子痫前期患者胎盘组织中vip及其受体1的表达及意义

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子痫前期患者胎盘组织中VIP及其受体1的表达及意义陈兰钦1胡继芬2(1福建省平潭医院妇产科350400)(2福建医科大学附一医院妇产科350005)【摘要】目的木研究的目的是研究VIP及其受体VIP・1在正常妊娠和轻、重度子痫前期患者胎盘中的变化的趋势，进一步研究VIP在子痫前期发病中的作用。方法应用免疫组织化学方法检测VIP、及其受体VIPJ在胎盘组织中的表达水平。结果在正常妊娠和轻、重度子痫前期患者胎盘中检测到了VIP及其受体VIPJ的表达，子痫前期组胎盘VIP及VIPJ的表达量显著低于对照组(P<0.01),且随着病情程度的加重，各组胎盘中VIP的表达量呈下降的趋势，重度子痫前期组胎盘VIP的表达量显著低于轻度子痫前期组(P<0.01)o结论VIP可能通过舒张血管和抗炎作用维持正常妊娠，在子痫前期发病中起重要作用。【关键词】子痫前期血管活性肠肽血管活性肠肽受体1了痫前期(preeclampsia,PE)是属于妊娠期高血压疾病(hypertesivedisordersinpregnancy)分类中较严重的一种类型，是妊娠期特有的疾病，严重影响母婴健康，是孕产妇和围牛儿病率及死亡率的主要原因。近年来许多研究发现血管活性肠肽(vasoactineintrestinalpeptide,VIP)具有多种生物学功能,并与妊娠有着密切关系［1-2］o但VIP及其受体在人妊娠胎盘中表达情况，特别是子痫前期胎盘中以及二者在子痫前期中的作用在国内外均少有研究。许多研究表明,VIP具有抗炎⑶和舒张血管［4,5］作用，而过度炎症反应、过氧化应激反应和血管活性物质失衡所致的全身小动脉痉挛是子痫前期重要的病理牛理过程。木研究采用免疫组化方法检测子痫患者胎盘组织中的VIP和VPACI受体(VIPJ受体)的表达，以探讨其与子痫前期发病的关系。资料与方法一、研究对象选择2010年8月至2011年口月在福建医科大学第一附属医院和平潭县医 院住院分娩的轻、重子痫前期各15例，平均年龄26±4.3岁，均为单胎初产，选择同期与子痫前期组年龄和孕周相匹配的单胎初产未临产剖宫产正常孕妇20例为对照组，平均年龄25±3.6岁，排除肝炎、肾病、糖尿病等产科合并症及并发症。子痫前期的诊断与分类参照丰有吉、沈铿主编的《妇产科学》供8年制及7年制临床医学等专业用第二版。二、方法1、标本的收集及处理两组孕妇均在胎盘娩出5分钟内取胎盘标本，无菌状态下在胎盘母面距脐带附着处2cm避开钙化坏死区，取胎盘组织块约lcm×lcm×lcm,生理盐水漂洗后，用10%甲醛固定，常规石蜡包埋切片。2、第二代通用型二步法免疫组织化学检测兔抗人血管活性肠肽抗体（4200）、兔抗人血管活性肠肽受体抗体（1：100）、第二代通用型二步法检测系统（pv・9000）、DAB显色剂均购自北京博奥森生物技术公司，按试剂说明书操作，以PBS液代替--抗作阴性对照。3、免疫组织化学分析方法以肺部组织为阳性对照，以PBS代替一抗为阴性对照。由两位病理科医师盲法阅片，显微镜400倍镜下随机观察10个视野，每个视野计数100个细胞数中的阳性细胞数。判定标准：①染色程度分为4级：基本不着色者为0分，着色淡者为1分,着色适中者为2分，着色深者为3分;②着色细胞占计数百分率：≤5%为0分，6%-25%为1分，26-50%为2分，≥51%为3分。将滋养叶细胞着色程度与着色百分率得分乘积结果分为：0J为阴性，2・3为+,4・6分为++,6分以上为卄+。其中小于++为低表达，大于++为高表达。三、结果1、VIP及其受体1在胎盘中表达定位分析VIP在对照组胎盘组织中，主要表达于胎盘合体滋养细胞（附图1）、蜕膜细胞的细胞浆及细胞膜，胎盘绒毛内血管内皮细胞及间质细胞周围的平滑肌细胞等未见到 VIP的阳性表达。子痫前期组胎盘VIP在表达部位上与对照组无明显差异，但表达明显减弱(附图2、3)。VIP受体1与VIP在胎盘组织中的在表达部位上一致(附图4)。子痫前期组胎盘VIP在表达部位上与对照组无明显差异，但表达明显减弱(附图5、6)o2、各组胎盘组织VIP及其受体1表达量的比较子痫前期组胎盘VIP的表达量显著低于对照组(P<0.01),口随着病情程度的加重，各组胎盘中VIP的表达量呈下降的趋势，重度子痫前期组胎盘VIP的表达量显著低于轻度子痫前期组(P<0・01)。(见表1,图表1)o子痫前期组胎盘VIP受体1的表达与对照组比较，差异有统计学意义(P<0.01)«轻、重度子痫前期组之间胎盘VIP受体1的表达水平比较，差异有统计学意义(P<0.01)o(见表1,图表2)o表1各组胎盘组织中VIP及其受体1表达情况P<0.01四、讨论子痫前期是妊娠期特有的疾病，据近年来报道我国发病率达9.4%-10.4%[7],此病严重影响母婴健康，是孕产妇和围生儿病率及死亡率的主要原因。尽管提出免疫学说、滋养细胞缺血学说、血管活性物质失衡、遗传学说等多种病因学说，但没有种学说或理论能够完全解释其所有的病理生理过程及临床表现，从而对寻找理想的预防、预测、诊断、治疗方法带来一定的困难。血管活性肠肽(vasoactineintrestinalpeptide,VIP)是1970年Said和Mutt⑻首次从猪小肠的甲醇抽提液中经分离纯化得到，1971年Carlquist从人体中也提取并分离纯化出，1975年其氨基酸序列被确定，并被人工合成⑼。近年来许多研究发现血管活性肠肽(vasoactineintrestinalpeptide,VIP)具有舒张血管、收缩心脏、促进全身血液流动、降低血压、减少外周血管的阻力的胃肠道激素功能[10]、引起觉醒效应、提高体 温、激活脑组织腺昔酸环化酶的神经肽作用以及维持促炎・抗炎细胞因子平衡等多种生物学功能，并与妊娠有着密切关系。血管活性肠肽，又名舒血管肠肽，是由28个氨基酸组成的直链肽，相对分子量是3323Da,属于胰泌素■胰高糖素家族。其竣基端是VIP分子与其受体结合的部位,氨基端是分子的活性部位，其末端的组氨酸残基对激活受体极为重要，缺少氨基端的VIP片段（如VIP6-28）虽能与其受体结合，但无VIP生物活性，可作为VIP的拮抗剂［ll］oVIP为单拷贝基因，定位于第6号染色体长臂近末端处，基因长为8837bp［12］,广泛分布于循环、免疫、生殖、消化系统以及中枢、外周神经系统中。VIP受体是一种与G蛋白偶联的含有362个氨基酸的跨膜糖蛋白，与IL-8受体属同一家族。VIP的受体分为3类:VPACI受体（VIPJ受体）、VPAC2受体（VIP・2受体）、PAC1受体，PAC1受体对与VIP结构相似的PACAP（垂体腺昔酸环化酶激活肽（pituitaryadenylatecyclaseactivatingpeptide,PACAP）的亲和力比对VIP要高300〜1000倍，它可以与腺昔酸环化酶和磷酯酶c系统等多种细胞内传导系统耦联。3种受体同属于G蛋白耦联受体II,也称之为胰泌素受体家族［14］。2010（13］年郝建军等研究［15］表明在妊娠期大鼠子宫中5-HT和VIP及其受体的表达中发现VIP和VIP_2受体免疫阳性产物广泛存在于子宫内膜上皮细胞、子宫腺细胞、子宫螺旋动脉、血管内皮细胞、血管平滑肌细胞、基质细胞、蜕膜细胞、免疫细胞及肌纤维中。本文的免疫组化研究表明在正常妊娠的胎盘绒毛及蜕膜组织中有VIP及其受体VPACI受体和VPAC2受体高度表达，且定位于胎盘合体滋养细胞及蜕膜细胞的胞浆和胞膜，同时绒毛血管内皮细胞及部分绒毛间质细胞也有VIP的表达，且VIP的半衰期为1分钟，因此胎盘组织内存在VIP及其受体的自分泌及旁分泌调节系统。本文的研究表明，子痫前期组胎盘VIP的表达量显著低于同期正常妊娠组，且随着病情程度的加重，各组胎盘中VIP表达量呈下降的趋势，重度子痫前期患者胎盘VIP表达量显著低于轻度子痫前期患者。VIP的表达异常可能在子痫前期的发生发展中起重要作用。一方面，VIP具有舒张血管、收缩心脏、促进全身血液流动、降低血压、减少外周血管的阻力的胃肠道激素功能［16］,VIP的舒张血管作用有一氧 化氮（NO）相关途径和非NO相关途径两种［17］。而研究已证明，妊娠期NO合成增加，以满足妊娠期生理过程的需要,胎盘是妊娠期NO的重要来源［18］o胎儿■胎盘循环因无神经支配，其血流量只受体液激素因子或自分泌■旁分泌激素机制的调节,NO是这种机制的关键因子［19］。在本研究中显示胎盘绒毛及蜕膜组织中有VIP与其受体的高表达，说明在胎盘中存在VIP和NO同时参与舒张血管作用机制，即NO相关途径的VIP舒血管作用：VIP与其特异性受体结合后产生级联放大效应，结合抑制性G蛋白(Gi)刺激82+内流，从而激活Ca2+/钙调蛋白依赖性内皮型NOS(内皮型一氧化氮合酶，eNOS),导致NO(—氧化氮)合成增加,再进一步激活鸟昔酸环化酶(GC),使细胞内cGMP(环■磷酸鸟昔)含量增加，活化cGMP依赖的蛋白激酶G(PKG),PKG和cAMP依赖的蛋白激酶(PKA)共同作用于平滑肌，使之舒张，起到舒张血管作用。本研究也发现在子痫前期患者胎盘VIP表达下降且在重度子痫前期中更显著，这也进一步支持子痫前期患者胎盘中NO及其胎盘eNOSmRNA的转录强度均显著低于正常妊娠妇女的病理生理［20］。另一方面，VIP具有维持促炎■抗炎细胞因子平衡作用，已证明VIP能抑制白介素(IL・8)、肿瘤坏死因子・a(TNF-a)、白介素・6(IL・6)、白介素・2(IL-2)的产生，促进抗炎因子白介素JO(IL-10)产生，并且能抑制由内毒素激活的巨噬细胞产生NO。Delgado等［21］研究发现在mRNA的水平上VIP以剂量和吋间依赖的方式能抑制TNF-aJL-8的产生，这种抑制效应是由特异VPACI受体介导的。在子痫前期患者胎盘中，IL・8、TNF-a.IL・2和趋化因子的表达均增强和抗炎因子IL-10表达下降，而本研究中发现VIP在子痫前期患者胎盘中表达下降，这符合过度炎症反应及过氧化应激反应是血管内皮损伤主要的病理生理过程，因此可推断VIP可能参与子痫前期发病中血管内皮损伤的作用。综上所述，VIP及受体VIP-1可能通过舒张血管和维持促炎■抗炎细胞因子平衡的作用来维持正常妊娠，在子痫前期发病中起重要作用。但是，在子痫前期VIP及受体与血管舒张因子及促炎因子和抗炎因子的相互作用有待后续研究,并为进一步开发子痫前期的治疗方法提供理论依据。参考文献 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