壳寡糖对大鼠肠缺血再灌注损伤的保护作用

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1、温州医学院硕士学位论文壳寡糖对大鼠肠缺血再灌注损伤的保护作用中文摘要目的：通过建立大鼠轻度和重度肠缺血再灌注(ischemia／reperfusion，I／R)损伤模型，探讨壳寡糖对I／R损伤肠黏膜屏障功能的保护作用及其可能的作用机制，为壳寡糖治疗肠I／R损伤提供一定的实验基础和理论依据。方法：选用40只清洁级雄性SD大鼠，体重250-3009。实验动物随机分为5组(每组8只)：①A组：假手术组(仅分离肠系膜上动脉不夹闭)；②B组：重度缺血再灌注组(夹闭肠系膜上动脉2h后再灌注2h)；③C组：轻度缺血再灌注组(夹闭

2、肠系膜上动脉30min后再灌注30min)；④D组：重度缺血再灌注+壳寡糖预处理组；⑤E组：轻度缺血再灌注+壳寡糖预处理组；A、B、C三组按lOml／kg体重生理盐水灌胃，D、E两组给予壳寡糖1500mg／kg体重灌胃，每日1次，连续5日，造模前30rain灌胃一次。所有动物术前12／J'．时禁食，自由饮水。大鼠常规腹腔注射麻醉，经腹正中切口，暴露并分离肠系膜上动脉(superiormesentericartery，SMA)，无损伤动脉夹夹闭其起始部，缝合切口，旁照灯保暖。在进行S姒夹闭期间，间断地向腹腔内注射生理

3、盐水，总量约15--一，20mi／kg体重以保持血流动力学稳定。到达相应时间点后经原切口进腹，取出动脉夹，恢复血供，依次关闭切口。假手术组进行同样操作但不夹闭肠系膜上动脉。实验结束后立即抽取下腔静脉血3ml，室温放置15min后4℃下3000rpm离心15min，分离血清，-70℃保存备用，待做DA0测定；取距回盲部lOam以内的一部分肠标本，用生理盐水漂洗干净，滤纸吸干，电子天平称重，按每lg组织添2口PBSIOml的比例，低温下用高速电动匀浆机匀浆30s后，立即4℃下3000rpm离，b30min后取上清液，-

4、70℃保存备用，做SOD、MDA、御0测定。取小肠回盲部lOcm以上的肠管，经冰生理盐水漂净，滤纸吸干，延肠管长轴切开，用玻片轻轻刮取肠黏膜部分，准确称取小肠黏膜组织，用PBS制成10％组织匀浆，低温离心，取上清液，-70℃保存备用，做SIgA测定。距回盲部lOam处取相同肠段1．Ocm，4％多聚甲醛固定，梯度酒精脱水，透明后石蜡包埋，待做切片。结果：1．假手术组大鼠肠绒毛完整，形态正常，上皮下间隙无扩张；重度缺血再灌注模型组大鼠肠绒毛上皮顶端与固有层分离，肠绒毛顶端破裂，伴固有层毛细血管暴露、出血和溃疡，固有层炎

5、性细胞增多；轻度缺血再灌注模型组较重度模型组病理改变轻。壳寡糖干预的轻度及重度I／R组肠绒毛病理改变分别较轻、重度I／n模型组明显减轻，但仍可见肠绒毛顶端破裂，固有层出血和炎症细胞浸润。2温州医学院硕士学位论文2．缺血再灌注后，B组肠组织中SOD含量为(27．68±8．60)u／lOOmg。C组肠组织中SOD含量为(44．00_12．74)u／lOOmg，与A组假手术组肠组织中SOD含量为(85．88±6．95)u／lOOmg相比较，差异有显著性(尺O．01)。D组肠组织中SOD含量为(45．58±7．26)u／1

6、00mg，较B组明显增加(P<0．01)。E组肠组织中SOD含量为(65．39±6．37)u／lOOmg，较C组明显增N(P

7、8±0．49)nmol／mg，较C组明显下降(尸<0．01)。4．肠缺血再灌注后，B组肠组织中MPO含量为(1．10±0．43)ng／mg，C组肠组中MPO含量为(O．83±0．46)ng／mg，与A组假手术组肠组织中MPO含量为(0．62±0．33)ng／mg相比较，差异有显著性(尸

8、为(O．86±0．10)u／ml，C组血清中DAO含量为(0．65±0．09)u／ml，与A组假手术组血清中DAO含量为(0．37±0．39)u／ml相比较，差异有显著性(尸<0．01)。D组血清中DAO含量为(0．73±0．95)u／ml，较B组明显下降(尸<0．01)。E组血清中DAO含量为(0．49±0．83)u／ml，较C组明显下降(尸<0．01)。