牡蛎酶解液的抗氧化活性研究

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1、牡蛎酶解液的抗氧化活性研究作者：雷丹青周先果张辉杨琴【摘要】目的探讨牡蛎酶解液的抗氧化活性。方法用普鲁士蓝反应法测定牡蛎酶解液还原能力，在DPPH体系、Fenton体系和邻苯三酚自氧化体系中分别检测牡蛎酶解液清除二苯代苦味酰自由基（DPPH·）、羟基自由基（·OH）和超氧阴离子（O2―·）的能力，并考察牡蛎酶解液在Fe2+诱发卵黄脂蛋白过不饱和脂肪酸（PUFA）过氧化体系中的抗氧化作用。结果牡蛎酶解液清除DPPH·和·OH的EC50分别为7.313和1.330mg/ml；牡蛎酶解液（17.800mg/ml）对超氧自由基和卵黄脂蛋白脂质过氧化的抑制率分别为19.86%和82.97%。结论牡蛎酶解

2、液具有显著的清除DPPH·和·OH作用，且活性与剂量呈正相关，并对卵黄脂蛋白脂质过氧化也显示出了较强的抑制作用。【关键词】牡蛎酶解自由基抗氧化现代医学研究表明，适量的自由基在免疫反应、细胞分化、细胞凋亡和其它生化代谢过程中起着重要的作用，然而过量的自由基则在机体中引起一系列生物学反应，导致组织细胞、亚细胞和分子结构的破坏，并随着破坏层次逐渐扩展造成功能损伤，引起心血管疾病、癌症和衰老等，它是构成很多疾病的病理学基础。因此合理地使用抗氧化剂可以有效地预防和治疗某些疾病，延缓衰老。合成抗氧化剂往往具有一定的毒副作用，使得它们的使用受到严格控制。而天然抗氧化剂副作用较小，因此，寻找高效、价廉、低毒甚

3、至无毒的天然抗氧化剂的工作备受人们关注。目前，抗氧化活性肽是天然抗氧化剂研究热点之一，而且现在大部分抗氧化活性肽是通过蛋白酶在温和条件下水解蛋白质而获得，食用安全性高，比较符合现代人所追求的健康饮食的理念。牡蛎（oyster）俗称海蛎子、蚝等，是世界上第一大养殖贝类，也是我国四大养殖贝类之一。牡蛎肉的主要营养成分为蛋白质和糖原，含量分别为50.63%和22.41%；其氨基酸组成完善，8种必需氨基酸含量占氨基酸总量的40%，而且还含有丰富的牛磺酸。此外，牡蛎肉中还含有多种矿物质和微量元素，其中锌和硒的含量丰富［1］。我国牡蛎资源丰富，且其蛋白质含量高，是采用酶解法制备生物活性肽的良好原料。本文就

4、牡蛎酶解液的抗氧化活性进行全面地评估，为我国的牡蛎资源充分开发利用奠定基础。1材料与仪器1.1材料牡蛎（购于南宁海鲜批发交易市场）；胰蛋白酶（1：250，牛胰，Amresco分装）；二苯代苦味酰基(DPPH，1,1-Diphenyl-2-picrylhydrazyl，购自Sigma公司)；番红O（SafraninO，AMRESCO，上海生工生物工程有限公司）；2-硫代巴比妥酸（生化试剂，国药集团化学试剂有限公司）；铁氰化钾、硫脲、H2O2、EDTA二钠盐、焦性没食子酸等均为国产分析纯。1.2仪器LAMBDABIO20型紫外-可见分光光度计（美国PE公司）；DS-1高速组织匀浆机（上海标本模型厂

5、）；TOMYRS-20Ⅱ型高速冷冻离心机（TOMYSEiKOCO.,LTD）；HH-g∶ml）比例加入预冷的双蒸水，高速匀浆，加酶量为2％，在pH8.0（用0.2NNaOH调节），45℃条件下，酶解6h后，沸水浴灭活10min，冷却，最后以7000～8000r/min，4℃离心30min，取上清液分装，即得牡蛎酶解液，冷藏备用。牡蛎酶解液的蛋白含量测定采用Folin-酚试剂法［3］。2.2牡蛎酶解液还原能力的测定［4］采用普鲁士蓝反应法测定牡蛎酶解液的还原能力。其原理为：K3Fe()6+样品→K4Fe()6+样品氧化物K4Fe()6+Fe3+→K4［Fe()6］3(蓝色)在波长700nm条件下

6、测定吸光值A(A越大，则样品的还原能力越强)。取不同浓度的牡蛎酶解液稀释液（3.625，7.250，10.875，14.500，18.125mg/ml）1.0ml，再加入0.2mol/L，pH6.6的磷酸盐缓冲液1.0ml及1%的铁氰化钾〔K3Fe（）6〕溶液1.0ml，于50℃水浴反应20min后急速冷却，再加入质量分数为10%的三氯乙酸(TCA)溶液1.0ml，振荡均匀后，3000r/min离心10min，取上清液2.5ml，加入蒸馏水2.0ml及质量分数为0.1%三氯化铁溶液0.5ml，混合均匀，静置10min后于700nm测定其吸光值。2.3牡蛎酶解液在DPPH体系中抗氧化性的测定［5

7、］DPPH·(二苯代苦味酰基自由基)在有机溶剂中是一种稳定的自由基，其结构中含有3个苯环，1个氮原子上有1个孤对电子，呈紫色，在517nm有强吸收。有自由基清除剂存在时，DPPH·的单电子被配对而使其颜色变浅，在最大吸收波长处的吸收度变小，而且这种颜色变浅的程度与配对电子数是成化学计量关系的，因此可用与检测自由基的清除情况，从而评价实验样品的抗氧化能力。取不同浓度的牡蛎酶解液稀释液（1.780，3