，成功建少部分细胞可分泌少量的胰高血糖素。由于其不立了人胰岛β细胞系，但对于胰岛细胞的需求量仅表达大T抗原，且细胞表面存在亲嗜性逆转录病较大，且操作复杂、耗时长、成本高，另外其功毒，因而在免疫学研究中受到一定的限制。李莹能和致瘤性有待进一步研究。后者是通过电融合[27]芳等将NIT-1置于不同葡萄糖浓度中培养72h，法将NEDH大鼠胰岛β细胞和RIN-m5F细胞进行杂结果当浓度为27.6mmol/L时，细胞凋亡率达到最交融合而建立的功能最好的细胞系，可持续稳定高，并认为与Irs2mRNA表达下调、FOXO1mRNA传代超过50代，胰岛素分泌能力及GSIS均较RIN-[28]表达增加有关。另有研究利用0.5mmol/L棕榈酸m5F细胞明显增强，并高水平表达GLUT-2，与大诱导NIT-1凋亡，考虑与体内ROS含量升高有关。鼠正常胰岛β细胞极其相似，是研究胰岛素分泌的2.2.5βTC细胞系良好模型。动物体内实验结果证实BRIN-BD11能βTC来源于大鼠胰岛素启动因子控制下表达有效控制血糖。但是该系分泌的胰岛素量较正常SV40T抗原转基因小鼠的胰岛素瘤细胞。维持分值少，胞内胰岛素含量却无明显差异，考虑可能化约50代，有效的分泌胰岛素。其中βTC7的胰岛是胞内胰岛素颗粒转运和释放存在缺陷所致，除素含量较高，早期的GSIS对葡萄糖剂量依赖性与此之外，仍有潜在的致瘤性。正常胰岛相似。但是随着培养时间延长，剂量效应曲线左移，与葡萄糖磷酸化酶、己糖激酶的表3三维细胞培养[29]达升高一致。郑少娟采用不同浓度抵抗素诱导βTC细胞24h，发现当浓度为60~200ng/mL时细胞三维细胞培养(three-dimensionalcellculture，凋亡明显；另有研究利用游离脂肪酸诱导细胞损TDCC)是指在体外将细胞与具有三维结构的材料[30]伤，具体参考文献。共同培养，构成三维的细胞-载体复合物，使细胞2.2.6βHC细胞系能够呈空间立体方式迁移、生长，以期更好的模βHC来自SV40大T抗原转基因小鼠10周龄时拟体内生长模式。目前培养系统较为完善的是动增生的胰岛，保留了正常的GSIS能力及完整的葡力性三维细胞培养，既能够保留体内细胞微环境萄糖信号转导途径，是研究β细胞GS1S机制的理的物质结构基础和功能，又能体现细胞培养的直 512临床与病理杂志,2016,36(4)http://lcbl.amegroups.com观性及条件的可控性。主要应用于组织形成、血International,2014,8(1):23-38.管生长、器官再生移植、肿瘤生物学、筛选新药2.吴青松,李治国,刘广波,等.一种简易的人原代肝细胞分离培养[31]方法[J].中国组织工程研究,2012,16(18):3301-3304.的疗效分析和毒理实验等研究领域。陈旭春等采用动力性三维培养方法对大鼠胰腺导管来源干WUQingsong,LIZhiguo,LIUGuangbo,etal.Asimplemethodfor细胞(PDSC)进行培养，发现细胞产量高、贴壁humanprimaryhepatocytesseparation[J].ChineseJournalofTissue[32]EngineeringResearch,2012,16(18):3301-3304.好、细胞生物活性好。黄仁平等将3D肽纳米纤维水凝胶支架与胰岛细胞共同培养，结果细胞形3.SommerfeldA,ReinehrR,HäussingerD.Freefattyacidsshift态、活性及分泌功能均良好，延长了细胞在体外insulin-inducedhepatocyteproliferationtowardsCD95-dependent[33]apoptosis[J].JBiolChem,2015,290(7):4398-4409.的生存时间。朱沙俊等将小鼠MIN6细胞与全肝脏脱细胞支架来重建胰岛素分泌器官，为体外生4.WanningerJ,NeumeierM,WeigertJ,etal.Adiponectin-stimulated物器官支架构建提供了进一步的理论依据。CXCL8releaseinprimaryhumanhepatocytesisregulatedbyERK1/ERK2,p38MAPK,NF-κB,andSTAT3signalingpathways[J].Physiol,4共培养2012,302(3):G406.5.KapoorR,SinghS,TripathiM,etal.O-hexadecyl-dextranentrapped共培养是将2种或2种以上的细胞共同培养，berberinenanoparticlesabrogatehighglucosestressinducedapoptosis诱导细胞自身分化或向另一种细胞分化，维持细胞inprimaryrathepatocytes[J].PLoSOne,2014,9(2):e89124.活力和功能，调控细胞增殖，促进早期胚胎的发育6.IshiiM,MaedaA,TaniS,etal.Palmitateinducesinsulinresistance及提高代谢产物的产量等。不仅可以直观的观察细inhumanHepG2hepatocytesbyenhancingubiquitinationand胞之间复杂的相互反应，还可以准确的反映整体情proteasomaldegradationofkeyinsulinsignalingmolecules[J].Arch况。主要用于药物研发、生物制药等研究。宋焕瑾BiochemBiophys,2015,566:26-35.[34]7.YuasaT,AmoK,IshikuraS,etal.Developmentofinvitromodelof等通过体外共培养胰岛和血管内皮细胞，发现胰岛细胞的活性及胰岛素释放实验得以改善，为临insulinreceptorcleavageinducedbyhighglucoseinHepG2cells[J].床大量开展胰岛移植术的可行性提供了依据。另有BiochemBiophysResCommun,2014,445(1):236-243.[35]8.谢洁,杨瑞仪.地塞米松体外诱导胰岛素抵抗细胞模型的建研究者分别以骨髓间充质干细胞及肌源性干细[36]立[J].科技通报,2015,31(10):31-33.胞同胰岛细胞共培养，具体参考文献。XIEJie,YANGRuiyi.Insulinresistancemodelinduceddexamethasone5结语invitrocell[J].BulletinofScienceandTechnology,2015,31(10):31-33.9.WuXB,PengCH,HuangF,etal.Preparationandcharacterizationof综上所述，目前国内外建立的体外糖尿病chitosanporousmicrocarriersforhepatocyteculture[J].Hepatobiliary细胞模型通过高胰岛素、高糖、高游离脂肪酸、PancreatDisInt,2011,10(5):509-515.STZ、地塞米松、AXN等因素从氧化应激、甲基10.YuH,WuM,LuFR,etal.Effectoftrigonellafoenum-graecum化损伤等方面来诱导细胞损伤及胰岛素抵抗，三4-hydroxyisoleucineonhigh-glucoseinducedinsulinresistancein3T3-维培养和共培养方法为体外细胞模拟真实的机体L1adipocytesofmice[J].ZhongguoZhongXiYiJieHeZaZhi,2013,环境。然而，在相同的诱导因素下不同类型的细33(10):1394-1399.胞发生IR及胰岛细胞受损的程度及机理也不尽相11.SheM,HouH,WangZ,etal.Melatoninrescues3T3-L1adipocytes同，因此，对于有关糖尿病发病机制的结论也就fromFFA-inducedinsulinresistancebyinhibitingphosphorylationof有所争议。所以，建立不同类型的糖尿病细胞模IRS-1onSer307[J].Biochimie,2014,103:126-130.型就十分必要。这为研究糖尿病具体发病机制、12.GogoiB,ChatterjeeP,MukherjeeS,etal.Apolyphenolrescueslipid药物预防或延缓糖尿病及其并发症的筛选奠定一inducedinsulinresistanceinskeletalmusclecellsandadipocytes[J].定的细胞基础。BiochemBiophysResCommun,2014,452(3):382-388.13.KimJ,ParkY,YoonKS,etal.PermethrinAltersAdipogenesisin3T3‐L1AdipocytesandCausesInsulinResistanceinC2C12Myotubes[J].参考文献JBiochemMolToxicol,2014,28(9):418-424.14.MohankumarSK,TaylorCG,ZahradkaP.Domain-dependent1.DamaniaA,JainE,KumarA.Advancementsininvitrohepaticmodels:modulationofinsulin-inducedAS160phosphorylationandglucoseapplicationfordrugscreeningandtherapeutics[J].HepatologyuptakebyCa2+/calmodulin-dependentproteinkinaseIIinL6 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